VACUNAS CONTRA LA BORDETELLA BRONCHISÉPTICA.

Una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado mediante adición de formalina seguido de adición de glutaraldehído

La invención se refiere a una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchispetica que se ha inactivado añadiendo formalina seguido de la adición de glutaraldehído. La invención también se refiere a una composición de vacuna que comprende dicha composición de antígeno y un adyuvante. Antecedentes de la invención La generación de inmunidad a organismos infecciosos es una potente herramienta en el control de enfermedades. Los antígenos que inducen inmunidad a la infección se conocen como inmunógenos. Los anticuerpos protectores que inducen los antígenos pueden colaborar con otras defensas naturales para inhibir el proceso infeccioso, o éstos pueden neutralizar productos perjudiciales en el organismo infectado tales como toxinas. Un medio eficaz para mejorar la respuesta de anticuerpos es el uso de un adyuvante. Así, se incluye un adyuvante en una vacuna como un aditivo o vehículo para mejorar la respuesta al antígeno. Un adyuvante puede actuar por diferentes mecanismos que incluyen, (1) atrapar al antígeno en el cuerpo causando una liberación lenta, (2) atraer las células del sistema inmune hacia el sitio de inyección, (3) estimular las células del sistema inmune para que proliferen y se activen y, (4) mejorar la dispersión del antígeno en el cuerpo del receptor. Como adyuvantes se han usado una serie de agentes con diversas propiedades químicas, incluyendo emulsiones "agua en aceite" y "aceite en agua", sales minerales, polinucleótidos y sustancias naturales. Un adyuvante, conocido con el nombre comercial AMPHIGEN TM , se describe en la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269. El adyuvante AMPHIGEN TM está compuesto por una lecitina exenta de glicéridos disuelta en un aceite, normalmente parafina líquida clara. En preparaciones de vacuna, AMPHIGEN TM se dispersa en una solución o suspensión acuosa del antígeno inmunizante en forma de una emulsión "aceite en agua". Cuando se usó el adyuvante AMPHIGEN TM según la patente de los Estados Unidos nº 5.084.269 anterior se observaron problemas. Por ejemplo, la lecitina en el AMPHIGEN TM no es suficiente para producir una emulsión estable del aceite, dando lugar así a un acúmulo o depósito de aceite en los tejidos en los que se ha inyectado. El aceite mineral no puede ser metabolizado o eliminado por el animal. Como resultado, el aceite se convierte en el origen de una grave inflamación crónica y de aparición de marcas. La emulsificación del AMPHIGEN TM directamente en la preparación de antígeno tiene el riesgo de dañar al antígeno. Además, si la emulsión deseada no se llega a formar, se deberá desechar el antígeno valioso. El documento US 4.888.169 describe una composición de vacuna que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado añadiendo sólo glutaraldehído. El documento US 5.578.308 describe la inactivación (detoxificación) de toxina Bordetella purificada usando glutaraldehído seguido de formalina en presencia de aminoácidos. Sumario de la invención La invención se refiere a una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado añadiendo formalina seguido de la adición de glutaraldehído. La invención también se refiere a una composición de vacuna que comprende dicha composición de antígeno y un adyuvante. De forma particular, la invención se refiere a dicha composición de vacuna, en la que dicho adyuvante comprende de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% en volumen/volumen (v/v) de una lecitina, de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% v/v de un aceite, y de aproximadamente 1,5% a aproximadamente 3,5% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico. En una primera realización la invención proporciona un procedimiento de inactivación de un cultivo de Bordetella bronchiseptica que comprende la adición de formalina a dicho cultivo seguido de la adición de glutaraldehído a dicho cultivo. En una segunda realización la invención proporciona una composición de Bordetella bronchiseptica que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica, formalina y glutaraldehído. En una tercera realización la invención proporciona una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento anterior efectivo para proteger dicho mamífero contra una infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable. Preferiblemente la vacuna comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica, más preferiblemente aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica. 2 E05023118 28-12-2011   En una cuarta realización la invención proporciona una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento anterior efectivo para proteger dicho mamífero frente a infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable, en el que dicha vacuna comprende además aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de una cantidad de antígenos de Pasteutella multocida efectivo para proteger el mamífero frente a una infección por Pasteutella multocida toxigénica. Preferiblemente la vacuna comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de Pasteutella multocida toxigénica, más preferiblemente aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de antígenos de Pasteutella multocida toxigénica. Preferiblemente, la vacuna de la cuarta realización es para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteutella multocida toxigénica. También se proporciona con la invención el uso de la vacuna de la cuarta realización en la preparación de una vacuna para la protección de un cerdo frente a infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteutella multocida toxigénica. Se proporciona también el uso de la vacuna de la cuarta realización, en la preparación de una vacuna para la protección de un lechón frente a rinitis atrópica mediante: a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la cuarta realización, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti- Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón. Se proporciona también la vacuna de la cuarta realización para la protección de un cerdo frente a rinitis atrópica mediante: a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la cuarta realización, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti-Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón. El adyuvante usado en la invención comprende una lecitina, un aceite y un tensioactivo anfifílicos capaz de emulsionar el adyuvante, por ejemplo, un Tween o un tensioactivo Span. En otro aspecto preferido el tensioactivo es Tween 80, Tween 85, Span 80 o Span 85. En otro aspecto el adyuvante comprente una lecitina, un aceite y dos tensioactivos anfifílicos capaces de emulsionar el adyuvante o una composición de vacuna que contiene el adyuvante. En un aspecto preferido uno de los dos tensioactivos se encuentra principalmente en la fase acuosa, por ejemplo, Tween 80, y el otro tensioactivo se encuentra principalmente en la fase oleosa, por ejemplo, Span 80. Una lecitina es un fosfátido. Las preparaciones no purificadas de lecitina pueden incluir triglicéridos. A efectos de la presente invención, "lecitina" incluye tanto las preparaciones purificadas como las no purificadas. En un aspecto preferido, la lecitina está exenta de glicéridos. Aceites adecuados incluyen un aceite mineral, por ejemplo el aceite mineral ligero DRAKEOL TM . En un aspecto adicional, el adyuvante de la invención contiene una solución de vehículo acuosa, por ejemplo, un tampón fisiológicamente aceptable, agua o una solución salina. En una realización preferida, el adyuvante de la invención contiene una lecitina, un aceite mineral, dos tensioactivos anfifílicos y una solución... [Seguir leyendo]

1. Una composición de antígeno que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica que se ha inactivado mediante adición de formalina seguido de adición de glutaraldehído. 2. Una composición de vacuna que comprende la composición de antígeno de la reivindicación 1 y un adyuvante. 3. La composición de vacuna de la reivindicación 2, en la que dicho adyuvante comprende de aproximadamente 0,25% a aproximadamente 12,5% en volumen/volumen (v/v) de una lecitina, de aproximadamente 1% a aproximadamente 23% v/v de un aceite y de aproximadamente 1,5% a 3,5% v/v de al menos un tensioactivo anfifílico. 4. Un procedimiento para inactivar un cultivo de Bordetella bronchiseptica que comprende añadir formalina a dicho cultivo, seguido de la adición de glutaraldehído a dicho cultivo. 5. Una composición de Bordetella bronchiseptica que comprende un cultivo de Bordetella bronchiseptica, formalina y glutaraldehído. 6. Una vacuna para la protección de un mamífero frente a infección Bordetella bronchiseptica que comprende aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica de un cultivo inactivado de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 4 efectivo para proteger dicho mamífero frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y un vehículo fisiológicamente aceptable. 7. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de Bordetella bronchiseptica. 8. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 7, que comprende aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de células de Bordetella bronchiseptica. 9. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 6, que comprende además aproximadamente 1 pg a aproximadamente 100 mg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica efectivos para proteger al mamífero frente a una infección de Pasteurella multocida toxigénica. 10. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 9, que comprende aproximadamente 10 pg a aproximadamente 1 mg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica. 11. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 10, que comprende aproximadamente 100 pg a aproximadamente 1 µg por kg de huésped de antígenos de Pasteurella multocida toxigénica. 12. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchiseptica y/o una infección por Pasteuralla multocida toxigénica. 13. Uso de una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la preparación de una vacuna para la protección de un cerdo frente a una infección por Bordetella bronchispetica y/o una infección por Pasteuralla bronchiseptica. 14. Uso de una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la preparación de una vacuna para la protección de un lechón frente a rinitis atrófica mediante: a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la reivindicación 9, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti- Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón. 15. Una vacuna de acuerdo con la reivindicación 9 en la protección de un lechón frente a rinitis atrófica mediante: a) vacunar una cerda antes del parto y durante la gestación con una cantidad de una vacuna según la reivindicación 9, eficaz para proporcionar anticuerpos anti-Bordetella bronchiseptica y anticuerpos anti- Pasteurella multocida toxígena en el calostro producido por dicha cerda; y b) suministrar el calostro producido por dicha cerda al lechón en un período de aproximadamente 24 horas después del nacimiento del lechón. 11 E05023118 28-12-2011   12 Figura 1 E05023118 28-12-2011