Uso de un anticuerpo monoclonal, capaz de unirse específicamente a la proteína CD151,

secretado por el hibridoma registrado en la ATCC con la referencia CRL-2696, o uno de sus fragmentos funcionales, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los tumores primarios para el tratamiento precoz del cáncer.

Uso de un anticuerpo anti-CD151 para el tratamiento precoz de los cánceres

Campo técnico

La presente invención se refiere a un nuevo uso de anticuerpos anti-CD151 capaces de inhibir el crecimiento tumoral, dichos anticuerpos siendo en particular monoclonales de origen murino, quimérico y humanizado. De acuerdo con un aspecto particular, la invención tiene por objeto el uso de estos anticuerpos, o de sus fragmentos funcionales, como medicamento para el tratamiento precoz de los cánceres y en particular de los tumores primarios. La invención comprende, por último, unos productos y/o unas composiciones que comprenden este tipo de anticuerpos en asociación, por ejemplo, con unos anticuerpos y/o unos agentes anticancerosos o conjugados con unas toxinas y su uso para la prevención y/o el tratamiento de determinados cánceres.

CD151, denominado también PETA-3 o SFA-1, es una proteína mebranaria que pertenece a la familia de las tetraspaninas (Boucheix y Rubinstein, 2001, Cell Mol. Life Sci. 58, págs. 1.189-1.205; Hemler, 2001, J. Cell Biol. 155, págs. 1.103-1.107) . En el ser humano, el CD151 posee 253 ácidos aminados, y consta de 4 fragmentos membranarios y de 2 dominios extracelulares EC1 (18 ácidos aminados, secuencia [40-57] ) y EC2 (109 ácidos aminados, secuencia [113-221]) , también llamados bucles extracelulares. No obstante, hay que señalar que al nivel de la secuencia nucleotídica, a día de hoy se han identificado dos variantes para CD151, esto es uno que comprende los nucleótidos A y C respectivamente en las posiciones 395 y 409 [Fitter y otros, 1995, Blood 86 (4) , págs. 1.348-1.355] y el otro que comprende para las mismas posiciones los nucleótidos G y T en el lugar de los nucleótidos A y C [Hasegawa y otros, 1996, J. Virol. 70 (5) , págs. 3.258-3.263]. Por lo tanto, se puede observar una mutación al nivel de la secuencia peptídica, esto es una mutación de los residuos K (Lys) y P (Pro) respectivamente en las posiciones 132 y 137 en los residuos R (Arg) y S (Ser) [Fitter y ortos, 1995, Blood 86 (4) , págs. 1.348-1.355 / Hasegawa y otros, 1996, J. Virol. 70 (5) , págs. 3.258-3.263].

CD151 está sobreexpresado en numerosos cánceres, como por ejemplo los cánceres de pulmón [Tokuhara y otros, 2001, Clin. Cancer Res. 7, págs. 4.109-4.114], de colon [Hashida y otros, 2003. Br. J. Cancer 89, págs. 158-167], de próstata [Ang y otros, 2004, Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 13, págs. 1.717-1721] o de páncreas [Gesierich y otros, 2005, Clin. Cancer Res. 11, págs. 2.840-2.852].

El uso de los ratones knock-out que no expresan CD151 y de anticuerpos anti-CD151 y de siRNA para bloquear in vitro la funcionalidad y la expresión de CD151.

En diferentes tipos celulares ha permitido mostrar que CD151 está implicado en numerosos fenómenos ligados al cáncer, como la adhesión celular (Nishiuchi y otros, 2005, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, págs. 1.939-1.944; Winterwood y otros, 2006, Mol. Biol. Cell 17, págs. 2.707-2.721) , la motilidad celular (Kohno y otros, 2002, Int. J. Cancer 97, págs. 336-343) , la migración celular (Yauch y otros, 1998, Mol. Biol. Cell 9, págs. 2.751-2765; Testa y otros, 1999, Cancer Res. 59, págs. 3.812-3.820; Penas y otros, 2000, J. Invest. Dermatol. 114, págs. 1.126-1.135; Klosek y otros, 2005, Biochem. Biophys. Res. Commun. 336, págs. 408-416) , la invasión celular (Kohno y otros, 2002, Int. J. Cancer 97, págs. 336-343; Shiomi y otros, 2005, Lab. Invest. 85, págs. 1.489-1.506; Hong y otros, 2006, J. Biol. Chem. 281, págs. 24.279-24.292) y la angiogénesis (Yanez-Mo y otros, 1998, J. Cell. Biol. 141, págs. 791804; Sincock y otros, 1999, J. Cell Sci. 112, págs. 833-844; Takeda y otros, 2006, Blood) .

Una de las notables propiedades de las tetraspaninas es su capacidad para asociarse entre sí, así como a un número importante de otras moléculas de superficie para formar unos compuestos macromoleculares estructurados. En el interior de estos compuestos, cada tetraspanina está específicamente asociada a una o varias moléculas de superficie que forman de este modo unos compuestos primarios, formados por una tetraspanina y por una molécula colaboradora. Las tetraspaninas pueden organizar unos microdominios particulares de la membrana plásmica en el interior de los cuales estas reclutarían a sus socios moleculares que podrían acoplarse funcionalmente. El conjunto de las interacciones que implican las tetraspaninas se ha denominado «red de tetraspaninas» o «Tetraspanin Web».

CD151 interactúa en la superficie de las células con diferentes proteínas mebranarias. Unos compuestos muy estables, resistentes a la acción de determinados detergentes, se han puesto en evidencia en particular con las integrinas receptores de las lamininas, y de manera más particular con las integrinas a3º1 o a6º4 cuyo ligando preferente es la laminina 5 (Yauch y otros, 1998, Mol. Biol. Cell 9, págs. 2.751-2.765; Lammerding y otros, 2003, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, págs. 7.616-7.621) . Esta asociación implica los dominios extracelulares de CD151 y de las integrinas. La secuencia QRD [194-196] de CD151, localizada en el bucle EC2, es muy importante en esta asociación ya que la mutación de este punto provoca la pérdida de la interacción con determinadas integrinas (Kazarov y otros, 2002, J. Cell Biol. 158, págs. 1.299-1.309) . Unos compuestos ternarios funcionales CD151/integrina a6º4/c-Met (receptor del HGF) , por otra parte, se han puesto en evidencia en las células tumorales (Klosek y otros, 2005, Biochem. Biophys. Res. Commun. 336, págs. 408-416) . La inhibición de la expresión de CD151 mediante el tratamiento de las células con el ARN de interferencia provoca una inhibición del crecimiento y de la migración celular inducida por HGF.

Las interacciones en el interior de una misma célula de CD151 con otras tetraspaninas, necesarias para la formación de la red de las tetraspaninas, dependerían de las zonas membranarias y citoplásmicas de CD151 puesto que se ha demostrado que la deleción del bucle EC2 no rompía la asociación de CD151 con otras tetraspaninas (Berditchevski, 2001, J. Cell. Sci. 114, págs. 4.143-4.151) .

CD151 es capaz de regular los fenómenos de adhesión, de migración y de invasión celular mediante la modulación de diferentes vías de señalización, como por ejemplo la vía de los fosfoinosítidos por medio de una asociación con la PI4-kinasa (Yauch y otros, 1998, Mol. Biol. Cell. 9, págs. 2.751-2.765) , la vía de señalización de c-Jun por medio de la fosforilación de FAK, Src, p38-MAPK y JNK (Hong y otros, 2006) , la fosforilación de las integrinas mediante la PKC (Zhang y otros, 2001, J. Biol. Chem. 276, págs. 25.005-25.013) , la activación de GTPasas de la familia Rho (Shigeta y otros, 2003, J. Cell Biol. 163, págs. 165-176) .

Unas interacciones de tipo homofílico entre células son también responsables de un aumento de la motilidad celular y de la expresión de la metaloproteinasa MMP-9 (Hong y otros, 2006) . Estas interacciones intercelulares CD151-CD151 provocan la activación de c-Jun por medio de la fosforilación de FAK, Src, p38-MAPK y JNK.

A día de hoy, a pesar del interés de la proteína CD151, se han generado dos anticuerpos con fines terapéuticos, esto es los anticuerpos monoclonales 50-6 y SFA1.2B4. Estos 2 anticuerpos poseen unas actividades comparables. En efecto inhiben la formación de las metástasis in vivo en unos modelos animales, pero no se ha puesto en evidencia ningún efecto sobre el crecimiento tumoral in vivo.

El anticuerpo monoclonal 50-6 (isotipo IgG1) dirigido contra CD151 se ha generado en los ratones mediante inmunizaciones sustractivas con unas células humanas de carcinoma epidermoide HEp-3 (Testa y otros, 1999, Cancer Res. 59, págs. 3.812-3.820) .

El anticuerpo 50-6 es capaz de inhibir in vitro la migración de las células humanas de carcinoma cervical HeLa transfectadas con el objetivo de sobreexpresar CD151 y unas células HEp-3, y la angiogénesis en un modelo de neovascularización de membrana corioalantoica inducida por el bFGF (basic fibroblast growth factor) . Este inhibe in vivo las metástasis inducidas mediante la inoculación de células HEp-3 en 2 modelos de embrión de pollo (Testa y otros, 1999, Cancer Res. 59, 3.812-3.820) . En estos modelos, la actividad inhibidora del anticuerpo 50-6 está determinada por la medición de la actividad de la proteína huPA (human urokinase-type plasminogen activator) en unos extractos de pulmones. Según los autores, esta dosificación constituye el reflejo de la presencia de células humanas en los pulmones. Tras la dosificación,... [Seguir leyendo]

1. Uso de un anticuerpo monoclonal, capaz de unirse específicamente a la proteína CD151, secretado por el hibridoma registrado en la ATCC con la referencia CRL-2696, o uno de sus fragmentos funcionales, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los tumores primarios para el tratamiento precoz del cáncer.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, que está caracterizado porque dicho anticuerpo es capaz de inhibir la actividad promotora de metástasis de dicha proteína CD151 en el interior de las células tumorales.

3. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que está caracterizado porque dichos cánceres consisten en los cánceres de colon, de pulmón, de próstata o de páncreas.

4. Composición que está caracterizada porque esta comprende como principio activo al menos un anticuerpo monoclonal, capaz de unirse específicamente a la proteína CD151, secretado por el hibridoma registrado en la ATCC con la referencia CRL-2696, o uno de sus fragmentos funcionales, para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de los tumores primarios.

5. Composición de acuerdo con la reivindicación 4, que está caracterizada porque esta comprende al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.

6. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 o 5, que está caracterizada porque esta comprende, además, como producto de combinación para un uso simultáneo, separada o escalonada en el tiempo, al menos un agente citotóxico/citostático y/o una toxina celular y/o un radioelemento.

7. Composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, que está caracterizada porque esta comprende, además, al menos un segundo anticuerpo anti-tumoral.

8. Uso de una composición de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento precoz del cáncer.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, que está caracterizado porque dicho cáncer se selecciona entre el cáncer de colon, de pulmón, de próstata y de páncreas.

HOJA DE SUSTITUCIÓN (NORMA 26)

HOJA DE SUSTITUCIÓN (NORMA 26)

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