Composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de cáncer,

que comprende un anticuerpo anti IL-13 humana antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a IL-13 humana, en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 que se designa con el número de depósito de la ATCC PTA-5657 para unirse a IL-13.

Tratamiento de cáncer con anticuerpos monoclonales anti-IL13 novedosos

Antecedentes

IL13 es una citocina de Th2 pleiotrópica producida predominantemente por células T cooperadoras de tipo 2 CD4+, así como por células NKT, basófilos y mastocitos (Hershey, GKK, J Allergy Clin Immunol. (2003) 111: 677-90) . Además de sus papeles etiológicos en asma, fibrosis, enfermedad obstructiva pulmonar crónica y colitis ulcerosa Wynn, TA, Annu Rev Immunol. (2003) 21: 425-56; Wynn TA., Nat Rev Immunol. (2004) 4: 583-94; Heller F et al., Immunity (2002) 17: 629-38) , IL13 también se conoce por desempeñar papeles importantes en el crecimiento tumoral (Kapp U et al., J Exp Med. (1999) 189: 1939-4; Trieu Y et al., Cancer Res. 2004; 64: 3271-5) y en la modulación de la inmunidad tumoral (Terabe M et al., Cancer Immunol Immunother. 2004; 53: 79-85; Terabe M et al., Nat Immunol. 2000; 1: 515-20) . Por tanto, IL13 y sus receptores son dianas terapéuticas potenciales para el cáncer.

El linfoma de Hodgkin (HL) es un trastorno maligno de los ganglios linfáticos caracterizado por la producción anómala de múltiples citocinas a partir de la población celular maligna de HL, las células de Reed-Stemberg (RS) (véase Kapp et al. y Trieu et al., citado anteriormente) . Se mostró que IL13 promueve la proliferación de HL mediante un mecanismo autocrino. Se mostró que los anticuerpos monoclonales (Acm) neutralizantes anti-IL13 inhiben la proliferación de células de HL in vitro (Trieu et al. citado anteriormente; Skinnider et al., Leukemia and Lymphoma (2002) 43:1203-1210) ) .

Las pruebas acumuladas indican que los receptores de IL13 están altamente expresados en una variedad de líneas celulares tumorales malignas humanas (por ejemplo, glioblastoma, tumores de cabeza y cuello, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células renales, carcinoma de Kaposi asociado con SIDA, carcinoma de próstata, carcinoma pancreático y carcinomas epiteliales tales como adenocarcinoma de estómago, colon y piel) (véanse por ejemplo, Debinski W et al. J Biol Chem. (1995) 270: 16775-80; Purl RK et al. Blood (1998) 87: 4333-9; Maini A et al. J Urol. (1997) 158: 948-53; Debinski W et al. Clin Cancer Res. (1995) 1: 1253-8; Kommann M et al. Anticancer Res. (1999) 19: 125-31: Husain SR et al. Blood (2000) 95: 3506-13; Kawakami K et al. Cancer Res. (2001) 61: 61946200) . Se mostró que una proteína de fusión recombinante que comprende IL13 acoplada a una forma mutada de exotoxina de Pseudomonas destruye específicamente estas células tumorales in vitro. Por tanto, estos datos sugieren que el receptor de IL13 es una diana atractiva para dirigir la destrucción tumoral selectiva.

Se conoce ahora que los mediadores principales de la inmunidad anti-tumoral son células Th1 CD4+ y linfocitos T citotóxicos CD8+ (CTL) . Puesto que la desviación inmunitaria hacia Th2 suprime el desarrollo de Th1, se ha sugerido que la inducción de una respuesta de Th2 en pacientes con cáncer es uno de los mecanismos principales que suprime la inmunovigilancia tumoral. Terabe et al. mostraron que un inhibidor de IL13 (sIL13R!2-Fc) inhibía la recidiva tumoral en un modelo de ratón. Se encontraron también observaciones similares con ratones deficientes en STAT6 o IL4R, pero no con ratones deficientes en IL4. Conjuntamente, estos resultados indican que IL13 desempeña un papel importante en la supresión de la inmunidad anti-tumoral in vivo. Por tanto, la inhibición de IL13 podría promover la inmunidad anti-tumoral en pacientes con cáncer.

Se ha demostrado que la terapia basada en anticuerpos es muy eficaz en el tratamiento de diversos cánceres. Por ejemplo, se han usado con éxito HERCEPTIN∀ y RITUXAN∀ para tratar cáncer de mama y linfoma no Hodgkin, respectivamente. La presente invención proporciona métodos alternativos de tratamiento de cáncer que superan las limitaciones de métodos terapéuticos convencionales así como también ofrecen ventajas adicionales que se harán evidentes a partir de la descripción detallada a continuación.

Sumario de la invención

La presente solicitud se refiere al tratamiento de cánceres y/o tumores que expresan IL13, con anticuerpos monoclonales anti-IL13 antagonistas novedosos. En un primer aspecto, se proporciona una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de cáncer, que comprende un anticuerpo anti IL-13 humana antagonista

o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a IL-13 humana, en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 (PTA-5657) para unirse a IL-13. Además, se proporciona una composición para su uso en el diagnóstico de un cáncer o tumor en una muestra biológica, en la que el cáncer y/o tumor sobreexpresa IL-13, que comprende un anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a IL-13 humana, en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 (PTA-5657) para unirse a IL-13. Los anticuerpos útiles en la presente invención comprenden anticuerpos anti-IL13 antagonistas novedosos que se unen específicamente y con alta afinidad a IL-13 humana tanto glicosilada como no-glicosilada; en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 (PTA-5657) para unirse a IL-13; no se unen a IL13 de ratón, y neutralizan la actividad de IL13 humana a una razón molar aproximada de 1:2 (Acm:IL13) . También se incluyen en la presente invención anticuerpos que comprenden las regiones de unión a antígeno derivadas de las regiones variables de cadena pesada y/o ligera de dichos anticuerpos. Los anticuerpos de la invención pueden ser monoclonales, y un anticuerpo monoclonal puede ser un anticuerpo humano, un anticuerpo quimérico o un

anticuerpo humanizado.

Ejemplos de estos anticuerpos son 228B/C-1, 228A-4, 227-26 y 227-43. Los hibridomas que producen estos anticuerpos se depositaron el 20 de noviembre de 2003, con la American Type Culture Collection (Colección Americana de Cultivos Tipo) , 10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209, con los números de registro PTA5657, PTA-5656, PTA-5654 y PTA-5655, respectivamente. Estos anticuerpos pueden seleccionar como diana una célula tumoral que expresa IL-13 in vivo. Estos anticuerpos se describen en una solicitud de patente en tramitación junto con la presente (documento WO 2005/062967, presentado el 23 de diciembre de 2004) .

Los anticuerpos útiles en la presente invención también incluyen anticuerpos que tienen una secuencia VL al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 3, y una secuencia VH al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 4; anticuerpos que tienen una secuencia VL al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 5, y una secuencia VH al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 6; y anticuerpos que tienen una secuencia VL al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 7, y una secuencia VH al menos homóloga en un 95% a la expuesta en SEQ ID NO: 8. La presente invención también incluye una molécula de anticuerpo recombinante, o un fragmento de unión a IL-13 del mismo, que comprende al menos una cadena pesada de anticuerpo, o un fragmento de unión a IL-13 del mismo, que comprende CDR no humanas en las posiciones 31-35 (CDR1) , 50-65 (CDR2) y 95-102 (CDR3) (numeración de Kabat) procedentes de un anticuerpo anti-IL13 de ratón, en la que las posiciones 27-30 tienen los aminoácidos Gly 26, Phe 27, Ser 28, Leu 29, Asn 30, (SEQ ID NO: 18) ; y al menos una cadena ligera de anticuerpo, o un fragmento de unión a IL-13 del mismo, que comprende CDR no humanas en las posiciones 24-34 (CDR1) , 50-56 (CDR2) y 89-97 (CDR3) procedentes de un anticuerpo anti-IL13 de ratón, y regiones de entramado procedentes de un anticuerpo monoclonal humano.

Los anticuerpos útiles en la presente invención también incluyen fragmentos de anticuerpo de unión a antígeno humano de los anticuerpos de la presente invención incluyendo, pero sin limitarse a, Fab, Fab’ y F (ab’) 2, Fd, Fv de cadena sencilla (scFv) , anticuerpos de cadena sencilla, Fv unidos por puentes disulfuro (sdFv) . La invención también incluye anticuerpos de dominio único que comprenden un dominio o bien VL o bien VH. Un ejemplo es un scFv que tiene la secuencia tal como se expone en SEQ ID NO 152.

Los anticuerpos también útiles en la presente invención incluyen secuencias humanizadas del anticuerpo monoclonal 228B/C-1. Estas moléculas de anticuerpo recombinante humanizado comprenden una región... [Seguir leyendo]

1. Composición farmacéutica para su uso en el tratamiento de cáncer, que comprende un anticuerpo anti IL-13 humana antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a IL-13 humana, en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 que se designa con el número de depósito de la ATCC PTA-5657 para unirse a IL-13.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 para el uso según la reivindicación 1, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno se une a un epítopo que tiene la secuencia de aminoácidos ESLINVSG o YCAALESLINVS.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2 para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende (i) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 99, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 104; y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 115; y (ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 117, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 123; y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135.

4. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2 para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende secuencias humanizadas de un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 (PTA-5657) o regiones de unión a antígeno derivadas de las regiones variables de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 que se designa con el número de depósito de la ATCC PTA-5657.

5. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2 para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende (i) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una cualquiera de SEQ ID NOs: 3, 142, 144 y 150; y (ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una cualquiera de SEQ ID NOs: 4, 143, 145, 146, 147, 148 y 149.

6. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2 para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende una región de cadena VL que comprende la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 142, y una región de cadena VH que comprende la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 143.

7. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 ó 2 para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende:

(i) una región de cadena VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene la fórmula:

FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4, en la que FRL1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

2. 25; CDRL1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

9. 103; FRL2 consiste en SEQ ID NO: 29; CDRL2 consiste en una cualquiera de SEQ. ID NO.

10. 114; FRL3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

3. 56; CDRL3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NO.

11. 116; y FRL4 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOS.

5. 59; y

(ii) una región de cadena VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene la fórmula:

FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4, en la que FRH1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

6. 66; CDRH1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOS.

11. 122; FRH2 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

6. 75; CDRH2 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

12. 134; FRH3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

7. 90; CDRH3 consiste en cualquiera de SEQ ID NOs: 135141; y FRH4 consiste en una cualquiera de SEQ ID NO.

9. 92.

8. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para el uso según las reivindicaciones 1 a 7, en la que el anticuerpo antagonista es un anticuerpo monoclonal.

9. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para el uso según las reivindicaciones 1 a 8, en la que el anticuerpo antagonista comprende una región constante de un anticuerpo IgG.

10. Composición farmacéutica según la reivindicación 9 para el uso según la reivindicación 9, en la que el anticuerpo antagonista es un anticuerpo IgG1, un anticuerpo IgG2, un anticuerpo IgG3 o un anticuerpo IgG4.

11. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 para el uso según las reivindicaciones 1 a 10, en la que el anticuerpo antagonista es un anticuerpo humano, un anticuerpo quimérico o un anticuerpo humanizado o un fragmento de los mismos.

12. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11 para el uso según las reivindicaciones 8 a 11, en la que el anticuerpo es un fragmento de unión a antígeno de dicho anticuerpo.

13. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12 para el uso según las reivindicaciones 1 a 12, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno es un anticuerpo de cadena sencilla, un anticuerpo monovalente o un anticuerpo multiespecífico.

14. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, 12 y 13 para el uso según las reivindicaciones 1 a 7, 12 y 13, en la que el fragmento de unión a antígeno es un fragmento Fab, fragmento Fab’ o fragmento F (ab’) 2.

15. Composición farmacéutica según la reivindicación 13 para el uso según la reivindicación 13, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno es un anticuerpo multiespecífico que es un anticuerpo biespecífico.

16. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 para el uso según las reivindicaciones 1 a 15, que comprende además un portador fisiológicamente aceptable.

17. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16 para el uso según las reivindicaciones 1 a 16, en la que la composición va a administrarse mediante inhalación, inyección en bolo

o infusión.

18. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 para el uso según la reivindicación 1, en la que dicho cáncer es linfoma de Hodgkin, cáncer de piel, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de mama, cáncer pancreático, cáncer de hígado, cáncer de próstata, cáncer de pulmón, cáncer de cabeza y cuello, cáncer de células renales, carcinoma de células escamosas, carcinoma de Kaposi asociado con SIDA o cáncer de cerebro.

19. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 18 para el uso según las reivindicaciones 1 a 18, en la que dicho cáncer es linfoma de Hodgkin.

20. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19 para el uso según las reivindicaciones 1 a 19, en la que el anticuerpo antagonista está asociado con un agente citotóxico.

21. Composición farmacéutica según la reivindicación 20 para el uso según la reivindicación 20, en la que el agente citotóxico es una toxina, un isótopo radiactivo o un agente citostático.

22. Uso de una composición en el diagnóstico de un cáncer o tumor en una muestra biológica, en la que el cáncer y/o tumor sobreexpresa IL-13, que comprende un anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a IL-13 humana, en la que dicho anticuerpo compite con un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 que se designa con el número de depósito de la ATCC PTA-5657 para unirse a IL-13.

23. Uso de la composición según la reivindicación 22, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno se une a un epítopo que tiene la secuencia de aminoácidos ESLINVSG o YCAALESLINVS.

24. Uso de la composición según la reivindicación 22 ó 23, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende

(i) una región de cadena VL que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene la fórmula:

FRL1-CDRL1-FRL2-CDRL2-FRL3-CDRL3-FRL4, en la que FRL1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

2. 25; CDRL1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

9. 103; FRL2 consiste en SEQ ID NO: 29; CDRL2 consiste en una cualquiera de SEQ ID NO.

10. 114; FRL3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

3. 56; CDRL3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NO.

11. 116; y FRL4 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

5. 59; y

(ii) una región de cadena VH que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene la fórmula:

FRH1-CDRH1-FRH2-CDRH2-FRH3-CDRH3-FRH4, en la que FRH1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

6. 66; CDRH1 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

11. 122; FRH2 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

6. 75; CDRH2 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

12. 134; FRH3 consiste en una cualquiera de SEQ ID NOs.

7. 90; CDRH3 consiste en cualquiera de SEQ ID NOs: 135141; y FRH4 consiste en una cualquiera de SEQ ID NO.

9. 92.

25. Uso de la composición según la reivindicación 22 ó 23, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende (i) una región de cadena VL que comprende una cualquiera de SEQ ID NOs: 3, 142, 144 y 150; y (ii) una región de cadena VH que comprende una cualquiera de SEQ ID NOs: 4, 143, 145, 146, 147, 148 y 149.

26. Uso de la composición según la reivindicación 22 ó 23, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de unión a antígeno comprende una región de cadena VL que comprende la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 142, y una región de cadena VH que comprende la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 143.

27. Uso de la composición según la reivindicación 22 ó 23, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de

unión a antígeno comprende secuencias humanizadas de un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 (PTA-5657) o regiones de unión a antígeno derivadas de las regiones variables de cadena pesada y ligera de un anticuerpo producido por el hibridoma 228B/C-1 que se designa con el número de depósito de la ATCC PTA-5657.

28. Uso de la composición según la reivindicación 22 ó 23, en la que el anticuerpo antagonista o fragmento de

unión a antígeno comprende (i) una región variable de cadena ligera (VL) que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 99, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:104; y una CDR3 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 115; y (ii) una región variable de cadena pesada (VH) que comprende una CDR1 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 117, una CDR2 que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 123; y una CDR3 que tiene

la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 135.