Ácido nucleico aislado que tiene al menos un 80% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos con:

(a) una secuencia de nucleótidos que codifica los residuos 1 o Y a Z o 667 del polipéptido mostrado en la figura 16, siendo Y cualquier número de 19 a 29 y siendo Z cualquier número de 449 a 459;

(b) la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura 5 (SEQ ID NO:15); o

(c) la secuencia codificante de longitud completa de la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura 15 (SEQ ID NO:15), en la que dicho ácido nucleico codifica un polipéptido capaz de (i) incrementar la proliferación de linfocitos T en un mamífero y/o (ii) incrementar la infiltración de células inflamatorias en un tejido de un mamífero.

Polipéptidos homólogos a IL-17 y usos terapéuticos de los mismos.

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere generalmente a la identificación y aislamiento de ADN y a la producción recombinante de polipéptidos nuevos con similitud de secuencia con la interleucina-17 y la proteína receptora interleucina-17, designada aquí como polipéptidos "PRO".

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las proteínas extracelulares juegan un papel importante en, entre otras cosas, la formación, la diferenciación y el mantenimiento de los organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, es decir, la proliferación, migración, diferenciación, o la interacción con otras células, normalmente se rigen por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información se suele transmitir por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénicos, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que es, a su vez, recibida e interpretada por diversos receptores de las células o proteínas de membrana. Estos polipéptidos secretados o moléculas de señalización normalmente pasan por la vía de secreción celular para llegar a su sitio de acción en el medio extracelular.

Las proteínas secretadas tienen diversas aplicaciones industriales, incluyendo los productos farmacéuticos, de diagnóstico, biosensores y biorreactores. La mayoría de los fármacos de proteínas disponibles en la actualidad, tales como agentes trombolíticos, interferones, interleucinas, eritropoyetina, factores estimulantes de colonias, y otras varias citoquinas, son proteínas secretoras. De sus receptores, que son proteínas de membrana, también tienen potencial como agentes terapéuticos o de diagnóstico.

Las proteínas unidas a la membrana y receptores pueden desempeñar un papel importante en, entre otras cosas, la formación, la diferenciación y el mantenimiento de los organismos multicelulares. El destino de muchas células individuales, es decir, proliferación, migración, diferenciación, o interacción con otras células, normalmente se rigen por la información recibida de otras células y/o el entorno inmediato. Esta información se suele transmitir por polipéptidos secretados (por ejemplo, factores mitogénica, factores de supervivencia, factores citotóxicos, factores de diferenciación, neuropéptidos y hormonas) que es, a su vez, recibida e interpretada por diversos receptores de las células o proteínas de membrana. Dichas proteínas unidas a la membrana y receptores de la célula incluyen, pero no están limitados a, los receptores de las citoquinas, receptores quinasas, fosfatasas de los receptores, los receptores implicados en las interacciones célula-célula, y las moléculas de adhesina celular como selectinas e integrinas. Por ejemplo, la transducción de señales que regulan el crecimiento y la diferenciación celular está regulada en parte por la fosforilación de varias proteínas celulares. Quinasas tirosina de proteínas, enzimas que catalizan este proceso, también puede actuar como receptores del factor de crecimiento. Los ejemplos incluyen los receptores de factor de crecimiento de fibroblastos y factor de crecimiento del nervio receptor de factor.

De manera similar a las proteínas secretadas, las proteínas unidas a la membrana y las moléculas de los receptores tienen diversas aplicaciones industriales, incluso como agentes farmacéuticos y de diagnóstico. Inmunoadhesinas receptoras, por ejemplo, pueden ser empleadas como agentes terapéuticos para bloquear las interacciones receptor-ligando. Las proteínas unidas a la membrana también pueden ser empleadas para la detección de péptido o inhibidores de molécula pequeña potenciales de la interacción receptor/ligando relevante.

Se están realizando esfuerzos tanto por la industria y el mundo académico para identificar nuevas proteínas secretadas nativas y el receptor nativo o proteínas unidas a la membrana. Muchos esfuerzos se centran en la selección de las librerías de ADN recombinante de mamíferos para identificar las secuencias que codifican las nuevas proteínas secretadas. Ejemplos de procedimientos y técnicas están descritos en la literatura [ver, por ejemplo, Klein et al., Proc. Natl. Acad. Sci.., 93:7108-7113 (1996) ; U. S. Patent No. 5.536.637) ].

En este sentido, la presente invención se refiere a la identificación de nuevos polipéptidos y receptores secretados de la familia de la interleucina-17 (IL-17) que han demostrado estar relacionados con las enfermedades inmunomediadas e inflamatorias. Enfermedades inmunes e inflamatorias relacionadas son la manifestación o consecuencia a menudo de varias vías biológicas interconectadas bastante complejas, que en la fisiología normal son críticas para responder al ataque o lesión, iniciar la reparación del ataque o lesión, y montar la defensa innata y adquirida frente a los organismos extraños. La enfermedad o patología se produce cuando estas vías fisiológicas normales causan un ataque o lesión adicional ya sea directamente relacionado con la intensidad de la respuesta, como consecuencia de la regulación anormal o excesiva estimulación, como reacción a la misma, o como una combinación de éstas.

Aunque la génesis de estas enfermedades a menudo involucra vías de varias etapas y a menudo caminos múltiples sistemas y vías biológicos diferentes, la intervención en los puntos críticos en una o más de estas vías puede tener un efecto paliativo o terapéutico. La intervención terapéutica puede ocurrir ya sea por antagonismo de un proceso/vía de detrimento o la estimulación de un proceso/vía beneficioso.

Muchas enfermedades autorelacionadas con el sistema inmune son conocidas y han sido ampliamente estudiados. Esas enfermedades incluyen son las enfermedades inflamatorios inmuno-mediadas (como la artritis reumatoide, enfermedad renal inmuno-mediada, enfermedades hepatobiliares, enfermedad inflamatoria intestinal (EII) , psoriasis y asma) , enfermedades inflamatorias no inmuno mediadas, enfermedades infecciosas, enfermedades de inmunodeficiencia, la neoplasia, etc.

Los linfocitos T (células T) son un componente importante de una respuesta inmune de los mamíferos. Las células T reconocen los antígenos que están asociados con una auto-molécula codificada por los genes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) . El antígeno se puede mostrar junto con las moléculas de MHC en la superficie de células que presentan antígenos, células infectadas por virus, células cancerosas, injertos, etc. El sistema de células T elimina estas células alteradas que representan una amenaza para la salud del mamífero huésped. Las células T incluyen linfocitos colaboradores T y células T citotóxicas. Las células T colaboradoras proliferan de manera extensiva a raíz del reconocimiento de un complejo antígeno-MHC en la presentación de un antígeno de la célula. Las células T colaboradoras también secretan una gran variedad de citocinas, es decir, linfocinas, que desempeñan un papel central en la activación de células B, células T citotóxicas y una variedad de otras células que participan en la respuesta inmune.

Un acto central, tanto en las respuestas inmunes humoral y mediada por células es la activación y expansión clonal de las células T colaboradoras. La activación de células T colaboradoras se inicia por la interacción del receptor de células T (TCR) - complejo CD3 con un antígeno-MHC en la superficie de una célula que presente un antígeno. Esta interacción media en una cascada de eventos bioquímicos que inducen al descanso de células T auxiliares para entrar en un ciclo celular (el G0 a la transición G1) y resulta en la expresión de un receptor de alta afinidad para IL-2 y algunas veces IL-4. La célula T activada avanza a través del ciclo proliferando y diferenciándose en las células de memoria o células efectoras.

Además de las señales mediadas por el TCR, la activación de células T implica coestimulación adicional inducida por citocinas liberadas por las células que presentan antígenos o por medio de interacciones con las moléculas unidas a la membrana de la célula que presenta el antígeno y la célula T. Las citocinas IL-1 e IL-6 se ha demostrado que proporcionan una señal de coestimuladora. Además, la interacción entre la molécula B7 expresada en la superficie de células presentadoras de un antígeno y moléculas CD28 y CTLA-4 expresadas en la superficie de las células T efectúan la activación de células T.... [Seguir leyendo]

1. Ácido nucleico aislado que tiene al menos un 80% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos con:

(a) una secuencia de nucleótidos que codifica los residuos 1 o Y a Z o 667 del polipéptido mostrado en la figura 16, siendo Y cualquier número de 19 a 29 y siendo Z cualquier número de 449 a 459;

(b) la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura 5 (SEQ ID NO:15) ; o

(c) la secuencia codificante de longitud completa de la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura 15 (SEQ ID NO:15) ,

en la que dicho ácido nucleico codifica un polipéptido capaz de (i) incrementar la proliferación de linfocitos T en un mamífero y/o (ii) incrementar la infiltración de células inflamatorias en un tejido de un mamífero.

2. Ácido nucleico aislado que tiene al menos un 80% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos con la secuencia codificante de longitud completa del ADNc depositado bajo ATCC de número de acceso PTA-1082, en el que dicho ácido nucleico codifica un polipéptido capaz de (i) incrementar la proliferación de linfocitos T en un mamífero y/o (ii) incrementar la infiltración de células inflamatorias en un tejido de un mamífero.

3. Vector que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 1.

4. Vector según la reivindicación 3, unido operativamente a secuencias de control reconocidas por una célula huésped transformada con el vector.

5. Célula huésped que comprende el vector según la reivindicación 4.

6. Célula huésped según la reivindicación 5, en la que dicha célula es una célula CHO, una célula de E. Coli, una célula de levadura o una célula de insecto infectada con Baculovirus.

7. Polipéptido aislado que tiene al menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con los residuos 1 o Y a Z o 667 del polipéptido mostrado en la figura 16, siendo Y cualquier número de 19 a 29 y siendo Z cualquier número de 449 a 459; en el que dicho polipéptido es capaz de (i) incrementar la proliferación de linfocitos T en un mamífero y/o (ii) incrementar la infiltración de células inflamatorias en un tejido de un mamífero.

8. Polipéptido aislado que tiene al menos un 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos con una secuencia de aminoácidos codificada por la secuencia codificante de longitud completa del ADNc depositado bajo ATCC de número de acceso PTA-1082, en el que dicho polipéptido es capaz de (i) incrementar la proliferación de linfocitos T en un mamífero y/o (ii) incrementar la infiltración de células inflamatorias en un tejido de un mamífero.

9. Proceso para producir el polipéptido PRO según la reivindicación 7 u 8, que comprende cultivar una célula huésped bajo condiciones adecuadas para la expresión de dicho polipéptido y recuperar dicho polipéptido del cultivo celular, en el que dicha célula huésped comprende un vector unido operativamente a secuencias de control reconocidas por la célula huésped, comprendiendo dicho vector una secuencia que codifica dicho polipéptido PRO.

10. Molécula quimérica que comprende un polipéptido según la reivindicación 7 u 8, fusionada a una secuencia de aminoácidos heteróloga.

11. Molécula quimérica según la reivindicación 10, en la que dicha secuencia de aminoácidos heteróloga es una secuencia de epítopo etiqueta o una región Fc de una inmunoglobulina

12. Anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido según la reivindicación 7 u 8.

13. Anticuerpo según la reivindicación 12, en el que dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo de cadena sencilla.

14. Composición de materia que comprende (a) un polipéptido según la reivindicación 7 u 8 o (b) un antagonista de dicho polipéptido, seleccionado entre un anticuerpo que se une específicamente a dicho polipéptido, o una molécula de ácido nucleico antisentido, ribozima o de triple hélice que actúa contra un ácido nucleico que codifica el polipéptido según la reivindicación 7 u 8, en combinación con un portador.

15. Composición de materia que comprende un anticuerpo que se une específicamente al polipéptido según la reivindicación 7 u 8, en combinación con un portador.

16. Composición de materia según la reivindicación 14 ó 15, en la que dicho portador es un portador farmacéuticamente aceptable.

17. Composición de materia según la reivindicación 14 ó 15, que es útil para el tratamiento de una enfermedad relacionada con el sistema immune en un mamífero.

18. Composición de materia según la reivindicación 14 ó 15, que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de dicho polipéptido, antagonista o anticuerpo.

19. Artículo de fabricación, que comprende: un recipiente, una etiqueta sobre dicho recipiente; y una composición de materia que comprende (a) un polipéptido según la reivindicación 7 u 8 o (b) un antagonista de dicho polipéptido seleccionado entre un anticuerpo que se une específicamente a dicho polipéptido, o una molécula de ácido nucleico antisentido, ribozima o de triple hélice que actúa contra un ácido nucleico que codifica el polipéptido según la reivindicación 7 u 8, o (c) un anticuerpo que se une específicamente a dicho polipéptido, contenido en dicho recipiente, en el que la etiqueta sobre dicho recipiente indica que dicha composición de materia se puede utilizar para tratar una enfermedad relacionada con el sistema inmune.

20. Polipéptido según la reivindicacion 7 u 8, o un antagonista de dicho polipéptido seleccionado entre un anticuerpo que se une específicamente a dicho polipéptido, o una molécula de ácido nucleico antisentido, ribozima o de triple hélice que actúa contra un ácido nucleico que codifica el polipéptido según la reivindicación 7 u 8, para utilizar en un método de tratamiento de un trastorno relacionado con el sistema inmune en un mamífero con necesidad del mismo.

21. Anticuerpo que se une específicamente a un polipéptido según la reivindicación 7 u 8, para utilizar en un método de tratamiento de un trastorno relacionado con el sistema inmune en un mamífero con necesidad del mismo.

22. Método para determinar la presencia de un polipéptido PRO9877 en una muestra sospechosa de contener dicho polipéptido, comprendiendo dicho método exponer dicha muestra a un anticuerpo anti-PRO9877 según la reivindicación 12, y determinar la unión de dicho anticuerpo a un componente de dicha muestra, en el que el polipéptido PRO9877 es tal como se define en las reivindicaciones 7 u 8.

23. Método de diagnóstico de una enfermedad relacionada con el sistema immune en un mamífero, comprendiendo dicho método detectar el nivel de expresión de un gen que codifica el polipéptido PRO9877 (a) en una muestra de análisis de células de tejido obtenidas del mamífero, y (b) en una muestra de control de células de tejido normal conocido del mismo tipo de células, en el que un nivel de expresión de dicho gen superior o inferior en la muestra de análisis en comparación con la muestra de control es indicativo de la presencia de una enfermedad relacionada con el sistema inmune en el mamífero de que se obtuvieron las células de tejido de análisis, en el que el polipéptido PRO9877 es tal como se define en las reivindicaciones 7 u 8.

24. Método de diagnóstico de una enfermedad relacionada con el sistema immune en un mamífero, comprendiendo dicho método (a) poner en contacto un anticuerpo anti-PRO9877 según la reivindicación 12 con una muestra de análisis de células de tejido obtenida de dicho mamífero y (b) detectar la formación de un complejo entre el anticuerpo y el polipéptido en la muestra de análisis, en el que la formación de dicho complejo es indicativa de la presencia de una enfermedad relacionada con el sistema inmune en el mamífero del que se obtuvieron las células de tejido de análisis, en el que el polipéptido PRO9877 es tal como se define en las reivindicaciones 7 u 8.

25. Método de identificación de un compuesto que inhibe la actividad de un polipéptido PRO9877, comprendiendo dicho método poner en contacto las células que normalmente responden a dicho polipéptido con (a) dicho polipéptido y (b) un compuesto candidato, y determinar la falta de respuesta por dicha célula a (a) , en el que el polipéptido PRO9877 es tal como se define en las reivindicaciones 7 u 8.

26. Método de identificación de un compuesto que inhibe la expresión de un gen que codifica un polipéptido PRO9877, comprendiendo dicho método poner en contacto células que expresan normalmente dicho polipéptido con un compuesto candidato y determinar la falta de expresión de dicho gen, en el que el polipéptido PRO9877 es tal como se define en las reivindicaciones 7 u 8.

27. Método según la reivindicación 26, en el que dicho compuesto candidato es un ácido nucleico antisentido.