Un péptido que comprende al menos un epítopo reconocido por el anticuerpo monoclonal BAT,

seleccionado de un péptido que tiene la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos 1 a 10 o una sal del mismo que mantiene la actividad biológica del péptido

Péptido útil en la inmunomodulación

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere al campo de las vacunas inmunoterapeúticas y particularmente a la identificación y al uso de péptidos reconocidos por los anticuerpos monoclonales inmunomoduladores designados BAT, a polinucleótidos codificando estos péptidos, a composiciones farmacéuticas que comprenden los péptidos o los polinucleótido y el uso de los mismos en la inmunomodulación, especialmente en la terapia contra el cáncer, y para fines diagnósticos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El cáncer en sus diferentes formas es una causa principal de muerte en humanos. Los tratamientos terapéuticos más ampliamente usados del cáncer son la terapia local, como la cirugía y la radicación, o la quimioterapia. El rápido aumento del conocimiento en años recientes sobre las bases moleculares y celulares de la regulación inmune, particularmente al nivel de respuestas de las células-T, proporciona un nuevo arsenal de enfoques inmunoterapeúticos incluyendo el desarrollo de vacunas tumorales. La vacuna tumoral se administra para propósitos terapéuticos o preventivos. Esto puede incluir la administración de agentes inmuno-potenciadores así como modificadores de la respuesta biológica como los interferones e interleucinas, para estimular el sistema inmunológico.

La vacunación con una molécula antígena, como un péptido o una proteína, generalmente lleva a una respuesta de anticuerpos o una respuesta de las Células T ayudantes CD4+ (Raychaudhuri y otros, 1993 Immunol Today 14:344) . Esta respuesta inmune es iniciada por el enlace del antígeno a las moléculas principales histocompatiblemente complejas (MHC) de o de la Clase I o de la Clase II. Las últimas moléculas están expresadas primariamente en células involucradas en la iniciación y el mantenimiento de las respuestas inmunes como los linfocitos T, linfocitos B y macrófagos. Las moléculas de Clase II son reconocidas por las Células T ayudantes CD4+ e inducen su proliferación e la amplificación de la respuesta inmune al epítopo que se muestra. Las moléculas MHC Clase I se encuentran en la mayoría de las células nucleadas y son reconocidas por los linfocitos T citotóxicos (CTLs) que destruyen las células que portan el antígeno. La repuesta CTL es un componente principal del sistema inmunológico, activo en la vigilancia inmunológica y la destrucción de células infectadas o malignas y en invadir organismos que expresan antígenos extraños en su superficie. El ligando del receptor linfocito T especifico del antígeno es un complejo formado de un fragmento péptido de un antígeno extraño de 8 a 10 aminoácidos de longitud, presentado en el canal de las moléculas MHC clase I. Al contrario que las células B, las células T no reconocen las moléculas de antígeno nativo intactas. En general la activación de las células T citotóxicas requiere que el antígeno sea procesado endógenamente y escindido en fragmentos de péptido específicos que están presentes en la superficie de las células procesadoras de antígeno en asociación con las moléculas MHC clase I.

Por consiguiente, una vacuna exitosa para la inmunoterapia del cáncer requiere la identificación de un antígeno objetivo y la producción de una respuesta de las células T citotóxicas. Además, la identificación de los antígenos de la superficie de las células expresados exclusivamente o preferencialmente en ciertos tumores permite la formación de estrategias de tratamiento selectivas.

Existen numerosas divulgaciones concernientes a los péptidos inmunomodulatorios. La WO 94/20127 revela medios y métodos para seleccionar péptidos inmunogénicos capaces de enlazar específicamente el alelo HLA-A2.1 e inducir la activación de las células T. La WO 95/19783 se refiere a péptidos basados en un epítopo derivado del producto del tumor asociado con el gen MAGE-3. LA WO 97/11715 revela un péptido con MUCI imitadores u otros péptidos del cáncer. La WO 00/06723 revela péptidos antígenos específicos de tumores y usa los mismos como vacunas anti tumorales. La US 6.406.700 revela métodos para aislar complejos inmunogénicos usando la librería de cADN del ARN celular del cáncer.

Las solicitudes de patente internacionales WO 95/20605 y WO 00/58363 describen un nuevo anticuerpo monoclonal designado BAT-1, también designado en la presente BAT, que induce a la proliferación de linfocitos y a la actividad citolítica contra las células objetivo tumorales. Una sola administración intravenosa del BAT en ratones que portan varios tumores resultó en efectos anti-tumorales notables manifestados por la regresión de los tumores y la prolongación de la supervivencia. El BAT también indujo la regresión de xenoinjertos de tumores humanos trasplantados en ratones SCID que fueron injertados con linfocitos de sangre periférica humana. La actividad antitumoral del BAT es mediada por sus propiedades estimulatorias inmunes como fue evidente de los experimentos de transferencia adoptiva en los que los esplenocitos de ratones tratados con BAT inyectados en ratones portadores de tumores indujeron la regresión de los tumores. La membrana determinante reconocida por el BAT todavía no ha sido identificada o caracterizada.

Annar Raitier y otros (“CD4+ Tlumphocytes as a primar y cellular target for BAT mAb stimulation”, Intern. Immunol., Vol 12, Nº 11, p. 1623-1628) , informa sobre los linfocitos CD4+ como un objetivo celular primario para la estimulación mAB del BAT. Se demuestra que el BAT enlaza selectivamente a una proteína 48kDa en las células Daudi, en las células CD4+ y CD8+ , y estimuló las células CD4+, com ose evaluó por la proliferación y secreción de IFN-y.

Britta Hardy y otros (“Selection of novel peptides-based cancer vaccines by BAT monoclonal antibody”, Interm. J. Molecualr Medicine, Vol. 10, Suplemento Nº 1, p. S46) rvela la selección de vacunas contra el cáncer basadas en péptidos usando anticuerpos monoclanes del BAT.

Varios métodos alternativos de identificar los epítopos péptidos enlazados por anticuerpos monoclonales son reconocidos en la técnica. Estos métodos incluyen el uso de librerías de representación de fagos como las reveladas en las Patentes US Nº 5.223.409; 5.403.484, 5.571.698; 5.837.500 y continuaciones de las mismas. LA representación de fagos consiste en una técnica de selección que permite la identificación y el aislamiento de una proteína contra un objetivo elegido. El proceso de selección se basa en las moléculas de ADN cada una codificando una proteína y una señal estructural llamando para la representación de la proteína en la superficie exterior de un bacteriófago. La proteína es expresada y el dominio de enlace potencial es representado en la superficie exterior del fago. Las células o virus portadores los dominios enlazantes que reconocen la molécula objetivo se aíslan, por un proceso de selección repetitivo llamado biopanning, y se amplifican. Los dominios enlazantes exitosos son entonces caracterizados.

Las librerías de epítopos también se pueden filtrar para las secuencias de epítopos que imitan al epítopo, es decir, secuencias que no identifican una secuencia nativa linear continua que tiene lugar necesariamente dentro de la secuencia de la proteína natural. Estos péptidos imitadores son llamados mimotopos. En la mayoría de los casos los mimotopos son péptidos cortos que pueden ser fácilmente sintetizados en grandes cantidades. Se han encontrado mimotopos de varios sitios enlazantes. Por ejemplo, la US 5.877.155 proporciona un péptido aislado que imita funcionalmente un sitio enlazante para un anticuerpo monoclonal, el anticuerpo monoclonal reconociendo un epítopo dentro del complejo Ib/IX de glicoproteína plaquetaria humano.

Hay una necesidad médica no satisfecha de péptidos capaces de provocar o estimular una respuesta inmune anti-tumoral in vivo.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

Es un objeto de algunos aspectos de la presente invención proporcionar péptidos que son útiles como agentes inmunomodulatorios, por ejemplo, al estimular respuestas inmunes e inhibición en el crecimiento tumoral.

Es otro objeto de algunos aspectos de la presente invención proporcionar péptidos que son útiles en el tratamiento del cáncer y en el tratamiento de enfermedades autoinmunes.

Es un objeto adicional de algunos aspectos de la presente invención proporcionar péptidos que son reconocidos por el anticuerpo monoclonal BAT.

Es todavía un objeto adicional de algunos aspectos... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que comprende al menos un epítopo reconocido por el anticuerpo monoclonal BAT, seleccionado de un péptido que tiene la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos 1 a 10 o una sal del mismo que mantiene la actividad biológica del péptido.

2. EL péptido de acuerdo a la reivindicación 1, en donde el péptido es seleccionado de un péptido que tiene la secuencia de cualquiera de las SEQ ID Nos 1, 6, 8, 9, 10 o una sal del mismo que mantiene la actividad biológica del péptido.

3. Un polinucleótido que codifica al menos un péptido reconocido por el anticuerpo monoclonal BAT, el polinucleótido tiene una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18 a 25.

4. El polinucleótido de acuerdo a la reivindicación 3, que tiene una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18, 22, 24, 25.

5. Un constructo que comprende un polinucleótido que codifica por lo menos un péptido reconocido por un anticuerpo monoclonal BAT en donde el polinucleótido comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18 a 25.

6. El constructo de acuerdo a la reivindicación 5, en donde el polinucleótido comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18, 22, 24, 25.

7. Un vector que comprende un polinucleótido que codifica a Lemnos un péptido reconocido por un anticuerpo monoclonal BAT, en donde el polinucleótido comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18 a 25.

8. El vector de acuerdo a la reivindicación 7, en donde el polinucleótido comprende una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18, 22, 24, 25.

9. El vector de acuerdo a la reivindicación 7, en donde el vector es un plásmido o un virus.

10. Una célula huésped que comprende un vector que comprende un polinucleótido que codifica al menos un péptido reconocido por un anticuerpo monoclonal BAT, el polinucleótido tiene una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18 a 25.

11. La célula huésped de acuerdo a la reivindicación 10, que comprende un polinucleótido que tiene una secuencia seleccionada de las SEQ ID Nos 18, 22, 24, 25.

12. La célula huésped de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 10 a 11, capaz de expresar al menos un epítopo reconocido por el anticuerpo monoclonal BAT.

13. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo al menos un péptido de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 y un portador farmacéuticamente aceptable.

14. Una composición farmacéutica que comprende como un ingrediente activo un polinucleótido de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 3 a4 y un portador farmacéuticamente aceptable.

15. El uso de una composición de acuerdo a cualquiera de las reivindicaciones 13 a 14 en la preparación de una composición farmacéutica para tratar el cáncer seleccionado de la lista consistente de melanoma, carcinoma pulmonar, cáncer de próstata, cáncer de pecho, linfomas y leucemias, carcinoma de colon, y fibrosarcomas.

16. Una vacuna inmunomodulatoria que comprende al menos un péptido reconocido por un anticuerpo monoclonal BAT y un adyuvante farmacéuticamente aceptable, en donde el péptido comprende una secuencia de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 2.

17. La vacuna de acuerdo a la reivindicación 16, en donde el adyuvante es seleccionado del grupo de una sal de aluminio y una emulsión de aceite en agua.

18. Un agente diagnostico para detectar el cáncer, seleccionado de la lista consistente de melanoma, carcinoma pulmonar, cáncer de próstata, cáncer de pecho, linfomas, leucemias, carcinoma de colon, y fibrosarcomas, que comprende un péptido reconocido por un anticuerpo monoclonal BAT, de acuerdo a las reivindicaciones 1 a 2.