Péptido biológicamente activo y agente que contiene el mismo.

Péptido que consiste de la secuencia de aminoácidos (H) siguiente :

(H) Asn Lys Ala Gln Gln Pro Gln Ile Lys Arg Asp Ala Trp Arg Phe (SEC ID nº 10).

Péptido biológicamente activo y agente que contiene el mismo Campo técnico La presente invención se refiere a un nuevo péptido biológicamente activo. La presente invención se refiere además a un agente que contiene dicho péptido biológicamente activo como un ingrediente activo. El péptido y el agente de la presente invención resultan útiles en el campo farmacéutico y otros.

Antecedentes de la técnica Sheathlin es una proteína que existe en la matriz del esmalte y también se denomina ameloblastina o amelina. Las secuencias de aminoácidos de las sheathlins en porcinos, seres humanos, bovinos, ratones y ratas y son conocidas (ameloblastina derivada de incisivo de rata: Krebsbach P.H., Lee S.K., Matsuki Y., Kozack C.A., Yamada K. y Yamada Y., Full-length sequence, localization, and chromosomal mapping of ameloblastin. A novel tooth specific gene, J. Biol. Chem. 271:4431-4435, 1996; amelina derivada de molar de rata: Cerny R., Slaby I., Hammarstrm L. y Wuitz T., A novel gene expressed in rat ameloblasts codes fo proteins with cell binding domains, J. Bone Miner. Res. 11:883-891, 1996; sheathlin derivado de porcino: Hu C.C., Fukae M., Uchida T., Qian Q., Zhang C.H., Ryu O.H., Tanabe T., Yamakoshi Y., Murakami C., Dohi N., Shimizu M. y Simmer J.P., Sheathlin: Cloning, cDNA/polypeptide sequences, and immunolocalization of porcine enamel sheath proteins, J. Dent. Res. 76:648-657, 1997; sheathlins derivados de seres humanos, bovinos y ratones: Toyosawa S., Fujiwara T., Ooshima T., Shintani S., Sato A., Ogawa Y., Sobue S. y Ijuhin N., Cloning and characterization of the human ameloblastin gene, Gene 256:1-11, 2000) .

Además, se ha dado a conocer un anticuerpo que reconoce la secuencia de los residuos aminoácidos nº 27 a nº 47 de sheathlin (derivado de rata, correspondiente a la secuencia SEC ID nº 6) (The Journal of Histochemistr y & Cytochemistr y 45 (10) :1329-1340, 1997) . Sin embargo, esta publicación únicamente da a conocer que un anticuerpo particular determinado reconoce dicha secuencia de aminoácidos, y no da a conocer ni sugiere la producción de un péptido que presente dicha secuencia de aminoácidos o la utilización del péptido con fines farmacéuticos y otros.

Además, se ha informado de diversos usos farmacéuticos de un tetrapéptido derivado de amelina y diversos usos farmacéuticos de la misma (tratamientos terapéuticos y profilácticos de enfermedades periodontales, reparaciones de lesiones de dientes, unión de elementos óseos, estimulación o inducción de la mineralización de tejidos duros, incorporación efectiva de un implante en el hueso, mejora de la biocompatibilidad de los instrumentos para la implantación, etc.) (solicitud de patente japonesa no examinada publicada (Kohyo) nº 11-510377) . Sin embargo, el péptido de la presente invención indicado posteriormente, el uso farmacéutico del mismo y otros no han sido dados a conocer ni sugeridos.

Exposición de la invención Los diversos usos farmacéuticos son conocidos para sheathlin tal como se ha indicado anteriormente. En el caso de que una secuencia de aminoácidos en el sheathlin biológicamente activo sea identificada, y un péptido que presente dicha secuencia de aminoácidos pueda ser obtenido, puede proporcionarse a un coste más bajo un material farmacéutico que puede mostrar más eficazmente la actividad biológica del sheathlin.

La presente invención se llevó a cabo a partir del punto de vista anteriormente mencionado, y un objetivo de la misma es proporcionar un péptido derivado de sheathlin y que presente una actividad biológica, y un farmacéutico que contenga el péptido como ingrediente activo.

Los inventores de la presente invención realizaron asiduamente estudios con el fin de alcanzar el objetivo anteriormente mencionado. Como resultado, identificaron una secuencia de aminoácidos en el sheathlin que presentaba una actividad biológica, produjeron un péptido que presentaba dicha secuencia de aminoácidos, encontraron que el péptido mostraba diversas actividades biológicas, y de esta manera llevaron a cabo la presente invención.

Es decir, la presente invención proporciona un péptido que presenta la secuencia de aminoácidos siguiente (SEC ID nº 10) , uno de los péptidos denominado "péptido C" en la presente memoria.

Además, la presente invención también proporciona un agente que contiene el péptido de la presente invención como ingrediente activo (en lo sucesivo denominado "agente de la presente invención") . El agente de la presente invención es preferentemente un compuesto farmacéutico.

Además, el agente de la presente invención también es preferentemente un agente para estimular el crecimiento celular o la diferenciación celular. La "célula" de la que se estimula el crecimiento o la diferenciación preferentemente es un osteoblasto, condroblasto, cementoblasto, célula madre mesenquimal derivada de la médula ósea o célula derivada de ligamento periodontal.

Además, el agente de la presente invención también es preferentemente un agente para estimular la formación o regeneración de hueso o cartílago, o un agente para estimular la formación o regeneración del tejido periodontal.

Además, la presente invención proporciona una composición que contiene por lo menos el péptido de la presente invención y ácido hialurónico, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos (en lo sucesivo denominada "composición de la presente invención") .

Breve descripción de los dibujos La fig. 1 muestra los efectos de estimulación del crecimiento celular del péptido N de ejemplo comparativo (derivado de porcinos) sobre las células PDL (derivadas de células humanas) . La fig. 2 muestra los efectos de estimulación del crecimiento celular del péptido C (derivados de porcinos) sobre las células PDL (derivadas de seres humanos) . La fig. 3 muestra los efectos de estimulación del crecimiento celular del péptido N (derivada de porcinos y de seres humanos) sobre las células MC3T3 (derivadas de ratones) . La fig. 4 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular sobre los péptidos N y C de la presente invención (derivados de porcinos) sobre las células PDL (derivadas de seres humanos) . La fig. 5 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células PDL (derivadas de seres humanos) . La fig. 6 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células PDL (derivadas de seres humanos) . La fig. 7 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células ST2 (derivadas del ratón) . La fig. 8 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células BMSSC (derivadas de la rata) . La fig. 9 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células MC3T3 (derivadas del ratón) . La fig. 10 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos y seres humanos) sobre las células MC3T3 (derivadas del ratón) . La fig. 11 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular de los péptidos N (derivados de porcinos) sobre las células OCCM30 (derivadas del ratón) . La fig. 12 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular del péptido (incluyendo la deleción, derivado de seres humanos) sobre las células MC3T3 (derivadas del ratón) . La fig. 13 muestra los efectos de estimulación de la diferenciación celular del péptido (incluyendo la adición o la sustitución de varios residuos aminoácidos, derivado de seres humanos) sobre las células ST2 (derivadas del ratón) .

Mejor modo de poner en práctica la invención A continuación se explica la presente invención en detalle.

(1) Péptido N de ejemplo comparativo El péptido N es un péptido que presenta la secuencia de aminoácidos mostrada posteriormente (SEC ID nº 1) . El péptido N se diseñó basándose en la secuencia de aminoácidos que existe en el lado N-terminal de la proteína sheathlin.

X01 Pro X02 X03 X04 X05 X06 X07 X08 X09 X10 X11 X12 X13 X14 X15 X16 X17 X18 X19 X20

En la secuencia de aminoácidos anteriormente indicada, X01 a X20 representan los residuos aminoácidos siguientes:

X01: Val o Gln X02: Ala, Phe o Gly X03:... [Seguir leyendo]

1. Péptido que consiste de la secuencia de aminoácidos (H) siguiente :

(H) Asn Lys Ala Gln Gln Pro Gln Ile Lys Arg Asp Ala Trp Arg Phe (SEC ID nº 10)

2. Agente que comprende el péptido según la reivindicación 1 como ingrediente activo.

3. Agente según la reivindicación 2, que es un compuesto farmacéutico.

4. Agente según la reivindicación 2 ó 3, que es un agente estimulante de la diferenciación celular.

5. Agente según la reivindicación 5, en el que la célula es un osteoblasto, condroblasto, cementoblasto, células madre mesenquimal derivada de médula ósea o célula derivada de ligamento periodontal.

6. Composición que comprende por lo menos el péptido según la reivindicación 1 y ácido hialurónico o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.