Un oligómero de péptido A que comprende un resto de tirosina reticulada para usar en el tratamiento,

prevención o alivio de la enfermedad de Alzheimer.

Oligómeros de amiloide beta para uso en el tratamiento, el alivio o la prevención de la enfermedad de Alzheimer.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos y composiciones para el tratamiento o alivio de la enfermedad de Alzheimer y de otras condiciones relacionadas con la agregación anormal de proteínas. En particular, la invención se refiere a: péptidos amiloides con tirosina reticulada, para usar en el tratamiento, alivio o prevención de la enfermedad de Alzheimer.

Antecedentes de la invención

Las lesiones amiloides características de la enfermedad de Alzheimer (AD) están compuestas primariamente por Amiloide (A) (Glenner & Wong, 1984) , una proteína de 39-43 aminoácidos que es una proteína normalmente soluble hallada en fluidos biológicos. La formación de amiloides está ligada a la patogénesis de la enfermedad, identificando así los cambios neuroquímicos que llevan a la inhibición del catabolismo de A y su acumulación en la neocorteza sería una clave importante para la patogénesis de la AD.

A pesar de que la patología fundamental, la susceptibilidad genética y la biología asociada con la AD se están volviendo más claras, una base química y estructural racional para desarrollar fármacos efectivos para prevenir o curar la enfermedad sigue siendo difícil de alcanzar. Si bien la genética de la AD indica que el metabolismo de A está íntimamente asociada con la patogénesis de la enfermedad tal como se indicó con anterioridad, los fármacos para el tratamiento de AD se han centrado hasta ahora en “mejoradores de la cognición”, que no se dirigen a los procesos patológicos subyacentes. Estos fármacos han tenido sólo un éxito limitado.

La naturaleza del ambiente neuroquímico trastornado en la AD se puede deducir parcialmente de las modificaciones postraduccionales del A extraído de sistemas biológicos migra normalmente como un monómero aparente de ~ 4 kD en electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida (SDS-PAGE; (Shoji et al., 1992) ) ; sin embargo, el A extraído de especímenes de cerebro post mortem afectado por AD migra en SDS-PAGE como oligómeros resistentes a SDS, urea y ácido fórmico (Masters et al., 1985; Roher et al., 1996; Cherny et al., 1999) .

La espectrometría de masa-ionización por desorción láser asistida por matriz (MALDI-MS) de estos oligómeros resistentes a SDS extraídos de la placa neurítica y amiloide vascular indica la presencia de especies Av diméricas y triméricas reticuladas de forma covalente (Roher et al., 1996) .

A 1-40 y A 1-42 sintéticos normalmente migran como monómeros aparentes en SDS-PAGE, pero forman especies de un peso molecular aparentemente mayor después de incubación (Burdick et al., 1992) . Este proceso se acelera por exposición a sistemas oxidativos (Dyrks et al., 1992; Atwood et al., 1997) .

(Atwood et al., 1997) , es resistente, por ello, a la oligomerización oxidativa catalizada por metal y, quizás, esto explique la rareza de los depósitos amiloides en estos animales (Vaughan y Peters, 1981) .

La reticulación con tirosina en proteínas es un marcador sensible al estrés oxidativo. Los puentes covalentes de carbono-carbono o los puentes de carbono-oxígeno se forman entre residuos de tirosilo simples y/o residuos de ditirosilo, lo que da como resultado una cantidad de productos de reacción fluorescentes estables (Gross y Sizer, 1959; Amado et al., 1984, Jacob et al., 1996) . Los productos de reacción principales del radical de tirosilo libre son los aminoácidos intensamente fluorescentes 3, 3’-ditirosina (DT) , 3, 3’, 3’-tritirosina (TT) y pulcherosina (P) y la isoditirosina no fluorescente (iso-DT) (Gross y Sizer, 1959; Amado et al., 1984, Jacob et al., 1996; Heinecke et al., 1993) . Los niveles de DT y 3-nitrotirosina son elevados en el hipocampo y las regiones neocorticales de cerebros de pacientes con AD en comparación con las mismas regiones de cerebro normal y también son elevados en el fluido cerebroespinal ventricular en pacientes con AD (Hensley et al., 1998) .

La reticulación con tirosina también puede ser importante en otras enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson y otras condiciones en las que se depositan las fibrillas de -sinucleína. Incluyen la enfermedad de Parkinson propiamente dicha, demencia con formación de cuerpos de Lewy, atrofia sistémica múltiple, enfermedad de Hallerboden-Spatz y enfermedad de cuerpos de Lewy difusos. La exposición de sinucleína recombinante a agentes nitrantes da como resultado la nitración de residuos de tirosina, así como la oxidación de tirosina para formar DT; esto resulta en la reticulación de -sinucleína para formar agregados estables (Souza et al., 2000) . Los mismos autores también hallaron que se producen anticuerpos monoclonales contra la sinucleína nitrada unida específicamente a cuerpos de Lewy y a inclusiones de células gliales en una variedad de sinucleinopatías (Duda et al., en la preparación referido a Souza et al., 2000) .

derivado de amiloide humano contiene reticulaciones de tirosina e incluye especies reticuladas tanto de ditirosina como de tritirosina. Estas reticulaciones se pueden replicar in vitro, por ejemplo, al

humano sintético con peroxidasa y H2O2 o con H2O2 en presencia de iones cobre. Estas modificaciones son resistentes a proteasa y, por ello, proponemos que la reticulación de la tirosina en AD causada por la interacción anormal de A con H2O2 y peroxidasas o iones cobre contribuye a la formación de oligémeros de A neurotóxicos y a la deposición de A . La inmunización contra compuestos reticulados con tirosina de bajo peso molecular más que con A entero se puede usar, por ende, para el tratamiento o la prevención de AD, sin riesgo de provocar complicaciones autoinmunes que, de otro modo, podrían ser inducidas por inmunización con A intacto o grandes fragmentos de él. Al restringir el blanco de inmunoterapia a un fragmento o porción anormal de la molécula, puede ser posible minimizar una indeseable interferencia con la función normal de la molécula, proporcionando al mismo tiempo una terapia activa contra la molécula anormal. Se apreciará el uso de inmunización ya sea activa o pasiva.

Los procesos oxidativos que dan origen a una reticulación covalente de proteínas por medio de tirosina también están asociados con otros trastornos que se caracterizan por agregación patológica y acumulación de proteínas específicas. Por lo tanto, se considera que estas condiciones también serán responsables de la prevención o el tratamiento por medio del método de la invención.

Sumario de la invención

La invención proporciona un péptido A que comprende un resto de tirosina reticulada para usar en el tratamiento, prevención o alivio de la enfermedad de Alzheimer. El péptido puede ser una porción inmunogénica de la forma patológicamente agregada de A , donde el péptido comprende un resto de tirosina reticulada ligado a residuos corriente arriba y corriente abajo de la tirosina reticulada, un dímero, trímero o tetrámero del monómero de péptido AA

También se describe en la presente un método de prevención, tratamiento o alivio de una condición, en donde la condición se caracteriza por una agregación patológica y acumulación de una proteína específica asociada con el daño oxidativo y la formación de reticulaciones de tirosina, donde el método comprende la etapa de inmunizar a un sujeto que lo necesita con una dosis efectiva de inmunización de uno o varios compuestos seleccionados del grupo que consiste en ditirosina, tritirosina, tetratirosina (también conocida como pulcherosina) , ortólogos de tirosina oxidados tales como o-tirosina y m-tirosina, nitrotirosina y péptidos que comprenden reticulaciones de tirosina y que opcionalmente comprenden iones cobre en complejo con el compuesto. Estos compuestos se mencionan

colectivamente en la presente como “compuestos de tirosina reticulada”.

Un experto en la técnica reconocerá que una dosis efectiva de inmunización del compuesto es una que produce que el anticuerpo sea capaz de unirse con un compuesto reticulado con una tirosina. Dicha persona también será capaz de determinar si un compuesto particular reticulado con tirosina produce un anticuerpo.

La forma patológicamente agregada de la proteína específica puede comprender un resto reticulado con tirosina. El compuesto... [Seguir leyendo]

1. Un oligómero de péptido A que comprende un resto de tirosina reticulada para usar en el tratamiento, prevención

o alivio de la enfermedad de Alzheimer.

2. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con la reivindicación 1, que es una porción inmunogénica de la forma patológicamente agregada de A, donde el péptido comprende un resto de tirosina reticulada ligado a residuos corriente arriba y corriente abajo de la tirosina reticulada.

3. El péptido A para usar de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que es un dímero, trímero o tetrámero de un monómero de péptido A

4. El péptido A para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que es un dímero de un monómero de péptido seleccionado del grupo que consiste en A 1-40, A1-42 y A 9-16 humano.

5. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde las reticulaciones de tirosina en el péptido se pueden obtener por oxidación en presencia de iones cobre.

6. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 que se acopla con una proteína portadora que en sí es inmunogénica.

7. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la proteína portadora está seleccionada del grupo que consiste en toxoide tetánico, hemocianina de lapa californiana y albúmina.

8. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde el péptido se formula para administrar junto con un adyuvante.

9. El oligómero de péptido A para usar de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicho péptido comprende una o varias de las formas predominantes de reticulaciones de tirosina en la forma patológicamente agregada de A

10. Un anticuerpo que se produce contra un péptido A de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 ó 9

o un fragmento de anticuerpo de él para usar en la prevención, el tratamiento o el alivio de la enfermedad de Alzheimer, en donde dicho anticuerpo o fragmento de anticuerpo es capaz de unir específicamente la forma patológicamente agregada de A

11. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo para usar de acuerdo con la reivindicación 10, en donde dicho anticuerpo es policlonal.

12. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo para usar de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, en donde dicho anticuerpo es de origen humano.

13. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo para usar de acuerdo con la reivindicación 10, en donde el anticuerpo es monoclonal.

14. El anticuerpo o fragmento de anticuerpo para usar de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el anticuerpo es humanizado.

15. Una composición preventiva o terapéutica para usar como un medicamento que comprende un péptido de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

16. Una composición preventiva o terapéutica para usar de acuerdo con la reivindicación 15, que también comprende un adyuvante.

17. El uso de un péptido A de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 14 en la fabricación de un medicamento para tratar, prevenir o aliviar la enfermedad de Alzheimer.

18. Un método de diagnosis de la enfermedad de Alzheimer, que comprende la etapa de ensayar in vitro una muestra de un fluido biológico de un sujeto sospechado de sufrir de la condición por la presencia de una molécula que comprende reticulaciones de tirosina o un anticuerpo dirigido contra una molécula que comprende reticulaciones de tirosina.

19. El método de acuerdo con la reivindicación 18, en donde dicha molécula que comprende reticulaciones de tirosina es un péptido A de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 ó 9.

20. El método de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el péptido A comprende ditirosina.

21. El método de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, en donde el fluido biológico está seleccionado del grupo que consiste en sangre, plasma, suero, fluido cerebroespinal, orina y saliva.