La presente invención describe un procedimiento para la obtención de los principios activos responsables de la actividad biológica y farmacológica de la planta medicinal Peganum harmala,

mediante un procedimiento que consiste en una extracción selectiva de los alcaloides quinazolínicos (peganina o vasicina, deoxipeganina y glicósido de peganina) y beta-carbolínicos (harmalina y harmina). Los alcaloides aislados puros, en extractos y/o las fracciones enriquecidas de éstos, obtenidas desde distintas partes de la planta pueden ser utilizados en preparados farmacéuticos, cosméticos, nutracéuticos, productos naturales o preparados de herbolario y como remedio natural para el tratamiento de distintas patologías en las que se utilizan la planta medicinal P. harmala como los problemas o enfermedades respiratorias, infecciosas, neurodegenerativas, y cáncer. El procedimiento fracciona o purifica los principios activos evitando interacciones indeseables y aumentando la selectividad y seguridad de los extractos medicinales de P. harmala.

Procedimiento de obtención de los alcaloides activos de la planta medicinal Peganum harmala y su uso.

Sector de la técnica

La presente invención se encuadra en el sector químico y describe un procedimiento mejorado de producción y obtención de los principios activos de la planta medicinal P. harmala: alcaloides quinazolínicos (peganina -vasicina-, deoxipeganina y glicósido de peganina) y alcaloides beta-carbolina, harmalina y harmina para su uso en preparados farmacéuticos, cosméticos, parafarmacia, nutracéuticos y/o productos de herbolario para su uso como remedio natural o en el tratamiento de patologías en las que se utiliza tradicionalmente esta planta medicinal (por ej. enfermedades respiratorias, neurológicas, infecciones, antiparasitarias, antiprotozoarias) o como remedio natural en otros tratamientos dermatológicos (calvicie).

Estado de la técnica

Peganum harmala L. es una planta medicinal utilizada desde muy antiguo en distintas partes del mundo como remedio natural eficaz para el tratamiento de distintas patologías por sus propiedades farmacológicas y psicoactivas (análogo de Ayahuasca). P. harmala L. (Zygophyllaceae) (Syrian rue, harmal, harmel) es una planta perenne herbácea nativa de terrenos áridos del norte de África, región mediterránea, oriente medio, Paquistán, India y China y que se ha introducido y naturalizado en partes de sudoeste de EEUU, Sudáfrica y Australia. La ingestión de sus semillas poseen efectos hipotérmicos, y propiedades alucionógenas y se utiliza como remedio medicinal, incienso, especia y condimento. Tiene actividad como agente abortivo, narcótico, afrodisíaco, estimulante, sedativo, emenagogo, emético, y para el tratamiento de sífilis, fiebre, histeria, malaria, neuralgia, parkinsonismo, reumatismo, cólico, asma y enfermedades respiratorias y oculares (Berrougui et al., 2006, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 58, 967-974; Abdelfattah et al., 1995, Pharmacology Biochemistry and Behavior, 52, 421-426; Astulla et al., 2008, Journal of Natural Medicines, 62, 470-472; Elbahri and Chemli, 1991, Veterinary and Human Toxicology, 33, 276-277. Farouk et al., 2008, Journal of Ethnopharmacology, 115, 449-454.; Mahmoudian et al. (2002) Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics, 1, 1-4; Im et al., 2009, Vascular Pharmacology, 50, 147-152.; Shahverdi et al., 2008, Pharmacognosy Magazine, 4, 236-240.; Monsef et al., 2004, Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 7, 65-69). Extractos de P. harmala también son útiles contra la caída del cabello (Imad y col, patente FR2912914). Estudios recientes han demostrado que los extractos de P. harmala también tienen actividad como fungicida, bactericida y antitumoral (Sobhani et al., 2002, Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 5, 19-23; Lamchouri et al., 1999, Therapie, 54, 753-758.; Song et al., 2004 Biochemical and Biophysical Research Communications, 317, 128-132; Luay, 2003, patente NZ522055 y Suo Huazhong, 2001, patente CN1299664; Ismail, patente WO9924048).

Además de sus efectos farmacológicos, los extractos de P. harmala pueden ocasionar efectos toxicológicos moderados. Una sobredosis ingerida de P. harmala puede producir casos de intoxicación con parálisis, euforia, convulsiones, alucinaciones, problemas digestivos (nauseas, vómitos), hipotermia y bradicardia (Frison et al., 2009, Forensic Science International, 179, e37-e43; Ben Salah et al., 1986, Essaydali Scietifique, 21, 13-18). Estos efectos, son moderados y los síntomas remiten a las pocas horas de cesar en la ingestión. Preparaciones de la planta pueden mostrar efectos psicofarmacológicos potentes y pueden afectar a la enzima monoamino oxidasa (MAO) con la posibilidad de producir interacciones con alimentos y generar crisis hipertensivas debido a la presencia de aminas vasoactivas. Estos datos demuestran la necesidad de una caracterización y separación de los distintos principios activos de la planta ya que éstos conjuntamente pueden producir efectos contrarios e interacciones indeseables, impidiendo el uso racional de esta planta medicinal en distintas patologías. Una caracterización, fraccionamiento y purificación de los principios activos puede permitir la obtención de resultados mejores y más selectivos sobre los efectos farmacológicos buscados evitando posibles acciones toxicológicas secundarias.

Peganum harmala L. contiene diversos principios activos útiles en el tratamiento de enfermedades. Las propiedades farmacológicas de P. harmala se atribuyen principalmente a su contenido en alcaloides β-carbolínicos y quinazolínicos que son los principales principios activos de P. harmala. Los alcaloides β-carbolinas son sustancias psicoactivas que muestran potente actividad como inhibidores de MAO y ejercen actividad sobre el sistema CNS debido a la interacción con muchos receptores (Airaksinen y Kari, 1981, Medical Biology, 59, 190-211. Herraiz y Chaparro, 2005 Biochemical and Biophysical Research Communications, 326, 378-386). Estos compuestos podrían ser muy útiles como posibles agentes antidepresivos o para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.

Los alcaloides quinazolínicos son potentes broncodilatadores, agentes hipotensivos y pueden tener actividad antiprotozoaria (antileishmania) (Khaliq, 2009, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19, 2585). Son estimulantes de la contracción del útero y se han utilizado como agentes abortivos. Se ha sugerido, también, que estos componentes podrían inhibir la enzima MAO, tienen actividad acetilcolinesterasa y son de uso potencial en el tratamiento de la dependencia de nicotina (WO2008007163) y en la enfermedad de Alzheimer. Por tanto, estos alcaloides también podrían contribuir a los efectos psicofarmacológicos que produce la ingestión de P. harmala. Los alcaloides quinazolínicos también se encuentran en la planta medicinal Adhatoda vasica (US2003/0180392) (familia Acanthaceae), comúnmente conocida como Arusa, Vasaka, o Malabarnut. Esta planta se utiliza en la medicina India para el tratamiento de problemas respiratorios como catarro, asma, y resfriados, siendo los principales principios activos responsables de estas actividades, los alcaloides vasicina (peganina) y derivados de vasicina. Estos mismos compuestos pueden ser obtenidos desde la planta P. harmala tal y como se demuestra en esta invención.

Así pues, los principios activos de la planta P. harmala muestran destacada actividad biológica y farmacológica, y son utilizados en diversos tratamientos en la medicina tradicional y como remedios derivados de plantas medicinales. Sin embargo, cuando se utilizan conjuntamente podrían dar lugar a posibles efectos secundarios debido a los efectos cruzados de interacción entre principios activos en la acción farmacológica de los distintos principios activos. Así, por ejemplo, las β-carbolinas pueden mostrar actividad como inhibidores de MAO, y efectos sobre el SNC, mientras que la vasicina y los derivados quinazolínicos muestran actividad antiparasitaria o broncodilatadora. Unos u otros muestran acción citotóxica de posible aplicación en el tratamiento de tumores. Por ello, un procedimiento que consiga identificar, aislar y obtener los compuestos puros y fracciones de ellos enriquecidos con actividades selectivas para cada tratamiento tiene ventajas para su uso.

A pesar de las interesantes propiedades farmacológicas y toxicológicas de P. harmala, utilizada en la medicina oriental, no se han descrito con suficiente detalle procedimientos prácticos y determinaciones precisas sobre la distribución relativa y el contenido de alcaloides y principios activos en la planta. Algunos estudios son limitados y se centran en la presencia de beta-carbolinas con poca atención a las quinazolinas (Kartal et al., 2003, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 31, 263-269; Hemmateenejad et al., 2006, Analytica Chimica Acta, 575, 290-299. Pulpati et al., 2008 Journal of AOAC International, 91, 1179-1185). En la presente invención se describe la identificación y separación de los principales principios activos de la planta P. harmala tanto los alcaloides quinazolínicos como beta-carbolínicos, caracterizado su presencia en diferentes partes de la planta, y describiendo un nuevo compuesto activo caracterizado como un glicósido de peganina.

Para distinguir actividades biológicas, se determinan los alcaloides y fracciones de alcaloides de P. harmala...

1. Un procedimiento para la obtención y producción de los principios activos de la planta medicinal P. harmala, caracterizados por ser alcaloides quinazolínicos derivados de la Formula 1, y alcaloides beta-carbolínicos como harmalina y harmina,

donde el sustituyente R de la Formula 1, es H, deoxipeganina o deoxivasicina (1), OH, peganina o vasicina (2), o un sustituyente O-glicósido (3), donde la parte glicosídica unida al aglicón peganina (vasicina) es un disacárido constituido por dos carbohidratos o moléculas de hexosa (glucosa o sus isómeros o fructosa), y con uniones glicosídidas de la forma hexosa-O-hexosa-peganina,

y que se caracteriza por comprender alguno o varios de los siguientes pasos:

a) un procedimiento de extracción de hojas y flores pulverizadas secas de P. harmala en una disolución hidro-alcohólica-ácida, donde el alcohol se selecciona entre metanol, etanol, propanol o isopropanol y el medio ácido entre ácido clorhídrico, ácido perclórico o ácido acético, y que se utiliza para obtener compuestos de la formula 1, preferiblemente peganina (2).

b) un procedimiento de extracción de los frutos o capsulas verdes en un medio hidroalcohólico-ácido donde el alcohol se selecciona entre metanol, etanol, propanol, o isopropanol y el medio ácido entre ácido clorhídrico, ácido perclórico o ácido acético y que se utiliza para obtener alcaloides quinazolínicos de la formula 1, preferiblemente, peganina (vasicina) (2) y deoxipeganina (deoxivasina) (1),

c) un procedimiento de extracción de semillas secas pulverizadas en medio hidroalcohólico-ácido donde el alcohol se selecciona entre metanol, etanol, propanol, isopropanol y el medio ácido entre ácido clorhídrico, ácido perclórico o ácido acético, y que se utiliza para obtener preferiblemente los alcaloides quinazolínicos de la formula 1, peganina (vasicina) (2) y el peganina glicósido (3), y los alcaloides beta-carbolínicos harmalina y harmina,

d) un procedimiento en el que el extracto hidroalcohólico obtenido según los pasos a) o b), donde el extracto se lleva a pH básico (8-11), y se extrae con disolventes orgánicos, preferiblemente diclorometano o acetato de etilo,

e) un procedimiento en el que el disolvente orgánico obtenido en d) se concentra para obtener un extracto enriquecido en alcaloides quinazolínicos de la formula 1, preferiblemente, peganina (2) y deoxipeganina (1),

f) un procedimiento en el que el extracto obtenido según e) se purifica en columna cromatográfica para obtener puros los alcaloides peganina (vasicina) (2) y deoxipeganina (1),

g) un procedimiento en el que el extracto obtenido según el paso c) donde el extracto se lleva a pH 5-11, preferiblemente a pH 5, y se extrae con diclorometano o acetato de etilo,

h) un procedimiento según el paso g) en el que la fase acuosa que queda después de extraer con medio orgánico, se concentra a vacío para obtener un extracto enriquecido en alcaloides quinazolínicos de la formula 1, principalmente peganina (vasicina) (2) y peganina glicósido (3),

i) un procedimiento según el paso g) en el que la fase orgánica se concentra a vacío para obtener un extracto enriquecido en alcaloides de tipo beta-carbolina,

j) un procedimiento según el paso h) en el que los alcaloides quinazolínicos se purifican por columna cromatográfica C18, para obtener puros peganina (vasicina) (2) y glicósido de peganina (3),

k) un procedimiento según el paso i) en el que los alcaloides beta-carbolínicos se separan por columna cromatográfica preparativa para obtener puros los compuestos harmalina y harmina.

2. La utilización de los alcaloides quinazolínicos peganina (vasicina) (2), deoxipeganina (1) y peganina glicósido (3) de la formula 1, obtenidos puros, en extractos y/o fracciones enriquecidas de ellos, obtenidos desde la planta P. harmala según el procedimiento reivindicado en 1), para la elaboración de preparados farmacéuticos, nutracéuticos, parafarmacia, productos derivados de plantas medicinales y de herbolario, cosméticos, para el tratamiento, remedio natural o alivio de distintas enfermedades o patologías, entre las que se pueden incluir respiratorias, infecciosas, parasitarias, tumorales, neurodegenerativas.

3. La utilización de los alcaloides beta-carbolínicos harmalina y harmina puros y de las fracciones enriquecidas de ellos, obtenidos desde la planta P. harmala, según el procedimiento reivindicado en 1), para la elaboración de formulaciones o preparados farmacéuticos, nutracéuticos, preparados de plantas medicinales, y de herbolario o cosméticos para el tratamiento, remedio natural o alivio de distintas patologías, y particularmente para enfermedades del sistema nervioso central y cáncer.