Un método in vitro para inhibir la angiogénesis, comprendiendo el método poner en contacto células con una cantidad de una composición efectiva para inhibir la angiogénesis,

comprendiendo la composición un mimético peptídico a base de calixareno seleccionado de **Fórmula**

o derivados con puentes del compuesto 4, en el que el compuesto 4 es

Miméticos con conformación peptídica a base de calixareno, métodos de uso, y métodos para obtenerlos ANTECEDENTES

Los péptidos que destruyen la membrana bacteriana, que tienen su origen en péptidos catiónicos de origen natural, ofrecen alternativas prometedoras como antibióticos del futuro. Estos nuevos agentes demuestran generalmente un amplio espectro de actividad antibacteriana, y actúan destruyendo la integridad de toda la membrana celular bacteriana, reduciendo de ese modo el riesgo de resistencia a fármacos (M.L. Cohen, Science 257, 1050-55 (1992) ; y A.M.D. Virk et al., Mayo Clinic Proc. 75, 200-214 (2000) ) . Los péptidos antibacterianos tienen dos rasgos principales distintivos: una carga positiva neta, típicamente de +2 a +6, y un plegamiento anfipático global que proporciona caras polares e hidrófobas a la molécula (A. Giangaspero et al., Eur. J. Biochem. 268, 5589-5600 (2001) ) . La naturaleza catiónica de los péptidos antibacterianos promueve aparentemente la interacción selectiva con la superficie cargada negativamente de las membranas bacterianas con relación a la superficie más neutra de membranas eucariotas (K. Matsuzaki et al., Biochemistr y 36, 9799-9806 (1997) ) . Una vez atraído a la superficie, el péptido, con su topología anfipática, dispara la lisis celular bacteriana (D. Andreu et al., Biochemistr y 24, 1683-1688 (1985) ) .

La septicemia y el choque séptico son complicaciones sistémicas asociadas normalmente con elevados niveles de endotoxina de lipopolisacárido (LPS) en el torrente sanguíneo. Se sabe que muchos péptidos bactericidas se unen in vitro a y neutralizan LPS (por ejemplo, cecropinas, magaininas, péptidos ricos en prolina-arginina, sapecina, taquiplesina, y defensinas) (Andreu et al., Biopolymers, 47; 415-33 (1998) ) , así como, más recientemente, péptidos !pep (Mayo et al., Protein Sci., 5; 13001-1315 (1996) ; Mayo et al., Biochem. Biophys. Acta, 1425; 81-92 (1998) ) , SC4 (Mayo et al., Biochem. J., 349 (3) ; 717-28 (2000) ) , y péptido a base de lactoferrina LF11 (Japelj et al., J. Biol. Chem., 280; 16955-61 (2005) ) . Quizá el más prototípico es polimixina B (PmxB) , un pequeño lipopéptido cíclico (Rifkind, J. Bacteriol., 93; 1463-4 (1967) ) . Sin embargo, debido a su elevada neuro- y nefrotoxicidad, PmxB está limitado a la aplicación tópica, y la mayoría de otros agentes bactericidas no son muy efectivos frente a LPS in vivo.

Algunas proteínas bactericidas de origen natural también poseen propiedades neutralizadoras de endotoxinas. También se han identificado varios destructores de membranas no peptídicos (Lockwood et al., Drugs of the Future 28, 911-923 (2003) ) . El más sobresaliente de estos es escualamina, que es anfipático, no por la naturaleza de su estructura plegada, sino por la presencia de apéndices cargados (incluyendo la triamina policatiónica) en un núcleo esteroideo (Moore et al. Proc Natl. Acad. Sci. USA 90, 1354-1358 (1993) ) . El mecanismo de escualamina, a pesar de su pequeño tamaño, es similar a la de los péptidos destructores de membranas (Selinsky et al., Biochim. Biophys. Acta 1370, 218-234 (1998) ; Selinsky et al., Biochim. Biophys. Acta 1464, 135-141 (2000) ) .

Un estudio estructural de estos péptidos revela que, independientemente de su conformación plegada, destacan dos rasgos que son importantes para la unión a LPS: el carácter anfipático y una carga neta positiva (Lockwood et al., Drugs of the Future, 28; 911-923 (2003) ) . Presumiblemente, los restos cargados positivamente del péptido promueven la interacción con grupos cargados negativamente en LPS, es decir, fosfatos en las glucosaminas del lípido A y/o aquellos en la unidad de polisacárido del núcleo interno, mientras que los restos hidrófobos del péptido interaccionan con las cadenas acílicas en el lípido A. Los estudios estructurales de péptidos en complejo con LPS apoyan esta noción, y han proporcionado una comprensión adicional de los orígenes moleculares de la neutralización de LPS mediada por péptidos (Japelj et al., J. Biol. Chem., 280; 16955-61 (2005) ; Ferguson et al., Science, 282; 2215-20 (1998) ; Pristovsek et al., J. Med. Chem., 42; 4604-13 (1999) ) .

De forma interesante, el motivo de una estructura anfipática positivamente cargada (principalmente lámina ! antiparalela) también se encuentra en un número de proteínas y péptidos que funcionan como agentes antiangiogénicos (Dings et al., Angiogenesis, 6; 83-91 (2003) ) . Por ejemplo, la angiostatina se pliega en una estructura de lámina ! antiparalela con un sitio de unión rico en lisina muy electropositivo (Abad, J. Mol. Biol., 318; 1009-17 (2002) ) . La endostatina tiene una estructura de lámina ! predominantemente antiparalela (Hohenester et al., EMBO J., 17; 1656-1664 (1998) ) y está cargada muy positivamente, particularmente debido a la presencia de múltiples restos de arginina. La angiogénesis, el proceso de formación de nuevos vasos sanguíneos, es clave para el desarrollo normal de órganos, así como para diversos trastornos patológicos como cáncer, artritis, endometriosis, retinopatía diabética, y restenosis (Griffioen et al., Pharmacol. Rev., 52; 237-68 (2000) ) . El uso de agentes que pueden inhibir la angiogénesis, particularmente en investigación antitumoral, ha indicado que la terapia antiangiogénica es una modalidad terapéutica prometedora (Boehm et al., Nature, 390; 404-7 (1997) .

En la pasada década más o menos, los investigadores han comenzado a desarrollar péptidos modificados o totalmente sintéticos (Sitaram et al., Int. J. Pept. Protein Res. 46, 166-173 (1995) ; Saberwal et al., Biochim. Biophys. Acta 984, 360-364 (1989) ; Tossi et al., Eur. J. Biochem. 250, 549-558 (1997) ; Blondelle et al., Antimicrob. Agents Chemother. 40, 1067-1071 (1996) ; Dathe et al., Biochim. Biophys. Acta 1462, 71-87 (1999) ; y Beven et al., Eur. J. Biochem. 270, 2207-2217 (2003) ) . Algunos péptidos anfipáticos resultantes muestran amplia actividad bactericida prometedora y especificidad por células bacterianas en lugar de células eucariotas (R.E. Hancock, Lancet 349, 418422 (1997) ; Hancock et al., Adv. Microb. Physiol. 37, 135-175 (1995) . Se ha hecho poco para diseñar compuestos topomiméticos no peptídicos que imiten una porción de la superficie de una proteína o péptido. Todavía se necesitan compuestos topomiméticos adicionales.

SUMARIO

La presente invención se refiere a una clase de compuestos topomiméticos que proporcionan una variedad de actividades biológicas. Estos compuestos topomiméticos incluyen miméticos peptídicos que usan un andamio orgánico y grupos particulares para modelar las características de superficie de moléculas bioactivas existentes. El uso de un andamio orgánico permite la preparación de compuestos que tienen una variedad de actividades biológicas y propiedades farmacocinéticas potencialmente superiores. Esta clase de compuestos incluye miméticos peptídicos a base de calixareno. Se ha preparado una librería de miméticos peptídicos a base de calixareno, y se muestra aquí que posee actividad biológica (por ejemplo, actividad bactericida, actividad angiogénica, y/o actividad antitumoral) .

Un aspecto de la presente invención se basa en la capacidad para capturar más completamente las conformaciones plegadas de pequeños segmentos de topografía proteica (por ejemplo, hélice y lámina beta) , ejemplificado en dos péptidos (!pep-25 y SC4) con actividades biológicas en cierto modo diferentes, usando calixareno en un método de enfoque a base de andamio. Ventajosamente, se puede emplear una librería a base de calixareno de compuestos análogos para buscar actividades en otros sistemas por lo cual se puede imitar la actividad biológica.

En consecuencia, en un aspecto, la presente invención proporciona los siguientes apartados:

1. Un método in vitro para inhibir la angiogénesis, comprendiendo el método poner en contacto células con una cantidad de una composición efectiva para inhibir la angiogénesis, comprendiendo la composición un mimético peptídico a base de calixareno seleccionado de Compuesto 27 Compuesto 40

o derivados con puentes del compuesto 4, en el que el compuesto 4 es Compuesto 4

2. Una composición que comprende un mimético peptídico a base de calixareno como se define en el apartado 1, en la que la composición es para uso en el tratamiento o prevención de crecimiento tumoral, artritis, restenosis, aterosclerosis, retinopatía diabética, glaucoma neovascular, y endometriosis.

3. Una composición que comprende un mimético peptídico a base de calixareno como se... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para inhibir la angiogénesis, comprendiendo el método poner en contacto células con una cantidad de una composición efectiva para inhibir la angiogénesis, comprendiendo la composición un mimético peptídico a base de calixareno seleccionado de Compuesto 27 Compuesto 40

o derivados con puentes del compuesto 4, en el que el compuesto 4 es Compuesto 4

10 2. Una composición que comprende un mimético peptídico a base de calixareno como se define en la reivindicación 1, en la que la composición es para uso en el tratamiento o prevención de crecimiento tumoral, artritis, restenosis, aterosclerosis, retinopatía diabética, glaucoma neovascular, y endometriosis.

3. Una composición que comprende un mimético peptídico a base de calixareno como se define en la reivindicación 1, en la que la composición es para uso en la inhibición de tumorigénesis.

15 4. Uso de un mimético peptídico a base de calixareno como se define en la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para inhibir la tumorigénesis.

5. Uso de un mimético peptídico a base de calixareno como se define en la reivindicación 1, para la preparación de un medicamento para tratar o prevenir crecimiento tumoral, artritis, restenosis, aterosclerosis, retinopatía diabética, glaucoma neovascular, y endometriosis.

20 6. El método, composición o uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que los miméticos peptídicos a base de calixareno se proporcionan como una sal farmacéuticamente aceptable.

7. El método, composición o uso de cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el mimético peptídico a base de calixareno comprende una forma iónica que está cargada positivamente.

8. El método de la reivindicación 1, en el que las células están presentes en un cultivo celular, un tejido, un órgano, o 25 un organismo.

9. El método de la reivindicación 1, en el que las células son células de mamífero.

10. El método de la reivindicación 9, en el que las células son células humanas.

11. El método, composición o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el mimético peptídico a

base de calixareno es compuesto 27.

12. El método, composición o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el mimético peptídico a base de calixareno es compuesto 40.

13. El método, composición o uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en el que el mimético peptídico a base de calixareno es los derivados en puente de compuesto 4.