Conjugado de anticuerpo - polímero de peine.

Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine que tiene la fórmula (Ia) o (Ib) :

en las que:

y es 1, 2 o 3; m es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10; 1

B1 representa un halógeno;

B2 representa H o un halógeno;

A representa el residuo de un anticuerpo o uno de sus fragmentos;

L representa un grupo enlazador; Y representa un grupo espaciador; y

X representa un resto de polímero de peine que comprende w equivalentes de una o más moléculas efectoras y z equivalentes de uno o más restos solubilizantes en agua, en la que X comprende los componentes de fórmula (III) y (IV) en cualquier orden: en las que:

w es al menos 1;

z es 0 o mayor;

T no está o es un grupo enlazador;

W es una molécula efectora;

Z es un resto solubilizante en agua;

M es NH u O; y

R1 es metilo o H.

Conjugado de anticuerpo - polímero de peine.

La presente invención se refiere a compuestos para uso en la unión de moléculas efectoras a anticuerpos. Más específicamente la invención se refiere a moléculas que comprenden conjugados de anticuerpo - polímero de peine a las que se unen moléculas efectoras y restos solubilizantes. También se proporcionan métodos para la producción de tales moléculas y composiciones farmacéuticas que las contienen.

La especificidad de unión de los anticuerpos se puede usar para administrar moléculas efectoras, tales como fármacos, a dianas terapéuticas específicas tales como células tumorales. Las moléculas efectoras pueden unirse a anticuerpos usando diversos métodos que incluyen, por ejemplo, la unión directa (véanse, por ejemplo, los documentos US 5.677.425; EP 0948544) o la unión mediante un enlazador (véase, por ejemplo, el documento US 6.214.345) .

Se puede unir polietilenglicol (PEG) a proteínas o polipéptidos para reducir la inmunogenicidad, incrementar la semivida de circulación in vivo y para incrementar la solubilidad de la proteína. Se puede unir PEG a la proteína como un polímero de peine (véase, por ejemplo, el documento WO 2004/113394) .

La presente invención proporciona nuevos conjugados de anticuerpo - polímero de peine a los que se pueden unir tanto moléculas efectoras como restos solubilizantes.

Por lo tanto, la presente invención proporciona compuestos que constan esencialmente de uno o más anticuerpos unidos a uno o más polímeros de peine en los que el polímero de peine comprende una o más moléculas efectoras y opcionalmente uno o más grupos solubilizantes.

En consecuencia la presente invención proporciona un compuesto de fórmula (Ia) o (Ib) :

en las que:

y es 1, 2 o 3 m es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 B1 representa un halógeno B2 representa H o un halógeno A representa el residuo de un anticuerpo o uno de sus fragmentos 45 Y representa un grupo espaciador L representa un grupo enlazador X representa un resto de polímero de peine que comprende w equivalentes de una o más moléculas efectoras y z 50 equivalentes de uno o más restos solubilizantes en agua, en el que X comprende los componentes de fórmula (III) y (IV) en cualquier orden:

en las que: w es al menos 1; z es 0 o mayor;

T no está o es un grupo enlazador;

W es una molécula efectora Z es un resto solubilizante en agua; M es NH u O; y R1 es metilo o H.

Preferentemente, el compuesto de fórmula (Ia) tiene la fórmula (IIa) .

Preferentemente, el compuesto de fórmula (Ib) tiene la fórmula (IIb) .

De manera adecuada m es 1 o 2.

En una realización, y es 1.

Preferentemente el halógeno para uso en la presente invención es o bien bromo o bien cloro. Preferentemente cloro.

Como se usa en el presente documento, el término "residuo" se entenderá que significa la parte de un anticuerpo o uno de sus fragmentos que permanece después de haber experimentado una reacción de sustitución como tal terminología es conocida para la persona experta en la técnica.

El residuo A incluye residuos de anticuerpos enteros y sus fragmentos o derivados funcionalmente activos y pueden ser, pero no se limitan a, anticuerpos policlonales, monoclonales, humanizados o quiméricos, anticuerpos de una sola cadena, fragmentos Fab, Fab' y F (ab') 2 y fragmentos de unión a epítopos de cualquiera de los anteriores.

Se apreciará que el residuo A incluye residuos de anticuerpos entrecruzados. Tales anticuerpos entrecruzados son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, el documento US 5.262.524) . El término "anticuerpos entrecruzados" como se usa en el presente documento se refiere a dos, tres o cuatro anticuerpos o sus fragmentos, enlazados mediante una estructura de conexión. La estructura de conexión puede ser cualquier estructura molecular capaz de enlazar los anticuerpos o sus fragmentos juntos véase, por ejemplo, el documento WO 92/22583, que describe proteínas de unión a antígeno monoespecíficas tri-y tetravalentes que comprenden fragmentos Fab' unidos entre sí mediante una estructura de conexión. En una realización el anticuerpo entrecruzado comprende tres fragmentos de anticuerpo, preferentemente fragmentos Fab' conectados como se describe en el documento WO 2005/113605, publicado el 1 de diciembre de 2005. En otra realización el anticuerpo entrecruzado comprende dos fragmentos de anticuerpo conectados como se describe en el documento WO 2005/061005.

Los anticuerpos incluyen moléculas de inmunoglobulina y partes inmunológicamente activas de moléculas de inmunoglobulina, es decir, moléculas que contienen un sitio de unión a antígeno que específicamente une un antígeno. Las moléculas de inmunoglobulina de la invención pueden ser de cualquier clase (por ejemplo, IgG, IgE, IgM, IgD o IgA) o subclase de molécula de inmunoglobulina.

Los anticuerpos monoclonales se pueden preparar mediante cualquier método conocido en la técnica tal como técnica de hibridoma (Kohler & Milstein, Nature, 1975, 256, 495 - 497) , la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de linfocitos B humanos (Kozbor et al., Immunology Today, 1983, 4, 72) y la técnica de hibridoma de EBV (Cole et al., "Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy", p. 77 - 96, Alan R. Liss, Inc., 1985) .

Los anticuerpos para uso en la invención también se pueden generar usando métodos de anticuerpo de linfocitos individuales mediante clonación y expresión de ADNc de región variable de inmunoglobulina generados a partir de linfocitos individuales seleccionados para la producción de anticuerpos específicos, por ejemplo, por los métodos descritos por Babcook, J. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93 (15) , 7843 - 7848, en los documentos WO 92/02551, WO 2004/051268 y WO 2004/106377.

Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo que comprenden una o más regiones determinantes de la complementariedad (CDR) de una especie no humana y una región estructural de una molécula de inmunoglobulina humana (véase, por ejemplo, el documento US 5.585.089) .

Los anticuerpos quiméricos son los anticuerpos codificados por genes de inmunoglobulina que se han modificado por ingeniería genética de manera que los genes de la cadena ligera y pesada están compuestos de segmentos de genes de inmunoglobulina que pertenecen a diferentes especies.

Los anticuerpos para uso en la presente invención también se pueden generar usando diversos métodos de presentación en fago conocidos en la técnica e incluyen los descritos por Brinkman et al., J. Immunol. Methods, 1995, 182, 41 - 50; Ames et al., J. Immunol. Methods, 1995, 184, 177 - 186; Kettleborough et al. Eur. J. Immunol., 1994, 24, 952 - 958; Persic et al., Gene, 1997 187, 9 - 18; y Burton et al., Advances in Immunology, 1994, 57, 191 - 280; los documentos WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982 y WO 95/20401; y los documentos US 5.698.426, 5.223.409, 5.403.484, 5.580.717, 5.427.908, 5.750.753, 5.821.047, 5.571.698, 5.427.908, 5.516.637, 5.780.225, 5.658.727, 5.733.743 y 5.969.108. También se pueden adaptar técnicas para la producción de anticuerpos de una sola cadena, tales como los descritos en el documento US 4.946.778, para producir anticuerpos de una sola cadena. También se pueden usar, ratones transgénicos, u otros organismos, incluyendo otros mamíferos, para expresar anticuerpos humanizados.

En un ejemplo los fragmentos de anticuerpo son fragmentos Fab' que poseen una región bisagra nativa o modificada. Ya se han descrito varias regiones bisagra modificadas, por ejemplo, en los documentos US 5.677.425, WO 9915549 y WO 98/25971.

Otros fragmentos de anticuerpo incluyen los descritos en los documentos WO 2005/003169, WO 2005/003170 y WO 2005/003171.

De manera adecuada los fragmentos de anticuerpo para uso en la presente invención contienen un único tiol libre, preferentemente en la región bisagra.

Los anticuerpos o sus fragmentos de la presente invención en general serán capaces de unirse selectivamente a un antígeno. El antígeno puede ser cualquier antígeno asociado a células, por ejemplo un antígeno de superficie sobre células tales como células bacterianas, células de levaduras, linfocitos T, células endoteliales o células tumorales, o puede ser un antígeno soluble. Los antígenos también pueden... [Seguir leyendo]

1. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine que tiene la fórmula (Ia) o (Ib) :

en las que: 10 y es 1, 2 o 3; m es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10; 15 B1 representa un halógeno; B2 representa H o un halógeno; A representa el residuo de un anticuerpo o uno de sus fragmentos; 20 L representa un grupo enlazador; Y representa un grupo espaciador; y 25 X representa un resto de polímero de peine que comprende w equivalentes de una o más moléculas efectoras y z equivalentes de uno o más restos solubilizantes en agua, en la que X comprende los componentes de fórmula (III) y (IV) en cualquier orden: en las que:

w es al menos 1;

z es 0 o mayor;

T no está o es un grupo enlazador;

W es una molécula efectora;

Z es un resto solubilizante en agua; 15 M es NH u O; y R1 es metilo o H.

2. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el resto solubilizante 20 en agua Z se selecciona entre:

, , , y .

3. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que T es:

en la que T1 representa [CH2]t o CH2CH2[OCH2CH2]n donde t está entre 1 y 10 y n está entre 5 y 100.

4. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que m es 1 o 2.

5. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que y es 1. 10

6. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que L se selecciona entre:

- (CH2) n- en la que n es 1, 2, 3, 4, 5 o 6; y 15

.

7. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con la reivindicación 6, en el que n es 2.

8. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que M es NH.

9. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en el que w está entre 1 y 20. 25

10. Un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que z está entre 1 y 20.

11. Una composición farmacéutica que comprende un conjugado de anticuerpo - polímero de peine de acuerdo con

una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 en asociación con uno o más vehículos, excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.