Compuestos de insulina lispro pegilados.

Un compuesto de insulina lispro PEGilado de fórmula:

P-[(A)-(B)],

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

A es la cadena A de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 1;

B es la cadena B de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 3; y

P es un PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 17,5 kDa aaproximadamente 40 kDa, y en el que A y B están adecuadamente reticuladas y P está unidodirectamente mediante un enlace covalente de uretano al grupo épsilon-amino de la lisina en laposición 28 de la cadena B.

Compuestos de insulina lispro pegilados La presente invención se refiere al campo de la diabetes. Más particularmente, la invención se refiere a compuestos de insulina lispro PEGilados que son muy solubles y que tienen un perfil de acción extendido, a procedimientos para proporcionar dichas moléculas, a composiciones farmacéuticas que las contienen y al uso terapéutico de dichos compuestos.

Con el fin de alcanzar una glucemia normal se ha diseñado una terapia de sustitución de insulina en paralelo lo más cercano posible al patrón de secreción de insulina endógena en individuos normales. La demanda fisiológica diaria de insulina fluctúa y se puede separar en dos fases: (a) la fase de absorción que requiere un pulso de insulina para deshacerse del pico de glucosa en sangre relacionada con la comida, y (b) la fase postabsorción que requiere una cantidad sostenida de insulina para regular la salida de glucosa hepática para mantener una glucemia en ayunas óptima. De acuerdo con esto, la terapia eficaz con insulina para diabéticos normalmente implica el uso combinado de dos tipos de formulaciones de insulina exógena: una insulina a la hora de las comidas de acción rápida suministrada en inyecciones de bolos y una insulina de acción más prolongada que se administra mediante inyección una o dos veces al día para controlar los niveles de glucosa en sangre entre comidas.

Las terapias de sustitución de insulina disponibles actualmente son deficientes en uno o más aspectos clínicamente importantes. Por ejemplo, las formulaciones de insulina tradicionales de acción intermedia y larga, como el análogo de la insulina basal, la insulina determir, poseen una duración de actividad que no es suficiente para proporcionar un control de la glucosa basa para todo un día cuando se administran diariamente. Como resultado, la duración de la acción de la insulina basal suele ser insuficiente para controlar adecuadamente la hiperglucemia y, más específicamente, los requisitos de la fase postadsorción, con una única inyección diaria. Además, la omisión de una sola inyección de las terapias actuales puede conducir a un incremento significativo de los niveles "pico a valle" del fármaco, lo que da lugar a un control alterado de la glucosa. Además, la utilización de estrategias de insolubilidad para prolongar la liberación de insulina en las formulaciones tradicionales de acción intermedia y larga, por ejemplo suspensiones cristalinas de insulina Neutral Protamine Hagedorn (NPH) y ULTRALENTE®, o la estrategia de precipitación in vivo de la insulina glargina, aumentan la variabilidad intra-inyección, que tiene como resultado un incremento de la variabilidad del perfil dosis-respuesta. Más específicamente, las suspensiones NPH and ULTRALENTE requieren mezclado mecánico para asegurar la uniformidad del producto, presentan mayor variabilidad intra-sujeto y tienden a un pico en lugar de proporcionar un perfil farmacodinámico "plano" necesario para mantener la glucemia óptima en ayunas durante un periodo de tiempo extendido entre comidas. Por tanto, las formulaciones de insulina que dependen de un estado de insoluble para prolongar el mantenimiento de la insulina son, inherentemente, menos predecibles que las formulaciones solubles y tienen como resultado un control menos que adecuado de la glucemia y una mayor susceptibilidad a episodios hipoglucémicos que amenazan la vida. Adicionalmente, los modernos análogos de la insulina basal no se pueden mezclar fácilmente con formulaciones de insulina de acción rápida o inmediata. Por tanto, las actuales terapias de sustitución de insulina todavía dejan pacientes diabéticos susceptibles a episodios hipoglucémicos que amenazan la vida, las serias complicaciones médicas a largo plazo de la diabetes y/o imponen considerables inconvenientes y desventajas sobre la calidad de vida del paciente.

La patente de EE.UU. nº. 4, 179, 337 titulada "Polipéptidos no inmunogénicos" divulga insulina conjugada a moléculas PEG lineales que tienen un peso molecular de entre aproximadamente 500 y aproximadamente 20.000 Da. Hinds y Kim divulgaron insulina conjugada con peso molecular bajo (600 Da, 750 Da y 2000 Da) monometoxipoli (etilenglicol) (Hinds, K.D., y Kim, y col., Advanced Drug Deliver y Reviews, 54:505-530 (2002) ) . En dicho artículo, los autores indicaron que restringían su estudio a conjugados de insulina mPEG de bajo peso molecular "porque anteriormente se había encontrado que la fijación de mPEG de peso molecular más alto (5.000 Da) deprimía considerablemente la bioactividad del conjugado". La publicación de solicitud de patente internacional PCT nº WO 2006/079641 divulga la conjugación de derivados de insulina, incluida la insulina lispro, con polímeros ramificados pequeños. La publicación de solicitud de patente internacional PCT nº WO 2004/091494 divulga, entre otras, moléculas de insulina conjugada a moléculas PEG lineales y ramificadas que tienen un peso molecular total del PEG de hasta y aproximadamente 10 kDa y aproximadamente 20 kDa, respectivamente. Las publicaciones de solicitud de patente internacional PCT nº WO 2008/015099 (publicada el 7 de febrero de 2008) y WO 2008/084051 (publicado el 17 de julio de 2008) divulgan, entre otros, varios análogos de insulina conjugada a moléculas de PEG que tienen un peso molecular nominal en el intervalo de aproximadamente 200 a aproximadamente 40.000 Da.

Claramente, todavía existe una necesidad crítica de insulinas de duración larga que están más adecuados para regímenes de sustitución de insulina basal. En concreto, se necesitan insulinas basales solubles que se pueden mezclar con formulaciones de insulina prandial tienen perfiles de acción-tiempo extendidos (es decir, pueden controlar adecuadamente los niveles de glucosa e sangre con una inyección una vez al día o con menor frecuencia) , actividad más plana, perfiles de farmacocinética (es decir, proporciones "pico a valle" menores) , menor variabilidad intra-paciente (es decir, perfil de tiempo-acción más predecible que se traduce en una menor "incidencia de la hipoglucemia y/o ganancia de peso) y/o menor irritación o dolor en el sitio de la inyección tras la inyección.

Los autores han informado en el presente documento del descubrimiento de que la insulina lispro se puede PEGilar con derivados de poli (etilenglicol) de peso molecular alto para proporcionar compuestos de insulina lispro PEGilada que tienen una actividad de insulina basal terapéuticamente eficaz, perfiles de acción-tiempo extendidos, son muy solubles a pH fisiológico y/o son miscibles con otras formulaciones de insulina prandial usadas.

De acuerdo con un primer aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I:

P-[ (A) - (B) ], o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

A es la cadena A de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 1;

B es la cadena B de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 3; y P es PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 20 kDa a aproximadamente 40 kDa, y en la que la A y la B están adecuadamente reticuladas y P está unido, directa o indirectamente mediante un enlace covalente, al grupo alfa-amino de la glicina en la posición 1 de A, al grupo alfa-amino de la fenilalanina en la posición 1 de B o el al grupo épsilon-amino de la lisina en la posición 28 de B.

Preferentemente, el compuesto de insulina lispro de la presente invención tiene un PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 17, 5 kDa a aproximadamente 25 kDa. Más preferentemente, el PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 20 kDa a aproximadamente 25 kDa. Incluso más preferentemente, el PEG tiene un peso molecular de aproximadamente 20 kDa.

El compuesto de insulina lispro de la presente invención tiene una proporción pico:valle inferior a 2 tras la administración parenteral a un paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto.

La presente invención también proporciona composiciones que comprenden una pluralidad de compuestos de insulina lispro mono y di PEGilados, en los que más del 75 % de los compuestos de insulina lispro PEGilados en la composición son compuestos monoPEGilados de Fórmula I.

La presente invención también proporciona composiciones que comprenden compuestos de insulina monoPEGilados de Fórmula I en los que más de aproximadamente el 50 % de los compuestos monoPEGilados en la composición tienen un PEG unido covalentemente directa o indirectamente al grupo épsilon-amino de la lisina en la... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de insulina lispro PEGilado de fórmula:

P-[ (A) - (B) ], o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la que:

A es la cadena A de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 1;

B es la cadena B de la insulina lispro y tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 3; y P es un PEG que tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 17, 5 kDa a aproximadamente 40 kDa, y en el que A y B están adecuadamente reticuladas y P está unido directamente mediante un enlace covalente de uretano al grupo épsilon-amino de la lisina en la posición 28 de la cadena B.

2. El compuesto de la reivindicación 1, en el que el PEG tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 17, 5 kDa a aproximadamente 25 kDa.

3. El compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el PEG tiene un peso molecular en el intervalo de aproximadamente 20 kDa a aproximadamente 25 kDa.

4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el PEG tiene un peso molecular en el de aproximadamente 20 kDa.

5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que además se caracteriza por ser capaz de tener una proporción pico:valle inferior a 2 tras la administración parenteral a un paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto.

6. Una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para su uso en terapia.

7. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para su uso en el tratamiento de la hiperglucemia o la diabetes.

8. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 que comprende además un tampón TRIS a una concentración en el intervalo de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 25 mM TRIS, en la que el pH de dicha composición farmacéutica es de aproximadamente pH 7, 0 a aproximadamente pH 8, 0 y al menos un agente de isotonicidad, en la que la composición tiene una isotonicidad de aproximadamente 270 mOsm a aproximadamente 330 mOsm.

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 8 que comprende además un tampón fosfato a una concentración en el intervalo de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 10 mM y en la que el pH de dicha composición farmacéutica es de aproximadamente pH 7, 0 a aproximadamente pH 7, 5 y al menos un agente de isotonicidad, en la que la composición tiene una isotonicidad de aproximadamente 270 mOsm a aproximadamente 330 mOsm.

11. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, que comprende un compuesto de insulina lispro PEGilado a una concentración de aproximadamente 15 mg/ml a aproximadamente 40 mg/ml, cinc a una proporción de cinc a compuesto de insulina lispro PEGilado de aproximadamente 0, 33 a aproximadamente 0, 83, y m-cresol a una concentración de aproximadamente 10 mM a aproximadamente 40 mM a un pH de aproximadamente 7, 0 a aproximadamente 8, 0.

12. La composición farmacéutica de una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, que además comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de insulina lispro que consiste en una cadena A y una cadena B, en la que la cadena A tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 1 y la cadena B tiene la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 3, y en el que la cadena A y la cadena B están adecuadamente reticuladas.

13. Un procedimiento de fabricar un compuesto de insulina lispro PEGilado de fórmula:

P-