COMPOSICIONES Y USOS PARA ESTABILIZAR LA TRANSTIRETINA E INHIBIR EL PLEGAMIENTO ANÓMALO DE LA TRANSTIRETINA.

Diflunisal para uso en el tratamiento de una enfermedad amiloide por transtiretina,

en donde el diflunisal se prepara para ser administrado en una cantidad de 250 mg dos veces al día

Composiciones y usos para estabilizar la transtiretina e inhibir el plegamiento anómalo de la transtiretina.

La invención se refiere, en general, a un plegamiento anómalo de proteínas. Más particularmente, esta invención proporciona composiciones y usos para estabilizar la transtiretina, inhibiendo el plegamiento anómalo de la transtiretina y tratar enfermedades amiloides asociadas con la misma.

La transtiretina (TTR) es una proteína homotetramérica de 55 kDa presente en suero y en el líquido cefalorraquídeo. La función de la TTR es transportar L-tiroxina (T4) y proteína de unión a holo-retinol (RBP) . La TTR es una de las mayores de 20 proteínas amiloidogénicas no homólogas que pueden transformarse en fibrillas y otros agregados que conducen a una patología morbosa en seres humanos. Estas enfermedades no parecen ser causadas por una pérdida de función debida a la agregación de proteínas. En lugar de ello, la agregación parece producir una disfunción neuronal/celular por un mecanismo que aún no está claro.

En condiciones desnaturalizantes, la disociación del tetrámero de TTR de tipo natural limitante de la velocidad y el rápido plegamiento anómalo de los monómeros facilita el ensamblaje anómalo formando el material amiloide, que produce supuestamente la amiloidosis sistémica senil (SSA) . La disociación y plegamiento anómalo de una de las más de ochenta variantes de la TTR produce la polineuropatía amiloide familiar (FAP) y la cardiomiopatía amiloide familiar (FAC) .

El tetrámero de TTR tiene dos sitios de unión a T4 simétricos C2. Se sabe que la unión negativamente cooperativa de T4 estabiliza el tetrámero de TTR e inhibe la formación de fibrillas amiloides. Desafortunadamente, menos de 1% de TTR tiene T4 unida en el suero humano, porque la globulina de unión al tiroides (TBG) tiene una afinidad un orden de magnitud mayor por T4 en comparación con la TTR. Además, la concentración sérica de T4 es relativamente baja (0, 1 !M) en comparación con la de TTR (3, 6-7, 2 !M) .

La invención se basa, al menos en parte, en el descubrimiento de que la estabilización cinética del estado natural de la transtiretina inhibe el plegamiento anómalo de la proteína. El descubrimiento es importante debido al papel que juega el plegamiento anómalo de la proteína en una diversidad de procesos morbosos, incluyendo enfermedades amiloides por transtiretina. Al inhibir el plegamiento anómalo de la transtiretina se puede intervenir en dicha enfermedad, mejorar los síntomas y/o en algunos casos, impedir o curar la enfermedad.

El descubrimiento de que la estabilización cinética del estado natural de la transtiretina inhibe eficazmente el plegamiento anómalo y permite el desarrollo de composiciones terapéuticas con una especificidad potencialmente elevada y baja toxicidad. De esta manera, aunque en la presente memoria se describen reactivos de biarilo ilustrativos que tienen la capacidad de estabilizar la transtiretina, se pueden diseñar otros reactivos que estabilicen selectivamente la proteína. Por ejemplo, como se describe en la presente memoria, es posible diseñar y preparar bifenilos policlorados, análogos de diflunisal o benzoxazoles que son muy selectivos para unirse a la transtiretina y que estabilizan el estado natural de la transtiretina.

La memoria describe un método de cribar un compuesto que impida o reduzca la disociación de un tetrámero de transtiretina. El método puede incluir las siguientes etapas: poner en contacto un tetrámero de transtiretina con un compuesto candidato; y determinar si el compuesto candidato aumenta la energía de activación asociada con la disociación del tetrámero de transtiretina, con lo cual impide o reduce la disociación del tetrámero de transtiretina. El método puede incluir opcionalmente una etapa adicional de medir la capacidad del compuesto candidato para inhibir la formación de fibrillas.

La memoria describe un método que incluye una etapa para determinar si el compuesto impide la disociación del tetrámero de transtiretina desestabilizando el estado de transición de disociación del tetrámero de transtiretina. La memoria también describe un método que incluye la etapa de determinar si el compuesto impide la disociación del tetrámero de transtiretina por estabilización del tetrámero de transtiretina más que el estado de transición disociativo.

El compuesto candidato usado en dicho método puede ser opcionalmente una molécula pequeña. Dicha molécula pequeña puede estabilizar el estado natural de la transtiretina a través de la unión al tetrámero, ralentizando de esta manera la disociación y la amiloidosis en condiciones desnaturalizantes y fisiológicas a través de un mecanismo de estabilización cinética. El compuesto presenta opcionalmente una estequiometría de unión a TTR que excede de 0, 1 en sangre humana cuando se administra a una concentración de 10, 6 !M.

Una molécula pequeña puede tener opcionalmente un peso molecular menor de 1500 y unirse a la transtiretina cooperativamente de forma positiva o no y conferir una energía de unión > 2, 3 kcal/mol. La molécula pequeña puede presentar valores de Kd1 y Kd2 < 100 nM (por ejemplo < 10 nM) y/o una elevada concentración en plasma, contribuyendo ambas cosas a una estabilización de la proteína superior a 2, 0 kcal/mol. La molécula pequeña puede disminuir también el rendimiento de amiloidosis y disminuir la velocidad de amiloidogénesis mediada por ácidos o mediada por MeOH y/o disminuir la velocidad de disociación de TTR mediada por urea.

La molécula pequeña que incluye bifenil-aminas, bifenilos, éteres de oxima, benzoxazoles u otras estructuras compuestas de dos anillos aromáticos, donde uno lleva grupos hidrófilos, tales como un ácido o un fenol y el otro lleva grupos hidrófobos, tales como halógenos o alquilos.

El compuesto candidato puede ser un biarilo, en donde un anillo lleva un uno o más sustituyentes hidrófilos y el otro tiene sustituyentes hidrófobos o un biarilo, en donde los dos anillos llevan al menos un sustituyente hidrófilo. El grupo hidrófilo puede ser un fenol, un COOH, un alcohol bencílico, un ácido borónico o un éster, un tetrazol, un aldehído o un aldehído hidratado o un grupo funcional que sirve como donador o aceptor de enlaces de H para la proteína directamente o a través de un enlace de H mediado por agua. El biarilo puede ser un biarilo simétrico que tiene los dos anillos sustituidos con funcionalidad hidrófila incluyendo fenoles, carboxilatos y alcoholes, y en algunos casos halógenos para rellenar las cavidades de unión a halógeno de la TTR, por ejemplo, un biarilo con la siguiente funcionalidad: 3-Cl, 4-OH, 5-Cl y 3'-Cl, 4'-OH, 5'-Cl. En una realización, al menos un anillo del biarilo está sustituido con sustituyentes 2, 4-difluoro o 3, 5-difluoro o 2, 6-difluoro o 3, 5-dicloro o 3-Cl, 4-OH, 5-Cl o 3-F, 4-OH, 5-F, 3-COOH, 4-OH o 3-OH o 3-COOH o 4-COOH o 3-CH2OH o 4-CH2OH. Un biarilo ilustrativo es un bifenilo policlorado, por ejemplo, un bifenilo policlorado hidroxilado, en donde al menos un anillo lleva sustituyentes OH y/o Cl incluyendo 3-Cl, 4-OH, 5-Cl o 2-Cl, 3-Cl, 4-OH, 5-Cl o 3, 4-diCl o 2, 3, 4-tricloro o 2, 3, 4, 5-tetracloro. En el compuesto candidato pueden usarse halógenos distintos de cloro. El compuesto candidato de la presente invención puede ser un benzoxazol.

El compuesto candidato puede ser un análogo de diflunisal. En la presente memoria se describe la estructura del diflunisal, así como una diversidad de análogos de diflunisal. El análogo de diflunisal puede tener opcionalmente una actividad de NSAID (fármaco anti-inflamatorio no esteroide) reducida o ausente en comparación con el diflunisal. Por ejemplo, el análogo de diflunisal puede tener una actividad inhibidora de la ciclooxigenasa reducida o ausente en comparación con el diflunisal.

El método puede incluir una etapa adicional de determinar si el análogo de diflunisal presenta actividad de NSAID. Por ejemplo, el método puede incluir una etapa para determinar si el análogo de diflunisal presenta actividad inhibidora de la ciclooxigenasa.

La transtiretina usada en los métodos de cribado puede ser transtiretina de tipo natural o una transtiretina mutante, tal... [Seguir leyendo]

1. Diflunisal para uso en el tratamiento de una enfermedad amiloide por transtiretina, en donde el diflunisal se prepara para ser administrado en una cantidad de 250 mg dos veces al día.

2. Diflunisal para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad amiloide por transtiretina es polineuropatía amiloide familiar.

3. Diflunisal para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad amiloide por transtiretina es cardiomiopatía amiloide familiar.

4. Diflunisal para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad amiloide por transtiretina es amiloidosis sistémica senil.

5. Diflunisal para el uso de la reivindicación 1, en donde la enfermedad amiloide por transtiretina es amiloidosis car10 diaca posterior al trasplante de hígado.

6. Uso de diflunisal en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad amiloide por transtiretina, en donde el medicamento se prepara para administración de diflunisal en una cantidad de 250 mg dos veces al día.