AXMI-0140, UN GEN DE LA DELTA-ENDOTOXINA Y MÉTODOS PARA SU USO.

Una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:

a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1, en donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero; c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; y, d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:2, en donde dicho polipéptido tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2004/032658.

Solicitante: ATHENIX CORPORATION.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 108 T W ALEXANDER DRIVE PO BOX 110347NC NORTH CAROLINA RESEARCH TRIANGLE PARK, NC 27709 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: DUCK, NICHOLAS, B., KOZIEL, MICHAEL G., CARR, BRIAN, CAROZZI, NADINE, HARGISS,TRACY.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 5 de Octubre de 2004.

Clasificación PCT:

  • A01H5/00 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA.A01H NOVEDADES VEGETALES O PROCEDIMIENTOS PARA SU OBTENCION; REPRODUCCION DE PLANTAS POR TECNICAS DE CULTIVO DE TEJIDOS.Plantas con flores, es decir, angiospermas.
  • A01H5/10 A01H […] › A01H 5/00 Plantas con flores, es decir, angiospermas. › Granos.
  • C07K14/325 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Péptido cristalino de Bacillus thuringiensis (delta-endotoxina).
  • C12N15/82 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN (biocidas, productos que repelen o atraen a los animales nocivos, o reguladores del crecimiento de los vegetales, que contienen microorganismos virus, hongos microscópicos, enzimas, productos de fermentación o sustancias obtenidas por o extraídas de microorganismos o sustancias animales A01N 63/00; preparaciones de uso médico A61K; fertilizantes C05F ); PROPAGACION,CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › para células vegetales.

Clasificación antigua:

  • A01H5/00 A01H […] › Plantas con flores, es decir, angiospermas.
  • A01H5/10 A01H 5/00 […] › Granos.
  • C07K14/325 C07K 14/00 […] › Péptido cristalino de Bacillus thuringiensis (delta-endotoxina).
  • C12N15/82 C12N 15/00 […] › para células vegetales.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre.

PDF original: ES-2375058_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

AXMI-010, un gen de la delta-endotoxina y métodos para su uso. CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al campo de la biología molecular. Se proporcionan nuevos genes que codifican proteínas que tienen actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero. Estas proteínas y las secuencias de ácidos nucleicos que las codifican son útiles en la preparación de formulaciones plaguicidas y en la producción de plantas transgénicas resistentes a las plagas. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La Bacillus thuringiensis es una bacteria del suelo que forma esporas gram-positivas caracterizada por su capacidad para producir inclusiones cristalinas que son específicamente tóxicas para ciertos órdenes y especies de insectos, pero inocuas para plantas y otros organismo no considerados dianas. Por esta razón, las composiciones que incluyen cepas de Bacillus thuringiensis o sus proteínas insecticidas se pueden usar como insecticidas aceptables para el medio ambiente para controlar las plagas agrícolas de insectos o los insectos vectores para una variedad de enfermedades humanas o animales. Los cristales proteínicos también llamados proteínas cristal o proteínas Cry (delta-endotoxinas) de la Bacillus thuringiensis tienen potente actividad insecticida contra las larvas predominantemente de lepidópteros, dípteros y coleópteros. Estas proteínas han mostrado también actividad contra los órdenes de plagas de himenópteros, homópteros, ftirápteros, malófagos y ácaros, así como otros órdenes de invertebrados, tales como nematelmintos, platelmintos y sarcomastigóforos (Feitelson (1993) The Bacillus Thuringiensis Family Tree. In Advanced Engineered Pesticides. Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.). Estas proteínas se clasificaron originalmente como CryI a CryV, basándose principalmente en su actividad insecticida. Las clases principales fueron la específica de los lepidópteros (I), la específica de los lepidópteros y los dípteros (II), la específica de los coleópteros (III), la específica de los dípteros (IV) y la específica de los nemátodos (V) y (VI). Las proteínas se clasificaron además en subfamilias; a las proteínas más relacionadas con cada familia se le asignaron letras consecutivas tales como Cry1A, Cry1B, Cry1C, etc. Incluso las proteínas más estrechamente relacionadas dentro de cada grupo se les dieron nombres tales como Cry1C1, Cry1C2, etc. Recientemente se describió una nueva nomenclatura para los genes Cry basada en la homología de las secuencias de aminoácidos en lugar de en la especificidad para el insecto diana (Crickmore et al. (1998) Microbiol. Mol. Biol. Rev. 62:807-813). En la nueva clasificación, a cada toxina se le asigna un único nombre que incorpora una categoría principal (un número arábigo), una categoría secundaria (una letra mayúscula), una categoría terciaria (una letra minúscula) y una categoría cuaternaria (otro número arábigo). En la nueva clasificación, en la categoría principal los números romanos han sido sustituidos por números arábigos. La proteína cristal no presenta actividad insecticida hasta que ha sido ingerida y solubilizada en el intestino medio del insecto. La protoxina ingerida es hidrolizada por proteasas en el tracto digestivo del insecto a una molécula tóxica activa. (Höfte and Whiteley (1989) Microbiol. Rev. 53: 242-255). Esta toxina se une a receptores localizados en la microvellosidad apical en el intestino medio de las larvas diana y se inserta en la membrana apical creando canales o poros iónicos que producen la muerte de la larva. Debido a la devastación que los insectos pueden provocar es necesario descubrir nuevas formas de deltaendotoxinas de Bacillus thuringiensis. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Se proporcionan moléculas de ácidos nucleicos correspondientes a una secuencia de ácido nucleico de la deltaendotoxina. Adicionalmente, se incluyen las secuencias de aminoácidos correspondientes al polinucleótido. En particular, la presente invención proporciona una molécula aislada de ácido nucleico que comprende las secuencias de nucleótidos que codifican la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEQ ID NO:2, o la secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO:1, así como sus variantes y fragmentos que tienen una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de la SEQ ID NO:1 o 2 y que tienen o codifican un polipéptido con actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero. Por consiguiente, la presente invención proporciona una molécula de ácidos nucleicos seleccionada del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1, en donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que tienen una actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero; 2   c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; y d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2, en donde dicho polipéptido tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero. La invención también proporciona: - un vector que comprende una molécula de ácido nucleico de la invención; - una planta o célula hospedante que contiene dicho vector; y - una semilla que comprende una molécula de ácido nucleico de la invención. La invención proporciona además un polipéptido con actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, seleccionado del grupo que consiste en: a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; b) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; c) un polipéptido que es codificado por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; y d) un polipéptido que es codificado por una molécula de ácidos nucleicos que comprende a secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1. La invención proporciona además un método para matar o controlar una población de una plaga de lepidópteros que comprende poner en contacto dicha población con una cantidad eficaz como plaguicida de un polipéptido de la presente invención. Además, la presente invención proporciona un método para proteger una planta de una plaga, que comprende introducir en dicha planta o una de sus células al menos un vector de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero, en el que dicha secuencia de nucleótidos se selecciona del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos of SEQ ID NO:2; y d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2, en donde dicho polipéptido tiene una actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros. La presente invención también proporciona un método para producir un polipéptido con actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, que comprende cultivar la célula hospedante de la presente invención en condiciones en las que se expresa una molécula de ácidos nucleicos que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido de la invención. La presente invención proporciona además una planta o una célula vegetal que tiene incorporado establemente en su genoma una construcción de DNA que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que tiene actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, en donde dicha secuencia de nucleótidos se selecciona del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende a secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1, en donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que tiene una actividad plaguicida contra... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Una molécula de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1, en donde dicha secuencia de nucleótidos codifica un polipéptido que tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero; c) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; y, d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:2, en donde dicho polipéptido tiene actividad plaguicida contra un insecto lepidóptero. 2. La molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1, en donde dicha secuencia de nucleótidos está unida operativamente a un promotor capaz de dirigir la expresión de la secuencia de nucleótidos en un célula vegetal. 3. Un vector que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 o 2. 4. El vector de la reivindicación 3, que comprende además una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido heterólogo. 5. Una planta o célula bacteriana hospedante que contiene el vector de la reivindicación 3. 6. Una semilla que comprende la molécula de ácido nucleico de la reivindicación 1 o 2. 7. Un polipéptido con actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, seleccionada del grupo que consiste en: a) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; b) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; c) un polipéptido que está codificado por la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; y, d) un polipéptido que está codificado por una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1. 8. El polipéptido de la reivindicación 7, que comprende además secuencias heterólogas de aminoácidos. 9. Un método para matar o controlar una población de una plaga de lepidópteros, que comprende poner en contacto dicha población con una cantidad eficaz como plaguicida de un polipéptido de la reivindicación 7 u 8. 10. Un método para producir un polipéptido con actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, que comprende cultivar la célula hospedante de la reivindicación 5 en condiciones en las cuales se expresa una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el polipéptido. 11. Una planta o una célula vegetal que tiene incorporado establemente en su genoma una construcción de DNA que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína que tiene actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros, en donde dicha secuencia de nucleótidos se selecciona del grupo que consiste en: a) la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; c) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; y, d) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:2; en donde dicha secuencia de nucleótidos está unida operativamente a un promotor que dirige la expresión de una secuencia codificadora en una célula vegetal. 12. La planta o célula vegetal transgénica de la reivindicación 11, en donde dicha planta o célula vegetal se 28   selecciona del grupo que consiste en maíz, sorgo, trigo, col, girasol, tomate, crucíferas, pimientas, patata, algodón, arroz, soja, remolacha azucarera, caña de azúcar, tabaco, cebada y colza. 13. Un método para proteger una planta de una plaga, que comprende introducir en dicha planta o en sus células al menos un vector de expresión que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido plaguicida, en donde dicha secuencia de nucleótidos se selecciona del grupo que consiste en: a) una molécula de ácido nucleico que comprende la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; b) una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:1; y c) una molécula de ácido nucleico que comprende un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:2; y d) una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencias de al menos el 80% en la totalidad de la secuencia de nucleótidos de la SEQ ID NO:2, en donde dicho polipéptido tiene actividad plaguicida contra una plaga de lepidópteros. 29  

 

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