n anticuerpo humano aislado que se une específicamente al receptor de tipo 1 de la interleucina 1 o a un fragmento de unión a antígeno del mismo,

que comprende:

a. gines estructurales de cadena pesada humana, una región CDR1 de la cadena pesada, en la que la CDR1comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 63; una región CDR2 de la cadena pesada, en la quela región CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 66; una región CDR3 de la cadenapesada, en la que la región CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 69; y

b. ines estructurales de cadena ligera humana, una región CDR1 de la cadena ligera, en la que la región CDR1comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 71; una región CDR2 de la cadena ligera, en la que laregión CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 73; una región CDR3 de la cadena ligera,en la que la región CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 75.

Anticuerpo monoclonal anti-IL-1R1 humano terapéutico Esta solicitud está relacionada y reclama prioridad sobre el número de serie de solicitud provisional de EE.UU. 60/408.719 presentada el 6 de septiembre de 2002.

Campo de la invención

La invención se refiere a anticuerpos que se unen a la proteína receptor de interleucina 1 de tipo También se proporcionan composiciones, particularmente composiciones farmacéuticas y procedimientos para trata enfermedades mediadas por la IL-1, tales como artritis reumatoide, osteoartritis y otras afecciones inflamatorias.

Antecedentes de la invención

Desarrollo de anticuerpos La inflamación es la respuesta del cuerpo a lesiones causadas por daños mecánicos, infección o estimulación antigénica. Las reacciones inflamatorias a menudo se expresan de forma patológica. Dichas afecciones se producen cuando la inflamación se expresa de una manera exagerada, induce por un estímulo inapropiado o persiste después de la eliminación del agente lesivo.

La respuesta inflamatoria está mediada, entre otras, por las citocinas. Una de las citocinas inflamatorias más potentes descubierta es la interleucina 1 (IL-1) . Un incremento de la señalización de la IL-1 produce inflamación persistente asociada con varias enfermedades y se piensa que la IL-1 es un mediador clave en muchas enfermedades y afecciones médicas. Esta citocina se fabrica principalmente (aunque no exclusivamente) en células del linaje de macrófagos/monocitos y se puede producir de dos formas: IL-1 alfa (IL-1 a) e IL-1 beta (IL-1 p) .

La IL-1 estimula las respuestas celulares interaccionando con un complejo de receptor heterodimérico compuesto por dos proteínas transmembrana, el receptor de IL-1 de tipo 1 (IL-1 R1) y la proteína accesoria del receptor de IL-1 (IL-1 RAcP) . La IL-1 se une primero al IL-1R1; después se recluta la RAcP de IL-1 para este complejo Greenfeder et al., 1995, J. Biol. Chem. 270:13757-13765; Yoon y Dinarello, 1998, J. Immunology 160:3170-3179; Cullinan et al., 1998, J. Immunology 161:5614-5620) , seguido de transducción de señal que tiene como resultado la inducción de una respuesta celular.

Los estudios de unión basados en células sugieren que la RAcP de IL-1 estabiliza el complejo de señalización del IL1R ralentizando la constante de disociación del ligando (Wesche et al., 1998, FEBS Letters 429:303-306) . Mientras que la interacción de la IL-1 con el IL-1R se ha caracterizado exhaustivamente, la interacción de RAcP de IL-1 con el receptor unido al ligando sigue sin estar bien definida. Dado que la RAcP de IL-1 no tiene una afinidad significativa por la IL-1 o el IL-1R1 por separado pero una elevada afinidad por el complejo, se deduce que el suceso de unión IL-1/IL-1R crea nuevos sitios de unión para RAcP de IL-1 que pueden incluso incluir contribuciones por residuos de IL-1 (Ettorre et al., 1997, Eur. Cytokine Netw. 8:161-171) . Otra molécula, el antagonista del receptor de IL-1 (IL-1ra) compite con IL-1a e IL-1 por la unión al receptor, pero no recluta la RAcP de IL-1, lo que tiene como resultado un receptor ocupado pero que no señaliza. La actividad de la IL-1 puede además contrarrestarse mediante el IL-1R de 45 tipo II, un receptor señuelo que se une al ligando pero que no participa en la señalización debido a que tiene un dominio intracelular truncado. El IL-1 ra y el IL-1 R de tipo II actúan reduciendo la gravedad y la duración de los acontecimientos inflamatorios mediados por la IL-1 (Wesche et al., 1998, FEBS Letters 429:303-306; Dripps et al., 1991, J. Biol. Chem. 266:10331 -10336; Dripps et al., 1991, J. Biol. Chem. 266:20331 -20335) .

Los inhibidores de la interleucina 1 se pueden producir a partir de cualquier proteína capaz de prevenir específicamente la activación de los receptores celulares de la IL-1, que puede ser el resultado de una serie de mecanismos, Dichos mecanismos incluyen la regulación por disminución de la producción de IL-1, la unión de IL-1 libre, la interferencia con la unión de la IL-1 al IL-1R, la interferencia con la formación del complejo IL-1 R-IL-1 RAcP

o la interferencia con la modulación de la señalización de la IL-1 tras la unión a su receptor. Las clases de 55 inhibidores de IL-1 incluyen:

• Antagonistas del receptor de la interleucina 1, tales como IL-1ra, como se describe más adelante;

• Anticuerpos monoclonales anti-IL-1R (p. ej., como se divulga en la solicitud de patente europea publicada nº EP 623674, cuya divulgación se incorpora en el presente documento por referencia) ;

• Proteínas de unión a IL-1, tales como receptores solubles de IL-1 (p. ej., como se divulga en las patentes de EE.UU. nº 5, 492, 888; 5, 488, 032; 5, 464, 937; 5, 319, 071; y 5, 180, 812

65 • Anticuerpos monoclonales anti-IL-1 (p. ej., como se divulga en las publicaciones de solicitudes de patentes internacionales nº WO 9501997, WO 9402627, WO 9006371, U.S. Pat. No. 4, 935, 343, EP 364778, EP 267611 y EP 220063, • Proteínas accesorias al receptor de la IL-1 y anticuerpos de las mismas (p. ej., como se divulga en las 5 publicaciones de solicitudes de patente internacional nº WO 96/23067 y WO 99/37773; y • Inhibidores de la enzima convertidora de la interleucina-1β (ICE) o la caspasa (p. ej., como se divulga en las publicaciones de solicitudes de patente internacional nº WO 99/46248, WO 99/47545, y WO 99/47154, que se pueden usar para inhibir la producción y secreción de IL-1β;

• inhibidores de la interleucina-1β proteasa; y • otros compuestos y proteínas que bloquean la síntesis in vivo o la liberación extracelular de IL-1.

Ejemplos de inhibidores de la IL-1 se divulgan en las referencias siguientes: Las patentes de EE.UU. Nº 5, 747, 444; 5, 359, 032; 5, 608, 035; 5, 843, 905; 5, 359, 032; 5, 866, 576; 5, 869, 660; 5, 869, 315; 5, 872, 095; 5, 955, 480; y 5, 965, 564; las publicaciones de solicitud de patente internacional Nº W098/21957, W096/09323, W091/17184, W096/40907, W098/32733, W098/42325, W098/44940, W098/47892, W098/56377, W099/03837, W099/06426, W099/06042, W091/17249, W098/32733, W098/17661, W097/08174, W095/34326, W099/36426, y W099/36415; las publicaciones de solicitud de patente europea Nº EP534978 y EP89479; y la solicitud de patente francesa nº FR 2762514. "Sims J.

E. et al. divulga anticuerpos conocidos contra los receptores de tipo I y de tipo II de la interleucina 1 (IL-1) y concluye que el receptor de tipo I (IL-1R1) es responsable de mediar en la transducción de señal tras la unión a la IL-1”.

El antagonista del receptor de la interleucina 1 (IL-1ra) es una proteína humana que actúa como inhibidor natural de la interleucina 1 y es un miembro de la familia de la IL-1, que incluye IL-1 α e IL-1 β. Antagonistas preferidos del receptor (incluidos IL-1 ra y variantes y derivados de los mismos) , así como procedimientos de fabricarlos y usarlos, se describen en la patente de EE.UU. nº 5, 075, 222; las publicaciones de solicitud de patente internacional Nº WO 91/08285; WO 91/17184; W092/16221; W093/21946; WO 94/06457; WO 94/21275; WO 94/21235; DE 4219626, WO 94/20517; WO 96/22793;WO 97/28828; y WO 99/36541, la solicitud de patente australiana nº AU9173636; y la solicitud de patente francesa nº FR2706772; Las proteínas incluyen formas glicosiladas así como no glicosiladas de los antagonistas de receptor de la IL-1.

Específicamente se divulgan tres formas útiles del IL-1 ra y variantes del mismo y se describen en la patente de EE.UU. nº 5, 075, 222 ("la 'patente 222") . El IL-1 raα se ha caracterizado mediante SDS-PAGE como una molécula de 35 22-23 kD que tiene un punto isoeléctrico aproximado de 4, 8, que eluye en una columna Mono Q FPLC en NaCl aproximadamente 52 mM en tampón Tris, pH 7, 6. El IL-1 raβ se ha caracterizado como una proteína de 22-23 kD que eluye en una columna Mono Q en NaCl 48 mM. Tanto el IL-1 raα como el IL-1 raβ están glicosilados. El IL-1 ra se ha caracterizado como una proteína de 20 kD que eluye en una columna Mono Q en NaCl 48 mM y no está glicosilado. La patente ‘222 también divulga procedimientos para aislar los genes responsables de la codificación de inhibidores, la clonación del gen en vectores adecuados y tipos celulares y la expresión del gen para producir los inhibidores. Aunque eficaz, el IL-1ra tiene una semivida relativamente corta. En el uso actual, el IL-1 ra se administra una vez al día. Por tanto, la técnica se beneficiaría de un antagonista del receptor de IL-2 con una semivida apreciablemente más larga.

45 La prevención de la señalización... [Seguir leyendo]

1. n anticuerpo humano aislado que se une específicamente al receptor de tipo 1 de la interleucina 1 o a un fragmento de unión a antígeno del mismo, que comprende:

a. gines estructurales de cadena pesada humana, una región CDR1 de la cadena pesada, en la que la CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 63; una región CDR2 de la cadena pesada, en la que la región CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 66; una región CDR3 de la cadena pesada, en la que la región CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 69; y

b. ines estructurales de cadena ligera humana, una región CDR1 de la cadena ligera, en la que la región CDR1 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 71; una región CDR2 de la cadena ligera, en la que la región CDR2 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 73; una región CDR3 de la cadena ligera, en la que la región CDR3 comprende la secuencia de aminoácidos de SEC ID Nº 75.

2. l anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de la reivindicación 1, en el que el anticuerpo comprende una cadena pesada que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 16, y una cadena ligera que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 18.

3. l anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 2, en el que la región variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en la SEC ID Nº 16 y en la que la región variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 18.

4. l anticuerpo, o fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 2, que comprende:

a. na cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 40; y

b. na cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 32, la SEC ID Nº 34 o la SEC ID Nº 36, en la que el fragmento de unión a antígeno tiene una deleción aminoterminal o una deleción carboxilo-teminal, y/o una deleción o sustitución interna.

5. l anticuerpo de la reivindicación 4, en el que el fragmento de unión a antígeno de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 32, y el fragmento de unión a antígeno de la cadenaligera comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 40.

6. l anticuerpo de la reivindicación 5, en el que la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en la SEC ID Nº 32 y en la que la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 40.

7. l anticuerpo de la reivindicación 4, en el que el fragmento de unión a antígeno de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 34, y el fragmento de unión a antígeno de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 40.

8. l anticuerpo de la reivindicación 7, en el que la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en la SEC ID Nº 34 y en la que la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 40.

9. l anticuerpo de la reivindicación 4, en el que el fragmento de unión a antígeno de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 36, y el fragmento de unión a antígeno de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad de secuencia de al menos 90 % con la secuencia de aminoácidos que se expone en la SEC ID Nº 40.

10. l anticuerpo de la reivindicación 9, en el que la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se expone en la SEC ID Nº 36 y en la que la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos tal como se expone en la SEC ID Nº 40.

11. l anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cadena pesada comprende una región variable que comprende la secuencia de aminoácidos EVQLMQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFS FHWIAWVRQM PGKGLEW-MGI IHPGASDTRY SPSFQGQVTI SADNSNSATY LQWSSLKASD TAMYFCARQR ELDYFDYWGQ GTLVTVSS.

12. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la cadena ligera comprende una región variable que comprende la secuencia de aminoácidos EIVLTQSPDF QSVTPKEKVTITCRASQSIG SSLHWYQQKP DQSPKLLIKY ASQSFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTINSLEA EDAAAYYCHQ SSSLPLTFGG GTKVEIK.

13. El anticuerpo o el fragmento de unión a antígeno del mismo, de acuerdo con la reivindicación 1, en el que la región variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos EVQLMQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFS FHWIAWVRQM PGKGLEWMGI IHPGASDTRY SPSFQGQVTI SADNSNSATY LQWSSLKASD TAMYFCARQR ELDYFDYWGQ GTLVTVSS, en el que la región variable de la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos EIVLTQSPDF QSVTPKEKVT ITCRASQSIG SSLHWYQQKP DQSPKLLIKY ASQSFSGVPS RFSGSGSGTD FTLTINSLEA EDAAAYYCHQ SSSLPLTFGG GTKVEIK.

14. Una molécula de ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica la región variable de la cadena pesada y la cadena ligera de los anticuerpos de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13.

15. Un vector de expresión que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 14.

16. La célula huésped que contiene el vector de expresión de la reivindicación 15.

17. El anticuerpo de las reivindicaciones 1 a 13, en el que las regiones variables de la cadena pesada y la cadena ligera están conectadas por un ligador flexible para formar un anticuerpo de una cadena.

18. El anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 17, que es un anticuerpo Fv de una cadena.

19. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que es un anticuerpo Fab.

20. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que es un anticuerpo Fab’.

21. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, que es un anticuerpo (Fab') 2.

22. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, en el que el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano.

23. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 y 17 a 21, que es un anticuerpo lgG2.

24. El anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2, 3, 4, 6, 8, 10, que se une específicamente al polipéptido de la SEC ID 76.

25. El anticuerpo de la reivindicación 24, que se une específicamente a la secuencia de aminoácidos YSV.

26. Uso de un anticuerpo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25 para la preparación de una composición farmacéutica para tratar una enfermedad mediada por la IL-1 en un paciente, en el que la enfermedad mediada por la IL-1 se selecciona de enfermedades pulmonares, enfermedad pulmonar obstructiva crónica o EPOC, proteinosis alveolar pulmonar, neuropatía inducida por bleomicina, fibrosis pulmonar, fibrosis pulmonar idiopática, fibrosis pulmonar inducida por radiación, fibrosis quística, acumulación de colágeno en los pulmones, síndrome de dificultad respiratoria aguda o SDRA, displasia broncopulmonar o DBP, enfermedades pulmonar obstructivas crónicas seleccionadas de enfisema, bronquitis crónica, enfermedad pulmonar fibrótica crónica, asbestosis, neumoconiosis del trabajador del carbón, silicosis, neunomía organizadora por bronquiliterans, sarcoidosis pulmonar, rinitis alérgica, dermatitis de contacto, dermatitis atópica, diabetes, enfermedad intestinal inflamatoria, artritis reumatoide y asma.

27. Una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz del anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 25.