Una composición que comprende una combinación de dos o más conjugados monovalentes,

en la que cada uno de dicho dos o más conjugados monovalentes comprende (i) proteína portadora N19 conjugada con (ii) un antígeno de sacárido del serogrupo A, C, W-135 o Y de N. meningitidis

CAMPO TÉCNICO

La presente invención está en el campo de las vacunas y se refiere a nuevas composiciones que comprenden dos o más antígenos de sacárido conjugados con una proteína portadora de poliepítopes que comprende epítopes de linfocitos T de múltiples proteínas patogénicas. La invención también se refiere a procedimientos para preparar dichas composiciones y a usos para dichas composiciones.

TÉCNICA ANTERIOR

En la técnica se conocen vacunas polivalentes. Un ejemplo tal es una vacuna tetravalente de polisacáridos capsulares de los serogrupos A, C, Y y W135 de N. meningitidis que se conoce desde hace muchos años [1, 2] y se ha autorizado para uso humano. Sin embargo, aunque son eficaces en adolescentes y adultos, induce una pobre respuesta inmunitaria y corta duración de la protección y no pueden usarse en bebés [por ejemplo, 3]. Esto es debido a que los polisacáridos son antígenos independientes de linfocitos T que generalmente inducen una débil respuesta inmunitaria que no puede reforzarse. Frecuentemente han surgido con respecto al uso generalizado de vacunas polivalentes debido a que están sometidas a una significativa disminución en la inmunofunción conocida como inmunosupresión. La inmunosupresión puede producirse cuando la cantidad de antígeno introducida en el sujeto supere la capacidad del sistema inmunitario para responder. Una condición tal se llama sobrecarga de antígeno. La inmunosupresión también puede producirse como resultado de un componente de antígeno que previene al sistema inmunitario de responder a otro componente de antígeno de una vacuna polivalente. Esta última forma de inmunosupresión se llama interferencia de vacunas.

En los últimos 20 años se han desarrollados vacunas conjugadas que comprenden polisacáridos capsulares bacterianos conjugados con portadores de proteína. Ejemplos incluyen la vacuna conjugada de Haemophilus influenzae tipo b (Hib) [4], además de vacunas conjugadas contra Streptococcus pneumoniae [5] y el serogrupo C de Neisseria meningitidis (MenC) [6].

Las proteínas portadoras usadas en vacunas autorizadas incluyen toxoide tetánico (TT), toxoide diftérico (DT), el mutante CRM197 no tóxico de la toxina de la difteria y el complejo de la proteína de membrana externa de N. meningitidis grupo B. Como están introduciéndose más vacunas conjugadas en la práctica médica, los bebés podrían recibir múltiples inyecciones de la proteína portadora tanto como una propia vacuna (por ejemplo, TT o DT) o como una proteína portadora presente en una vacuna conjugada. Como estas proteínas son altamente inmunogénicas tanto al nivel de linfocitos B como T, la sobrecarga de portador puede inducir inmunosupresión en individuos sensibilizados [7]. Se cree que este fenómeno, llamado la supresión epitópica inducida por portador, es debido a anticuerpos específicos para portador y a competición antigénica intramolecular [8]. Idealmente, una proteína portadora deberá inducir un fuerte efecto auxiliar para un epítope de linfocitos B conjugado (por ejemplo, polisacárido) sin inducir una respuesta de anticuerpos contra sigo mismo. El uso de epítopes universales que son inmunogénicos en el contexto de la mayoría de las moléculas de clase II del complejo mayor de histocompatibilidad es un enfoque hacia este objetivo [9]. Tales epítopes se han identificado dentro de TT y otras proteínas. Sin embargo, sigue existiendo la necesidad de otras mejoras.

Por tanto, es objeto de la invención proporcionar conjugados de sacáridos mejorados.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Se ha descubierto que proteínas portadoras de poliepítopes son particularmente útiles como portadores para combinaciones de sacáridos. Además, se ha descubierto que sólo se observa una baja respuesta inmunogénica contra estas proteínas portadoras aún cuando comprenden varios epítopes patogénicos conocidos, mientras que se habría esperado que la respuesta inmunogénica aumentara proporcionalmente al número de epítopes patogénicos.

Por tanto, en algunas realizaciones, la invención proporciona una composición que comprende una combinación de dos o más conjugados monovalentes (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6 o más. Véase la Figura 1A). Cada conjugado monovalente comprende (i) proteína portadora N19 conjugada con (ii) un antígeno de sacárido del serogrupo A, C, W, o Y de N. meningitidis. Preferentemente, la proteína portadora usada en cada conjugado es la misma.

Aunque cada molécula de proteína portadora en cada conjugado monovalente puede conjugarse con más de una molécula de antígeno de sacárido (por ejemplo, 1, 5, 10, 20 o más), debido a los múltiples sitios de unión en cada molécula de proteína portadora (Figura 1B), cada antígeno de sacárido conjugado con cualquier proteína portadora dada es preferentemente del mismo patógeno antigénicamente distinto. Por ejemplo, los antígenos de sacárido de MenA son diferentes de los de MenC, MenW y MenY y, por tanto, se dice que son de patógenos antigénicamente distintos, mientras que los antígenos de sacárido de Hib son todos del mismo patógeno antigénicamente distinto. En un único conjugado, los sacáridos individuales, aunque del mismo patógeno antigénicamente distinto, pueden ser de longitudes de cadena diferentes.

Como alternativa, en algunas realizaciones la invención proporciona un conjugado multivalente que comprende dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6 o más) antígenos de sacárido antigénicamente distintos de los serogrupos A, C, W o Y de N. meningitidis conjugados con la proteína portadora N19 (Figura 1C). En este caso, los antígenos de sacárido son de patógenos antigénicamente distintos diferentes. Por tanto, por ejemplo, en una composición de conjugado tal, cada molécula de proteína portadora N19 puede tener antígenos de sacárido de dos o más de MenA, MenC, MenW, MenY conjugados con ella. La invención también proporciona una composición que comprende dos o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6 o más) de estos conjugados multivalentes.

Como otra alternativa, la invención proporciona una composición que comprende uno o más (por 10 ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más) conjugados monovalentes y uno o más (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6 o más) conjugados multivalentes como se han descrito anteriormente.

Proteína portadora

La proteína portadora es N19 (SEC ID NO: 11). Se ha mostrado que una proteína genéticamente manipulada llamada N19 [10], expresada en Escherichia coli y que tiene varios epítopes universales de 15 linfocitos T CD4+ humanos, se comporta como un portador fuerte cuando se conjuga con el polisacárido Hib [11], documento WO 99/55730A y Falusi, F. y col. (2001) Eur J. Immunol, 31(12) 3816-3824, y menc (Baraldo,

K. y col. (2004) infect immun, 72(8) 4884-4887). La región del extremo N de N19 está constituida por (i) una cola de seis His que puede explotarse durante la purificación, (ii) una secuencia Met-Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp de péptido flag (SEC ID NO: 12) reconocida por un anticuerpo policlonal de conejo que puede usarse para el cribado de colonias positivas durante el procedimiento de clonación, (iii) el sitio de reconocimiento del factor Xa Ile-Glu-Gly-Arg (SEC ID NO: 13) para la fácil eliminación de la marca. N19 es una duplicación de los nueve primeros epítopes enumerados en la Tabla 1 más el epítope de CD4+ de la matriz de la gripe MT. Los epítopes están separados por un espaciador Lys-Gly para proporcionar flexibilidad a la molécula y para permitir la posterior conjugación del polisacárido con los grupos -amino primarios de residuos de Lys.

25 Además de los epítopes de CD4+, las proteínas portadoras pueden comprender otros péptidos o fragmentos de proteína tales como epítopes de citocinas inmunomoduladoras tales como interleucina 2 (IL-2)

o factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF).

Tabla 1

1. Una composición que comprende una combinación de dos o más conjugados monovalentes, en la que cada uno de dicho dos o más conjugados monovalentes comprende (i) proteína portadora N19 conjugada con (ii) un antígeno de sacárido del serogrupo A, C, W-135 o Y de N. meningitidis.

2. Un conjugado W-135 multivalente que comprende dos o más antígenos de sacárido antigénicamente distintos de los serogrupos A, C, W-135 o Y de N. meningitidis en el que dichos antígenos de sacárido están conjugados con la proteína portadora N19.

3. Una composición que comprende dos o más de los conjugados multivalentes según la reivindicación 2.

4. Una composición que comprende uno o más conjugados multivalentes según la reivindicación 2 y uno o más conjugados monovalentes como se definen en la reivindicación 1.

5. Una composición según las reivindicaciones 1 ó 4, en la que una molécula de dicha proteína portadora en dicho conjugado monovalente está conjugada con más de una molécula de dicho antígeno de sacárido.

6. Una composición según las reivindicaciones 1 ó 4, en la que cada molécula de proteína portadora en cada conjugado monovalente está conjugada con más de una molécula de antígeno de sacárido.

7. Una composición que comprende un primer conjugado y un segundo conjugado, en la que dicho primer conjugado comprende un antígeno de sacárido del serogrupo A, C, W-135 o Y de N. meningitidis conjugado con la proteína portadora N19; y dicho segundo conjugado comprende un antígeno de sacárido de los serogrupos A, C, W-135 o Y de N. meningitidis conjugado con una proteína portadora diferente de N19.

8. Un conjugado o composición según cualquier reivindicación previa que comprende además un adyuvante.

9. Un conjugado o composición según cualquier reivindicación previa para uso en terapia.

10. Un conjugado o composición según cualquier reivindicación previa para uso en provocar una respuesta inmunitaria.

11. Uso de un conjugado o composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8 en la preparación de un medicamento para fomentar una respuesta inmunitaria en un paciente.