USO DE PEPTIDOS DE LA PROTEINA E2 DEL VIRUS DE LA HEPATITIS G PARA INHIBIR LA ACTIVIDAD DEL VIRUS VIH.

Uso de péptidos de la proteína E2 del virus de la hepatitis G para inhibir la actividad del virus VIH. La presente invención se refiere al uso de al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en la secuencia de la proteína E2 del virus de la hepatitis G (GBV-C/HGV), capaz de inhibir la actividad del virus VIH, impidiendo o reprimiendo la función y/o actividad del virus VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), de forma transitoria o permanente, o además capaz de interaccionar con una secuencia aminoacídica de la glicoproteína gp41 del virus VIH, para la elaboración de una composición farmacéutica. Dicho péptido es capaz de impedir la inhibición de la función del fragmento de la proteína gp41 del virus VIH, impedir la fusión celular o impedir la replicación del VIH en una célula huésped. Asimismo la presente invención también se refiere a dicha composición farmacéutica y al método para su fabricación. Estado de la técnica anterior Cuando a mediados de los años 90 se descubrió un supuesto nuevo virus de la hepatitis, el GB virus C (GBV-C), también denominado virus de la hepatitis G (HGV) (Simons et al., 1997. Nature Medicine 1: 564-569; Linnen et al., 1996 Science 271, 505-508), muchos grupos de investigación trataron de correlacionarlo con la inflamación hepática u otras enfermedades asociadas. Sin embargo, no se pudo identificar ninguna influencia en la salud (Mphahlele et al., 1998. Liver 18: 143-155; Theodore et al., 1997. Hepatology 25: 1285-1286), hasta que el Prof. Tillmann descubrió el inesperado beneficio de la coinfección por GBV-C/HGV en el curso de la enfermedad de los pacientes que habían sido infectados por VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana 1) (Heringlake el al, 1998. J. Infect. Dis. 177: 1723- 1726). Aunque en algunas ocasiones los resultados no han sido claramente significativos (Zhang et al., 2006. HIV Med. 7: 173-180), se ha observado una menor progresión de la enfermedad y un incremento en la supervivencia en individuos GBV-C/HGV positivos comparados con individuos GBV-C/HGV negativos, mientras que la pérdida de la viremia GBV-C/HGV está estrechamente relacionada con una mortalidad incrementada así como con una mayor progresión del SIDA (Van der Bij et al., 2005. J. Infect. Dis. 191: 678-685; Williams et al., 2004. N. Engl. J. Med. 350: 981-990). El empleo de péptidos sintéticos como inhibidores del VIH-1 ha sido objeto de investigación durante los últimos años. Se han estudiado y lo están siendo en la actualidad, para su aplicación clínica en la lucha contra la infección por el VIH-1 un gran número de péptidos que tienen como diana las distintas etapas del ciclo vital del VIH-1. Los péptidos inhibidores del VIH-1 han sido identificados y/o desarrollados mediante distintos métodos. Algunos péptidos terapéuticos como el Enfuvirtide, ya aprobado para su uso clínico (Burton, 2003. Lancet Infec. Dis. 3, 260), derivan del VIH-1, mientras que otros son péptidos naturales como las quimiocinas, defensinas o el Virus Inhibitory Peptide (VIRIP) (Munch et al., 2007, Cell 129: 263-275) o han sido diseñados y sintetizados a partir de datos cristalográficos de las proteínas del VIH-1 o a partir de librerías peptídicas (Boggiano et al., 2006. Biochem. Biophys. Res. Comun. 347: 909-915). El ciclo replicativo del VIH ha sido descrito con detalle en numerosas revisiones (Greene y Peterling, 2002. Nat. Med. 8: 673-680; Freed y Mouland, 2006. Retrovirology 3: 77). Se ha descrito la entrada del virus a la célula huésped como un proceso que requiere tres etapas: 1) aproximación y unión del VIH a las moléculas de CD4 (receptor primario) a través de la glicoproteína viral gp120; 2) cambio conformacional en gp120, lo que permite la unión al coreceptor de quimiocinas (CCR5 o CXCR4) y 3) fusión de la envuelta del VIH con la membrana de la célula mediante un cambio conformacional en la glicoproteína de membrana gp41,el cual tiene lugar únicamente tras la unión productiva de gp120 a CD4. Cada una de estas etapas representa una diana potencial en la inhibición de la replicación viral. Así pues, sería útil el uso de inhibidores de fusión o entrada viral y/o replicación del virus, para impedir la acción del virus VIH en células huésped, siendo esta fase de fusión y/o entrada un punto adecuado para la actuación de los inhibidores, ya que el virus todavía no ha introducido su material genético en el interior celular. Explicación de la invención La presente invención se refiere al uso de al menos un péptido contenido en la secuencia de la proteína E2 del virus GBV-C/HGV, capaz de inhibir la actividad del virus VIH, impidiendo o reprimiendo la función y/o actividad del virus VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), de forma transitoria o permanente, o además capaz de interaccionar con una secuencia amininoacídica de la glicoproteína gp41 del virus VIH (Virus de Inmunodeficiencia Humana), para la elaboración de una composición farmacéutica. Dicho péptido es capaz de inhibir la función del fragmento de la proteína gp41 del virus VIH, impedir la fusión celular o impedir la replicación del VIH en una célula huésped. En los ejemplos de la presente invención se sintetizan 124 péptidos compuestos por 18 aminoácidos que abarcan la secuencia completa de la proteína E2 del virus GBV-C/HGV (SEQ ID NO: 1). Dichas secuencias se solapan en 15 aminoácidos, es decir, un péptido concreto tiene tres aminoácidos diferentes respecto al péptido que le precede o que le sigue. 2 ES 2 351 026 A1 A continuación se determina la interacción de cualquiera de los péptidos de la secuencia SEQ ID NO: 1 del virus GBV-C/HGV con una secuencia aminoacídica (SEQ ID NO: 2) de la glicoproteína de membrana gp41 del virus VIH-1 (Virus de Inmunodeficiencia Humana 1) mediante el empleo de técnicas biofísicas que permiten determinar la inhibición de liberación de contenidos vesiculares inducida por SEQ ID NO: 2 que permiten determinar la capacidad de inhibir la función del fragmento de la proteína gp41 del virus VIH-1, y evaluando el potencial carácter inhibitorio del VIH-1 mediante ensayos celulares dirigidos a determinar la inhibición de la fusión celular o la inhibición de la replicación del virus. Las principales ventajas que aportan los péptidos sintéticos de la presente invención son: - Su baja toxicidad sistémica, - La posibilidad de realizar modificaciones estructurales en ellos y consecuentemente la capacidad que presentan para mimetizar determinados sustratos o epítopos, - Su aplicabilidad en terapias combinadas o cuando aparecen resistencias a otros fármacos antirretrovirales, o - Que pueden actuar antes de que se produzca la entrada del virus en la célula. En este sentido, cualquiera de los péptidos de la presente invención podría tener el mismo potencial que la inducción de inmunidad que aporta una vacuna. Así pues, un aspecto de la presente invención es el uso de al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1, capaz de inhibir la actividad del virus VIH, para la elaboración de una composición farmacéutica. Es decir, la composición farmacéutica de la presente invención se usa para el tratamiento o prevención del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) causado por cualquier tipo de VIH, bien sea del tipo VIH-1, del tipo VIH-2 o cualquier otro tipo de VIH. Las secuencias aminoacídicas que tienen al menos un 60% de identidad con SEQ ID NO: 1 son secuencias homologas de diferentes genotipos del virus GBV-C/HGV. Este porcentaje de identidad no se ha escogido de forma arbitraria sino tras obtener la identidad de los genotipos conocidos de la base de datos de GeneBank y compararlas por medio de un análisis Blast de la secuencia SEQ ID NO: 1. En este análisis comparativo se ha encontrado una secuencia correspondiente a un fragmento de una poliproteína de la variante Troglodites del virus GBV-C/HGV. La secuencia completa (de 2942 aminoácidos) se puede consultar en el número de acceso AAD31543 del GeneBank. En este análisis comparativo se ha podido determinar una identidad de un 66% del fragmento del virus GBV-C/HGV Troglodites respecto de SEQ ID NO: 1. El término derivado del mismo, tal como se entiende en la presente invención se refiere al péptido resultante de variaciones en la composición aminoacídica de su secuencia de forma que se obtenga un péptido que tenga su origen en la secuencia original sin perder la característica funcional que le caracteriza en la presente invención. A modo de ejemplo, un péptido derivado de cualquiera de los péptidos que proceden de una secuencia que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1, puede tener aminoácidos distintos en la misma posición de la secuencia siempre que esos cambios no afecten a la eficacia en la función definida...

1. Uso de al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1, capaz de inhibir la actividad del virus VIH, para la elaboración de una composición farmacéutica. 2. Uso de al menos un péptido según la reivindicación 1, donde la secuencia aminoacídica tiene al menos un 80% de identidad con SEQ ID NO: 1. 3. Uso de al menos un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, donde la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO: 1. 4. Uso de al menos un péptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde el virus VIH es del tipo VIH-1. 5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el péptido tiene entre 15 y 20 aminoácidos. 6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde el péptido está contenido en cualquiera de los fragmentos SEQ ID NO: 3-15, de la secuencia SEQ ID NO: 1, donde además dicho péptido mantiene la función de origen. 7. Uso según la reivindicación 6, donde el péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO: 15-41. 8. Uso según la reivindicación 7, donde el péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 4-5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 15-23, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 o SEQ ID NO: 41, donde dicho péptido mantiene la función de origen. 9. Uso según la reivindicación 7, donde el péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 24-40, donde dicho péptido mantiene la función de origen. 10. Uso según la reivindicación 7, donde el péptido, o cualquiera de sus combinaciones, se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO: 16-24, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 37 o SEQ ID NO: 41, donde dicho péptido mantiene la función de origen. 11. Composición farmacéutica que comprende al menos un péptido, o derivado del mismo, contenido en una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia SEQ ID NO: 1, donde dicho péptido es capaz de inhibir la actividad del virus VIH. 12. Composición farmacéutica según la reivindicación 11, donde la secuencia aminoacídica tiene al menos un 80% de identidad con SEQ ID NO: 1. 13. Composición farmacéutica según la reivindicación 12, donde la secuencia aminoacídica es SEQ ID NO: 1. 14. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13, donde el péptido tiene entre 15 y 20 aminoácidos. 15. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, que además comprende excipientes farmacéuticamente aceptables. 16. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, que además comprende al menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. 17. Composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11a 16, que además comprende otra sustancia activa. 18. Método para la fabricación de la composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17 que comprende: a) Sintetizar al menos un péptido ,o derivado del mismo, y b) preparar el producto obtenido en el apartado (a) en una forma adaptada a la administración oral o parenteral. 19. Método para la fabricación de la composición farmacéutica según la reivindicación 18, donde el péptido se selecciona de la lista que comprende SEQ ID NO: 3-5, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 10-11, SEQ ID NO: 15-41. 14 ES 2 351 026 A1 ES 2 351 026 A1 LISTA DE SECUENCIAS <110> Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) <120> Uso de péptidos de la proteína E2 del virus de la hepatitis G para inhibir la actividad del virus VIH <130> 1641.438 <160> 41 <170> PatentIn versión 3.5 <210> 1 <211> 387 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 1 1 <210> 2 <211> 23 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus type 1 <400> 2 ES 2 351 026 A1 2 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 3 <210> 4 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 4 <210> 5 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 5 <210> 6 <211> 36 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 6 ES 2 351 026 A1 3 <210> 7 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 7 <210> 8 <211> 24 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 8 <210> 9 <211> 21 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 9 <210> 10 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 10 <210> 11 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C ES 2 351 026 A1 4 <400> 11 <210> 12 <211> 45 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 12 <210> 13 <211> 21 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 13 <210> 14 <211> 33 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 14 <210> 15 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C ES 2 351 026 A1 <400> 15 <210> 16 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 16 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 17 <210> 18 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 18 <210> 19 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 19 ES 2 351 026 A1 6 <210> 20 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 20 <210> 21 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 21 <210> 22 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 22 <210> 23 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 23 <210> 24 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C ES 2 351 026 A1 7 <400> 24 <210> 25 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 25 <210> 26 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 26 <210> 27 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 27 <210> 28 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 28 ES 2 351 026 A1 8 <210> 29 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 29 <210> 30 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 30 <210> 31 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 31 <210> 32 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 32 <210> 33 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C ES 2 351 026 A1 9 <400> 33 <210> 34 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 34 <210> 35 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 35 <210> 36 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 36 <210> 37 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 37 ES 2 351 026 A1 <210> 38 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 38 <210> 39 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 39 <210> 40 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 40 <210> 41 <211> 18 <212> PRT <213> Hepatitis GB virus C <400> 41 ES 2 351 026 A1 11 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA