REDUCCIÓN DE LAS INTERFERENCIAS ENTRE ADYUVANTES QUE CONTIENEN ACEITE Y ANTÍGENOS QUE CONTIENEN TENSIOACTIVOS.

Reducción de las interferencias entre adyuvantes que contienen aceite y antígenos que contienen tensioactivos Campo de la técnica La presente invención está en el campo de la fabricación de vacunas adyuvadas. En concreto, se refiere al uso de adyuvantes grasos durante la fabricación de vacunas basadas en antígenos que contienen tensioactivos. Técnica anterior El uso de adyuvantes para potenciar las respuestas inmunitarias contra antígenos de vacunas es bien conocido (p. ej., véase las referencias 1 y 2). Durante muchos años, los únicos adyuvantes aprobados para uso humano han sido las sales de aluminio III, no obstante en muchos países se han aprobado las vacunas que contienen el adyuvante MF59 y el adyuvante RC-52, incluidos Italia (en el producto de Chiron FLUAD) y Argentina (en el producto de Berna Biotech SUPERVAX) Otros adyuvantes en las últimas etapas de experimentación para uso humano incluyen mezclas de colesterol y saponinas, ISCOM, MPL, AS04, virosomas, SBA4, etc. MPL o monofosforilo lípido A 3-O-desacilado se ha usando con el HBsAg, por ejemplo véase el documento WO 98/43670. Una característica habitual de algunas alternativas a las sales de aluminio es la presencia de un componente graso. Por ejemplo, el adyuvante MF59 incluye escualeno (un aceite) y MPL contiene una forma desacilada de monofosforilo lípido A que tiene múltiples cadenas de ácido graso fijadas a una estructura de di-glucosamina. La invención se refiere a la evitación de las interferencias que se pueden producir entre estos adyuvantes grasos y antígenos que incluyen un componente tensioactivo. Sumario de la invención El inventor ha encontrado que los adyuvantes grasos en composiciones de vacuna pueden ser incompatibles con antígenos que incluyen un componente tensioactivo. No obstante, en muchas situaciones sigue siendo deseable combinar un adyuvante graso y una mezcla de antígeno/tensioctivo, y es un objeto de la invención proporcionar formas de evitar las dificultades que pueden surgir al hacerlo. Es un objeto adicional de proporcionar procedimientos para combinar adyuvantes y antígenos, en los que se evita la incompatibilidad. Para evitar estos problemas de incompatibilidad al usar antígenos que normalmente se purifican usando tensioactivos, un enfoque sería usar un procedimiento para prepara una composición inmunogénica, en la que: (a) la composición comprende un antígeno y un adyuvante graso; y (b) el antígeno se purifica sustancialmente en ausencia del tensioactivo. Purificando el antígeno mediante una vía alternativa que evita el uso de tensioactivo se superaría cualquier incompatibilidad con adyuvantes grasos. Por motivos clínicos, históricos o reguladores puede no ser posible para purificar un antígeno sin el uso de tensioactivos o para eliminar totalmente los tensioactivos de las vacunas. En esta situación, la invención evita las interferencias reduciendo la proporción entre el aceite y el tensioactivo en la composición. Una vacuna típica de MF59/HBsAg contiene un enorme exceso de aceite con respecto al tensioactivo, con una proporción aceite:tensioactivo de más de 4000:1 (en peso). La invención está dirigida a minimizar la cantidad de adyuvante graso en una composición y usa, como máximo, un exceso de 1000 veces en peso de aceite. Por tanto, la invención proporciona un procedimiento para preparar una composición inmunogénica, que comprende las etapas de combinar (i) un componente de antígeno de superficie viral que incluye un tensioactivo y (ii) un componente adyuvante graso, para dar una composición en la que la proporción en peso entre el adyuvante graso y el tensioactivo es inferior a 1000:1. El adyuvante graso La invención usa adyuvantes grasos, es decir un componente adyuvante que incluye una molécula grasa. Los adyuvantes grasos típicos comprenden un aceite metabolizable, un ácido graso y/o una molécula que comprende un resto ácido graso. Dos adyuvantes grasos preferidos son los adyuvantes conocidos como MF59 y MPL. MF59 es un adyuvante graso porque contiene escualeno, que es un aceite metabolizable. MPL es adyuvante graso porque contiene un disacárido sustituido con múltiples cadenas de ácido graso. Así como MF59, también se pueden usar adyuvantes en emulsión de aceite en agua. Por tanto, las composiciones preferidas de la invención incluyen: (a) una emulsión de aceite en agua, tal como una emulsión submicrónica de aceite en agua. que comprende escualeno y monooelato de polioxietileno sorbitano (y, opcionalmente, trioelato de sorbitano); y/o (b) un monofosforilo lípido A 3-O-desacilado. El monooelato de polioxietileno sorbitano también se conoce como polisorbato 80. Además de MF59 y MPL, otros adyuvantes grasos que se pueden usar con la invención incluyen, entre otros: derivados de glucosamida fosfato; N-acil-seudopéptidos; el adyuvante soluble derivado del lípido A de Escherichia 2 E06795518 08-11-2011   coli conocido como OM-174; los compuestos que contienen lípidos unidos a una estructura acíclica que contiene fosfato; y análogos del lípido A sintético acíclico. Cuando se usa un adyuvante en emulsión de aceite en agua, tal como MF59, normalmente se añade a un volumen igual de una composición antigénica acuosa, de modo que la emulsión es 50 % en volumen de la composición total. Cuando se usa un adyuvante 3D-MPL, una dosis típica está entre 25 g/ml y 200 g/ml, por ejemplo en el intervalo de 50-150 g/ml, 75-125 g/ml, 90-110 g/ml o aproximadamente 100 g/ml. Es habitual administrar entre 25-75 g de 3D-MPL por dosis, por ejemplo entre 45-55 g o aproximadamente 50 g de 3D-MPL por dosis. Un adyuvante en emulsión tal como MF59 normalmente se proporcionará en un contenedor distinto del del antígeno, para la mezcla extemporánea en el momento de usar, o se puede proporcionar ya mezclado con el antígeno. Normalmente, un adyuvante 3D-MPL ya estará mezclado con el antígeno antes de su distribución a los usuarios finales. MF59 El adyuvante MF59 es una emulsión de aceite en agua formada por escualeno, Tween 80 (monooleato de polioxietilensorbitano) y Span 85 (trioleato de sorbitano). La emulsión se microfluidifica para dar una emulsión con un tamaño de gota en submicrones. La preparación de M59 se describió inicialmente en la referencia 3 y el producto se ha fabricado y comercializado en Chiron Corpotation, Detalles adicionales se pueden encontrar en el Capítulo 10 de la ref. 2, el Capítulo 12 de la ref. 1 y en las referencias de 4 a 6. La composición de MF59 en volumen es 5% de escualeno, 0,5 % de polisorbato 80 y 0,5 % de Span 85. En términos de peso, estas proporciones pasan a se 4,3 % de escualeno, 0,5 % de polisorbato 80 y 0,48 % de Span 85. El contenido en tensioactivo del mismo MF59 no se tiene en cuenta al calcular la proporción aceite:tensioactivo, ya que la proporción se basa en el contenido de tensioactivo del antígeno. La emulsión M59 incluye, de forma ventajosa, iones de citrato, por ejemplo tampón de citrato sódico 10 mM. Otras emulsiones en aceite en agua Como alternativa al adyuvante MF59, se pueden usar otras emulsiones de aceite en agua. Normalmente, las emulsiones de adyuvante incluyen al menos un aceite y al menos un tensioactivo, siendo el(los) aceite(s) y el(los) tensioactivo(s) biodegradables (metabolizables) y biocompatibles. Generalmente, las gotas de aceite en la emulsión tienen un diámetro inferior a 5 m, habitualmente con un diámetro de submicrones. Los tamaños de las gotas pequeñas se pueden conseguir con un microfluidizador para proporcionar emulsiones estables. Se prefieren las gotas con un tamaño inferior a 220 nm, ya que pueden someterse a esterilización en filtro. Las emulsiones pueden incluir aceites como los procedentes de una fuente animal (como un pez) o una fuente vegetal, en lugar de aceites minerales. Entre las fuentes de aceites vegetales se incluyen nueces, semillas y granos. Como ejemplos de aceites de nuez están el aceite de cacahuete, el aceite de soja, el aceite de coco y el aceite de oliva, los disponibles con mayor frecuencia. Se puede usar aceite de jojoba, obtenido, por ejemplo, de la semilla de jojoba. Los aceites de semillas incluyen aceite de cártamo, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol y similares. En el grupo de los granos, el aceite de maíz es el disponible más fácilmente, pero también pueden usarse aceites de otros granos de cereales tales como trigo, avena, centeno, arroz, mijo, triticale y similares. Los ésteres de ácido graso de 6-10 átomos de carbono del glicerol y de 1,2-propanodiol, aunque no se producen de forma natural en los aceites de semilla, se pueden preparar mediante hidrólisis, separación y esterificación de los materiales adecuados a partir de los aceites de frutos secos y de semillas. Las grasas y los aceites de la leche de mamífero son metabolizables y, por tanto, pueden usarse en la práctica de esta invención. Los... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para preparar una composición inmunogénica, que comprende las etapas de combinar (i) un componente de antígeno de superficie viral que incluye un tensioactivo y (ii) un componente adyuvante graso, para dar una composición en la que la proporción en peso entre el adyuvante graso y el tensioactivo es inferior a 1000:1. 2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el adyuvante graso comprende un aceite metabolizable. 3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el adyuvante graso comprende una emulsión submicrónica de aceite en agua de escualeno y polisorbato 80. 4. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el adyuvante graso comprende una molécula que comprende un resto ácido graso. 5. El procedimiento de la reivindicación 4, en el que el adyuvante graso es un monofosforilo lípido A 3-desoxiacilado (`3D-MPL). 6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el 3D-MPL es una mezcla de moléculas que varían según su acilación. 7. El procedimiento de la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en el que el adyuvante graso incluye: 8. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 7, en el que el ED-MPL está en forma de partículas. 9. El procedimiento de la reivindicación 8, en el que las partículas se pueden esterilizar mediante filtración. 10. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9, en el que el 3D-MPL está en una combinación con una sal de aluminio. 11. El procedimiento de la reivindicación 10, en el que la sal de aluminio es un fosfato de aluminio. 12. El procedimiento de la reivindicación 11, en el que el 3D-MPL se adsorbe sobre la sal de aluminio. 28 E06795518 08-11-2011   13. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el tensioactivo es un éster de polioxietilensorbitano. 14. El procedimiento de la reivindicación 13, en el que el éster es polisorbato 20. 15. El procedimiento de la reivindicación 13 o la reivindicación 14, en el que la concentración de tensioactivo no es superior a 50 g/ml. 16. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el antígeno de superficie viral es un antígeno particulado de superficie de la hepatitis B, purificado en presencia de un tensioactivo. 17. El procedimiento de la reivindicación 16, en el que el HBsAg se expresa en una célula de levadura. 18. El procedimiento de la reivindicación 17, en la que la levadura es Saccharomyces cerevisiae. 19. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, en el que el HBsAg no está glicosilado y/o incluye fosfatidilinositol. 20. El procedimiento de una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, en el que el HBsAg procede del subtipo adw1 del virus de la hepatitis B. 21. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el antígeno es una proteína híbrida que comprende un antígeno de superficie viral y un antígeno heterólogo. 22. El procedimiento de la reivindicación 21, en el que el antígeno de superficie viral es HBsAg y el antígeno heterólogo es un antígeno de la malaria. 23. El procedimiento de la reivindicación 22, en el que la proteína híbrida comprende HBsAg y un fragmento de la proteína circunsporozoito de Plasmodium falciparum. 24. El procedimiento de la reivindicación 23, en el que la proteína híbrida comprende una porción C-terminal de una proteína circunsporozoito de Plasmodium falciparum, cuatro o más repeticiones en tándem de la región inmunodominante de la proteína circunsporozoito y HBsAg. 25. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la proporción en peso del adyuvante graso y el tensioactivo es inferior a 500:1. 26. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la proporción en peso del adyuvante graso y el tensioactivo es inferior a 50:1. 27. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que el adyuvante graso es un 3D-MPL y la proporción en peso del adyuvante graso y el tensioactivo está entre 2,5:1 y 25:1. 28. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la composición tiene una osmolalidad de 200 mOsm/kg a 400 mOsm/kg. 29. El procedimiento de cualquier reivindicación precedente, en el que la composición incluye un tampón fosfato. 30. El procedimiento de de cualquier reivindicación precedente, en el que la la composición tiene un pH entre 6,5 y 7,0. 31. El uso de (i) un componente de antígeno de superficie viral que incluye un tensioactivo y (ii) un adyuvante graso en la fabricación de un medicamento para administrar a un paciente, en el que la proporción en peso entre el adyuvante graso en (ii) y el tensioactivo en (i) es inferior a 1000:1. 32. Un procedimiento para preparar una composición inmunógena, que comprende las etapas de combinar (i) un componente de HBsAg que incluye polisorbato 20 y (ii) un componente adyuvante que comprende 3D-MPL adsorbido en un fosfato de aluminio, para dar una composición en la que la proporción en peso entre 3D-MPL y el polisorbato 20 es inferior a 1000:1. 33. Una composición inmunogénica, en la que: (a) la composición comprende HBsAg, polisorbato 20, 3D-MPL y un adyuvante de fosfato de aluminio, en la que el polisorbato 20 se incorpora en las partículas de HBsAg durante la purificación; y (b) la proporción en peso entre el 3D-MPL y el polisorbato 20 es inferior a 1000:1. 29 E06795518 08-11-2011