Procedimiento de evaluación de respuestas inmunitarias.

Un procedimiento para predecir una respuesta inmunitaria en un sujeto a una terapia inmunitaria con un agenteque comprende una proteína antigénica de interés que comprende las etapas de:

cultivar células inmunitarias aisladas del sujeto con una agrupación de varios péptidos de una biblioteca depéptidos superpuestos de la proteína antigénica de interés;

analizar simultáneamente un sobrenadante de medio de cultivo del sujeto para múltiples parámetros dereactividad inmunitaria que comprende la especificidad y respuesta de citocinas de citocinas y quimiocinas,que permiten la identificación de fenotipos de células de tipo 1, tipo 2 y T-reguladoras para la agrupación devarios péptidos superpuestos;

determinar el tipo de respuesta inmunitaria basándose en la expresión de citocinas coordinadas en respuestaa los péptidos individuales en el medio de cultivo como indicador del desenlace del tratamiento.

Procedimiento de evaluación de respuestas inmunitarias

Campo técnico de la invención

La presente solicitud se refiere a procedimientos para predecir una respuesta inmunitaria en un sujeto a una terapia inmunitaria.

Antecedentes de la invención

El sistema inmunitario proporciona protección contra el ataque microbiano. Por su propia esencia es un sistema complejo ya que debe poder reconocer y adaptarse a amenazas en constante cambio a la vez que limita la lesión colateral al propio tejido. Es una consecuencia de esta complejidad que la disfunción, tanto hiper como hipoactividad, estén en la raíz de muchas enfermedades humanas. El sistema inmunitario adaptativo (compuesto por linfocitos B y linfocitos T) reconoce antígenos en forma de patrones moleculares tales como péptidos, glucopéptidos, fosfopéptidos y lípidos, unidos a y presentados en el contexto de clases especializadas de moléculas presentadoras de antígeno. Los fragmentos derivados de antígeno, por ejemplo, péptidos que son reconocidos por los linfocitos T, se denominan en lo sucesivo epítopes. Se acepta ampliamente que el reconocimiento por un linfocito T de su epítope específico es el acontecimiento central en la función inmunitaria adaptativa.

Estas moléculas presentadoras de antígeno especializadas incluyen: i) las proteínas de antígeno leucocitario humano clásicas (HLA) que son altamente polimórficas y pueden separarse en dos clases principales, clase I y clase II; ii) el grupo no clásico no que está codificado por los subloci HLA E, F y G (Braud VM, Curr Opin Immunol. 1999 Feb;11 (1) :100-8) , y iii) la familia de CD1 de moléculas presentadoras de antígeno (Bendelac A, Science. 1995 Jul 14;269 (5221) :185-6) . Las moléculas de clase I de HLA están codificadas por los loci HLA A, B y C y presentan 8-10 péptidos de aminoácido (AA) para linfocitos T citotóxicos CD8+ (Adams EJ, Immunol Rev. 2001 Oct;183:41-64) . Las moléculas de clase II de HLA presentan 12-16 péptidos de AA para linfocitos T colaboradores CD4+ y están codificadas por los loci HLA DR, DP y DQ (Korman AJ, Immunol Rev. 1985 Jul;85:45-86) . Los linfocitos T sólo reconocen antígenos en el contexto de moléculas presentadoras de antígeno, y sólo después del procesamiento y la presentación de antígeno apropiado. Para la presentación de antígeno dependiente de HLA, el procesamiento de antígeno normalmente consiste en la fragmentación proteolítica de la proteína, produciendo polipéptidos que se ajustan en la ranura de la molécula de HLa y este complejo de péptido/HLA se presenta posteriormente sobre la superficie celular de la célula presentadora de antígeno al linfocito T (Rock, K, Adv Immunol. 2002;80:1-70, Cresswell P, Curr Biol. 1994 Jun 1;4 (6) :541-3) . El grupo no clásico está codificado por los subloci HLA E, F y G y se caracteriza por un bajo grado de polimorfismo y una capacidad para unirse y presentar un conjunto limitado de péptidos a células efectoras inmunitarias. Se ha demostrado que el reconocimiento de péptidos presentados por moléculas de HLA no clásicas es importante en la inducción de tolerancia inmunitaria en áreas tales como la interfase materno-fetal y/o inmunidad tumoral. El otro grupo importante entre estas moléculas especializadas es la familia de CD1, que participa en la presentación de lípidos tales como glucolípidos bacterianos a células efectoras especializadas en el sistema inmunitario.

Tres tipos principales de inmunidades de linfocitos T pueden seguir el reconocimiento de antígenos: tipo 1 (Th1) , tipo 2 (Th2) y reguladora (T-reguladora) . La inmunidad de tipo 1 es importante para la eliminación de patógenos intracelulares e inmunidad antitumoral y se caracteriza principalmente por la expresión de IFN gamma (IFN-γ) . La inmunidad de tipo 2 es crítica para la eliminación de patógenos extracelulares y se caracteriza principalmente por la expresión de citocinas tales como IL-4, IL-5, IL-9 y IL-13. El tipo T-regulador de inmunidad, mediado por citocinas tales como IL-10 o TGF-beta, es esencial para la generación y el mantenimiento de la auto-tolerancia. Estos tres tipos de respuesta no se limitan a los linfocitos T alfa/beta TCR+ CD8+ clásicos y también pueden estar mediados por linfocitos gamma/delta TCR+ CD8+, además de linfocitos citolíticos espontáneos (NK) y linfocitos T-NK. Por tanto, el reconocimiento de epítopes antigénicos específicos por cualquiera de estos tipos de células conduce a su activación y respuesta especializada distintiva. Por tanto, la calidad de una respuesta inmunitaria puede describirse observando la expresión coordinada de patrones de citocinas (tipo 1, tipo 2 y T-reguladoras) .

La activación de la respuesta de linfocitos T apropiada durante el transcurso de una reacción inmunitaria implica frecuentemente el dominio de una repuesta especializada sobre las otras. Esta activación selectiva de una repuesta de linfocitos T especializada apropiada es un determinante crítico para el desenlace de enfermedad. Un ejemplo sorprendente de esto se demuestra en la respuesta de pacientes en lepra, en los que una repuesta de tipo 1 a infección se caracteriza por inmunidad protectora y una repuesta de tipo 2 conduce frecuentemente a enfermedad mortal. En otro ejemplo espectacular referente a la inmunidad tumoral se ha mostrado que los epítopes tolerogénicos que conducen a un desplazamiento inapropiado hacia una repuesta T-reguladora producen posterior progresión tumoral en seres humanos, mientras que la activación de respuestas de tipo 1 por epítopes de antígenos de tumor están asociadas a la inhibición de crecimiento tumoral. Además, un desplazamiento inapropiado lejos de una respuesta T-reguladora puede conducir al desarrollo de enfermedad autoinmunitaria si el propio antígeno se presenta. El cuadro clínico específico de enfermedad autoinmunitaria dependería de la respuesta dominante: tanto el tipo 1, como en el caso de diabetes de tipo 1, como el tipo 2, como en el caso de alergia.

Como la activación de estas respuestas de linfocitos T especializados depende de la presentación de epítopes específicos para ellos, por tanto, sería ventajoso identificar estos epítopes de péptido. Identificando estos epítopes de linfocitos T especializados temprano en el estado de enfermedad aumenta la oportunidad de potenciar respuestas de linfocitos T apropiadas o eliminar respuestas de linfocitos T inapropiadas, y así desplazar el equilibrio de la respuesta inmunitaria para mejorar el desenlace de enfermedad. Una metodología para la identificación cuantitativa y la caracterización cualitativa de estos epítopes de linfocitos T antigénicos es una base importante para el diseño de vacunas, además de enfoques de diagnóstico y terapéuticos para enfermedades infecciosas, autoinmunitarias y neoplásicas.

Kakinoki y col. (Journal of Immunology 51 (2) , 2000: 202-208) se refiere a inmunoterapia para rinitis alérgica estacional que comprende cultivar PBMC de un paciente con alérgenos del polen y analizar el perfil de citocinas.

Resumen de la invención

La presente invención proporciona un procedimiento para predecir una respuesta inmunitaria en un sujeto a una terapia inmunitaria con un agente que comprende una proteína antigénica de interés que comprende las etapas de:

cultivar células inmunitarias aisladas del sujeto con una agrupación de varios péptidos de una biblioteca de péptidos superpuestos de la proteína antigénica de interés;

analizar simultáneamente un sobrenadante de medio de cultivo del sujeto para múltiples parámetros de reactividad inmunitaria que comprende la especificidad y respuesta de citocinas de citocinas y quimiocinas, que permiten la identificación de fenotipos de células de tipo 1, tipo 2 y T-reguladoras para la agrupación de varios péptidos superpuestos;

determinar el tipo de respuesta inmunitaria basándose en la expresión de citocinas coordinadas en respuesta a los péptidos individuales en el medio de cultivo como indicador del desenlace del tratamiento.

La terapia puede ser una inmunoterapia tal como vacunación, inmunoterapia pasiva y transferencia de células adoptivas.

Este procedimiento también se basa en desvelar procedimientos para identificar uno o más péptidos inmunomoduladores de un sujeto cultivando las células inmunitarias del sujeto en presencia de uno o más péptidos de una biblioteca de péptidos superpuestos tomada de una proteína antigénica de interés y analizando simultáneamente el cultivo para múltiples parámetros de reactividad... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para predecir una respuesta inmunitaria en un sujeto a una terapia inmunitaria con un agente que comprende una proteína antigénica de interés que comprende las etapas de:

cultivar células inmunitarias aisladas del sujeto con una agrupación de varios péptidos de una biblioteca de

péptidos superpuestos de la proteína antigénica de interés; analizar simultáneamente un sobrenadante de medio de cultivo del sujeto para múltiples parámetros de reactividad inmunitaria que comprende la especificidad y respuesta de citocinas de citocinas y quimiocinas, que permiten la identificación de fenotipos de células de tipo 1, tipo 2 y T-reguladoras para la agrupación de varios péptidos superpuestos;

determinar el tipo de respuesta inmunitaria basándose en la expresión de citocinas coordinadas en respuesta a los péptidos individuales en el medio de cultivo como indicador del desenlace del tratamiento.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la terapia es inmunoterapia tal como vacunación, inmunoterapia pasiva y transferencia de células adoptivas.