Un procedimiento in vitro de diagnóstico del cáncer ovárico epitelial en una muestra de un sujeto humano,

que comprende: (a) detectar el nivel de expresión polipeptídica de cada uno de los marcadores FGF-2 y CA125 en la muestra de un sujeto, en el que dicha muestra es de sangre, plasma o suero; (b) comparar el nivel de expresión de cada marcador en a) en dicha muestra con el nivel de expresión de cada marcador en una muestra control de un sujeto sano no afectado por cáncer, en el que un nivel de expresión de cada marcador que es mayor en la muestra del sujeto que en la muestra control es una indicación de que el sujeto está afectado por cáncer de ovarios

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos in vitro de diagnóstico del cáncer ovárico epitelial y de valoración de la potencial eficacia de una terapia para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial.

Antecedentes de la invención

El carcinoma ovárico epitelial (COE) es el tumor maligno de ovarios más frecuente y representa el 80% de todas las neoplasias malignas de los ovarios (1). Se piensa que los CEO se originan en el propio epitelio de la superficie de los ovarios normales (ESE) o en las criptas y quistes de inclusión localizados en el estroma (1). Los EOC son heterogéneos y se designan de acuerdo con su subtipo histológico: seroso, endometrioide, mucinoso, de células claras, de Brenner, indiferenciado o mixto (asociación de dos o más subtipos) (2,3). Este cáncer a menudo es asintomático y más del 70% de los pacientes con cáncer ovárico son diagnosticados en una etapa avanzada de la enfermedad. Aunque hasta el 80% de los pacientes responderá inicialmente al tratamiento, generalmente se observa recurrencia dentro de unos intervalos de tiempo variables. Aunque el 10-15% de los pacientes alcanzan y mantienen una respuesta completa a la terapia, el resto de los pacientes muestran enfermedad persistente o, en última instancia, sufren recidiva que requiere tratamiento adicional. En contraste con esto, los tumores límite o de bajo potencial de malignidad (BPM), que representan el 10-20% de todos los COE, tienen un pronóstico más favorable en comparación con la forma invasiva de la enfermedad, en la que la tasa de supervivencia a los 5 años desciende por debajo del 30 %) (1,4). En la actualidad no existe un procedimiento fiable para la detección selectiva del cáncer de ovarios en una etapa temprana. El marcador en suero CA125 usado en la clínica (5) combinado con la ecografía transvaginal, ecografía tridimensional o Doppler de potencia sólo han proporcionado unos resultados mínimos (6). La menor eficacia de CA125 para la detección selectiva está muy relacionada con su mala especificidad. Aunque los niveles elevados de CA125 normalmente se asocian con la enfermedad maligna, el incremento de los niveles en suero de CA125 también se ha observado con afecciones benignas (7), trastornos no neoplásicos tales como el primer trimestre del embarazo, la menstruación, la endometriosis, la fibrosis uterina, la salpingitis aguda, hepatopatías e inflamación del peritoneo, el pericardio o la pleura, además de cáncer en otros lugares. Además, los niveles de CA124 generalmente no aumentan en las primeras etapas de la enfermedad y niveles menores también se asocian con tumores del endometrio y ováricos mucinosos (8). Por tanto, existe la necesidad de desarrollar herramientas de detección selectiva fiables para el COE, ya que serían extremadamente valiosas para mejorar la detección del cáncer, el tratamiento clínico y, después, afectarían positivamente a la supervivencia. La tecnología de micromatrices es un potente procedimiento para el análisis de la expresión génica específica de cáncer midiendo la expresión específica del tumor de miles de genes en cientos de tumores (9), que, después, se puede asociar con parámetros clínicos específicos. Los genes candidatos a marcadores diagnósticos pueden además caracterizarse en combinación con una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (Q-PCR) a gran escala del ARN y análisis inmunohistoquímico (IHC) de la expresión de proteínas usando matrices tisulares. No obstante, dichas técnicas diagnósticas son difíciles de implementar, ya que requieren cirugía para obtener las muestras de epitelio ovárico. Como alternativa, si el gene expresado diferencialmente codifica una proteína secretada en circulación en sangre periférica, tal como una proteína representa un potencial marcador en suero. El enfoque más habitual para el análisis de dichos marcadores en sangre periférica es a través de un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA). Aunque en estudios previos se ha investigado el potencial de la prostasina, la osteopontina, la mesotelina y HE4 (10-13) como marcadores diagnósticos del COE, no se ha demostrado que ningún marcador sea lo suficientemente sensible ni específico para un diagnóstico adecuado del cáncer de ovarios. Varias combinaciones de diferentes marcadores tumorales han mostrado una especificidad más elevada al diferenciar la enfermedad benigna de maligna (13,14). No obstante, la eficacia y/o la sensibilidad de estos marcadores estaban limitadas a tumores de subtipo seroso en etapa avanzada. Por tanto, el cáncer de ovarios sigue siendo una fuente fundamental de morbididad y mortalidad y existe una clara necesidad de desarrollo de nuevos procedimientos diagnósticos que tengan la sensibilidad y especificidad requeridas para una detección precoz y fiable del cáncer de ovarios. Otros objetos, ventajas y características de la presente invención serán más evidentes a partir de la lectura de la siguiente descripción no restrictiva de realizaciones específicas de la misma, dadas únicamente en forma de ejemplos con referencias a las figuras anexas.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere al uso de marcadores asociados con el cáncer de ovarios para el diagnostico in vitro del cáncer ovárico epitelial y la valoración de la potencial eficacia de una terapia para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial. En consecuencia, en un primer aspecto, la invención proporciona un procedimiento in vitro de diagnóstico del cáncer ovárico epitelial en una muestra de un sujeto humano, que comprende:

(a) detectar el nivel de expresión polipeptídica de cada uno de los marcadores FGF-2 y CA125 en la muestra

de un sujeto, en el que dicha muestra es de sangre, plasma o suero;

(b) comparar el nivel de expresión de cada marcador en a) en dicha muestra con el nivel de expresión de

cada marcador en una muestra control de un sujeto sano no afectado por cáncer, en el que un nivel de expresión de cada marcador que es mayor en la muestra del sujeto que en la muestra control es una indicación de que el sujeto está afectado por cáncer de ovarios. En una realización, el sujeto mencionado con anterioridad es asintomático para el cáncer de ovarios. En una realización, la muestra control mencionada con anterioridad es una muestra no cancerosa del sujeto obtenida antes, en la que un nivel de expresión de cada uno de los marcadores que es mayor en la muestra sujeto que en la muestra no cancerosa del sujeto tomada anteriormente es una indicación de que el sujeto está afectado por cáncer de ovarios. En una realización, la muestra control mencionada con anterioridad corresponde a un nivel de expresión umbral para cada uno de los marcadores determinada mediante curvas del operador receptor comparando la concentración de cada uno de los marcadores en una población control sin cáncer de ovarios con la de una población afectada por cáncer de ovarios. En otra realización, el nivel de expresión se determina usando un inmunoensayo. En otra realización, el inmunoensayo es un ensayo de inmunoadsorción unido a enzimas (ELISA). En una realización, el nivel de expresión de cada uno de los marcadores mencionados con anterioridad es superior a los siguientes niveles de expresión umbral predeterminados: 50 U/ml para CA125 y 37 pg/ml para FGF-2. En una realización, la etapa (a) de lo mencionado anteriormente comprende detectar el nivel de expresión polipeptídica del marcador IL-18 en la muestra. En una realización, la etapa (b) de lo mencionado anteriormente comprende detectar el nivel de expresión polipeptídica del marcador IL-18 en la muestra y el nivel de expresión de IL18 en la muestra es superior al nivel de expresión umbral predeterminado de 215 pg/ml. En otra realización, la muestra del sujeto mencionado con anterioridad es suero. En otro aspecto, la invención proporciona un procedimiento para evaluar la potencial eficacia de una terapia para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial en un sujeto humano, comprendiendo dicho procedimiento determinar el nivel de expresión polipeptídica de cada uno de los marcadores CA125 y FGF-2 en una muestra del sujeto (muestra sujeto) en la que dicha muestra es sangre, plasma o suero, antes y después de la administración de dicha terapia en dicho sujeto, en la que una disminución del nivel de expresión de dichos marcadores tras la administración de dicha terapia es indicativa de que dicha terapia es eficaz para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial. En otra realización de los procedimientos mencionados con anterioridad, la terapia mencionada con anterioridad es un compuesto problema. En una realización de los procedimientos mencionados anteriormente, los procedimientos... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento in vitro de diagnóstico del cáncer ovárico epitelial en una muestra de un sujeto humano, que comprende:

(a) detectar el nivel de expresión polipeptídica de cada uno de los marcadores FGF-2 y CA125 en la muestra de un sujeto, en el que dicha muestra es de sangre, plasma o suero;

(b) comparar el nivel de expresión de cada marcador en a) en dicha muestra con el nivel de expresión de cada marcador en una muestra control de un sujeto sano no afectado por cáncer,

en el que un nivel de expresión de cada marcador que es mayor en la muestra del sujeto que en la muestra control es una indicación de que el sujeto está afectado por cáncer de ovarios.

2. El procedimiento según la reivindicación 1, en el que dicho sujeto es asintomático para cáncer de ovarios.

3. El procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que dicha muestra control es una muestra no cancerosa del sujeto en un momento anterior, en el que un nivel de expresión de cada uno de los marcadores que es mayor en la muestra sujeto que en la muestra no cancerosa del sujeto tomada anteriormente es una indicación de que el sujeto está afectado por cáncer de ovarios.

4. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la muestra control mencionada con anterioridad corresponde a un nivel de expresión umbral para cada uno de los marcadores determinada mediante curvas del operador receptor comparando la concentración de cada uno de los marcadores en una población control sin cáncer de ovarios con la de una población afectada por cáncer de ovarios.

5. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que el nivel de expresión se determina usando un inmunoensayo.

6. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho inmunoensayo es un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA).

7. El procedimiento según la reivindicación 5, en el que el nivel de expresión de cada uno de los marcadores es superior a los siguientes niveles de expresión umbral predeterminados: 50 U/ml para CA125 y 37 pg/ml para FGF-2.

8. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que la etapa (a) de lo mencionado anteriormente comprende detectar el nivel de expresión polipeptídica del marcador IL-18 en la muestra.

9. El procedimiento según la reivindicación 7, en el que la etapa (b) de lo mencionado anteriormente comprende detectar el nivel de expresión polipeptídica del marcador IL-18 en la muestra y en el que el nivel de expresión de IL18 en la muestra es superior al nivel de expresión umbral predeterminado de 215 pg/ml.

10. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que la muestra de dicho sujeto es suero.

11. Un procedimiento para evaluar la potencial eficacia de una terapia para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial en un sujeto humano, comprendiendo dicho procedimiento determinar el nivel de expresión polipeptídica de cada uno de los marcadores CA125 y FGF-2 en una muestra del sujeto, en la que dicha muestra es sangre, plasma o suero, antes y después de la administración de dicha terapia en dicho sujeto, en la que una disminución del nivel de expresión de dichos marcadores tras la administración de dicha terapia es indicativa de que dicha terapia es eficaz para tratar o inhibir el cáncer ovárico epitelial.

12. El procedimiento según la reivindicación 11, en el que dicha terapia es un compuesto de prueba.

13. El procedimiento según la reivindicación 11 o 12, que además comprende detectar la concentración del marcador IL-18 en la muestra.

14. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en el que dicho nivel de expresión se determina usando un inmunoensayo.

15. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 en el que dicho nivel de expresión se determina usando un ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA).

16. El procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 11 a 15, en el que dicha muestra es suero.