Un procedimiento para cultivar y producir ácaros, que comprende cultivar los ácaros en un medio de crecimiento sólido adecuado,

en condiciones adecuadas y durante un periodo de tiempo adecuado en un cuarto de producción adecuado, de modo que los ácaros se seleccionan entre Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides microceras, Dermatophagoides siboney, Tyrophagus putrescentiae, Lepidoglyphus destructor, Glycyphagus domesticus, Acarus siro, Euroglyphus maynei, Blomia kulagini, Blomia tropicalis y Pyroglyphus africanus y los ácaros se cultivan en un medio comprendido dentro de una bolsa cerrada, en la que: i: la bolsa tiene una permeabilidad al oxígeno que es suficiente para permitir el crecimiento de los ácaros; ii: la bolsa comprende un área que es transparente para permitir la inspección del crecimiento de los ácaros; iii: el medio de cultivo que comprende los ácaros en crecimiento/cultivados está presente en una capa relativamente fina de una altura inferior a 110 mm; y iv: la bolsa cerrada comprende al menos 25 g de medio y donde las bolsas están apiladas encima unas de otras en un sistema organizador adecuado, en el que la superficie superior de una bolsa de abajo no toca la superficie inferior de una bolsa de encima.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un procedimiento para cultivar y producir ácaros, tales como ácaros del polvo doméstico, que comprende cultivar los ácaros en un medio de crecimiento adecuado, en condiciones adecuadas y durante un periodo de tiempo adecuado en un cuarto de producción adecuado, que se caracteriza porque los ácaros se cultivan en medio constituido por una bolsa cerrada.

Antecedentes

Especies diferentes de ácaros, tales como ácaros del polvo doméstico, se usan para preparar extractos alergénicos usados en formulaciones para alergia para usar en, por ejemplo, pruebas de alergia in vivo o in vitro, o en preparaciones de desensibilización administradas a pacientes.

Estos ácaros incluyen, en particular, ácaros de las especies siguientes: Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Blomia kulagini o tropicalis, Pyroglyphus africanus y Euroglyphus maynei.

En numerosos documentos de la técnica anterior se describen procedimientos industriales relevantes para producir ácaros. Con respecto a las mejoras descritas de la producción de ácaros, se puede decir que la técnica anterior se centra en elementos técnicos, tales como un medio nuevo, humedad óptima, temperatura etc.

En términos generales, para la producción a gran escala con fines industriales, la técnica anterior usa MATRACES o, como alternativa, frascos de expresión para cultivar/criar ácaros de polvo doméstico.

El documento EP1236394B1 (Stallergenes correspondiente al documento US2003/0059445A1) describe el cultivo de ácaros del polvo domésticos en frascos (véase el ejemplo 1).

T. Batard y col. (Int Arch Allergy Immunol 2006; 140:295-305) describe el cultivo en matraces de plásticos (véase la página 296, columna 2).

F.C. Yi y col. (Asian Pacific J. of Allergy and Immunology (1999) 17: 189-194) describe cultivar ácaros de polvo domésticos en matraces Erlenmeyer (véase la página 190, columna del centro).

J. Miyamoto (Japón, J. Exp. Med. Vol, 45, 2. p. 133-138, 1975) describe el cultivo de ácaros de polvo domésticos en frascos de Roux (véase la página 134, columna 2).

El cultivo de ácaros del polvo en matraces Erlenmeyer o en frascos de Rouxs puede considerarse un procedimiento “estándar” de la técnica anterior. En la figura 1 del presente documento se muestra una imagen de un matraz Erlenmeyer y en la figura 2 del presente documento se muestra una imagen de un frasco de Roux.

Para la producción/cultivo de ácaros de polvo doméstico a pequeña escala, la técnica anterior también describe el uso de botes (véase, por ejemplo, J. Med Ent. Vol 12, nº 6: 577-621, 1976).

También se ha descrito el cultivo de ácaros en bolsas/sobres. Ivanov y Petrova describe en Medisinskaja Parazitoligija y Parazitarnye Bolezni, 46-49, 1985, la producción a pequeña escala de Dermatophagoides phteronyssinus en bolsas de celofán cerradas 5 x 10 cm. De acuerdo con los autores del artículo, no existe peligro de infecciones fúngicas por moho que supriman el cultivo de los ácaros por el cultivo de ácaros en bolsas de celofán. La cantidad de medio de crecimiento (1 g) y, por tanto el tamaño del cultivo del ácaro que se puede obtener en las bolsas de celofán descritas en el artículo, es muy baja. También se sabe que el celofán tiene una permeabilidad al oxígeno muy baja y, por tanto, el celofán no sería adecuado como material de bolsa para el cultivo de ácaros a gran escala.

Otras especies de ácaros se usan en el campo del control biológico para reducir plagas en cosechas e invernaderos.

Un artículo en Crop Protection, 5(2): 122-124, 1986, describe la cría en masa del ácaro depredador Cheyletus eruditus para usar para el control biológico de ácaros en granos o semillas almacenados, mediante un procedimiento por el cual los ácaros depredadores se cultivan en bolsas. Bolsas de harina de fondo cuadrado de kg de capacidad se llenaron con g de hojas de lechuga, 20.000 ácaros presa y 100-200 ácaros depredadores.. Cada bolsa se cerró plegando y manteniendo una temperatura de 25 ºC y una humedad relativa del 75% durante 28-35 días. Para detectar el tiempo correcto para terminar la cría, la proporción entre ácaros depredadores y ácaros presa se comprobó cada dos días después del día 28.

Una importante ventaja del procedimiento de cultivo de acuerdo con la invención en comparación con el procedimiento anterior de criar ácaros depredadores es que las bolsas de la invención comprenden una zona transparente que permite la inspección visual del crecimiento del ácaro en la bolsa. En general, la cantidad del medio de cultivo usada en el procedimiento de la invención es también mucho mayor que la cantidad de medio de cultivo en el procedimiento descrito anteriormente.

El documento GB 2 168 680 describe el cultivo de artrópodos vivos o depredadores similares en sobres de material o material plástico microperforados. Las bolsas descritas en esta solicitud tampoco permiten una inspección óptima del crecimiento de los ácaros en las bolsas porque la perforación del material plástico puede alterar la inspección del crecimiento de los ácaros.

Sumario de la invención

El problema que se ha de resolver mediante la presente invención es proporcionar un procedimiento mejor para cultivar y producir ácaros.

La solución se basa en el hallazgo de que cultivando ácaros en una bolsa adecuada, tal como, por ejemplo, una bolsa de papel/plástico tal como se muestra en la figura 3, es posible mejorar de forma significativa la producción de ácaros de polvo domésticos.

La bolsa de papel/plástico como se muestra en la figura 3 se puede caracterizar como una bolsa, en la que:

1: u lateral está fabricado por un material de celulosa (p. ej., papel) que es permeable a oxígeno;

2: el otro lateral está hecho de material plástico transparente. El plástico puede también ser permeable al oxígeno;

3: El tamaño de la bolsa es de aproximadamente 300 mm (ancho) x 500 mm (longitud) con una posibilidad de extenderse hasta una altura de alrededor de 65 mm con el fin de que la bolsa pueda comprender una cantidad relevante de medio para ácaros.

Como conoce el experto en la técnica, generalmente, un medio adecuado para el crecimiento de ácaros del polvo domésticos es un medio sólido, ya que los ácaros normalmente viven en camas o en otros lugares similares, por ejemplo en una casa. Los ácaros de bodega también se alimentan de material sólido y los ácaros depredadores se pueden alimentar de ácaros presa que se alimentan en un medio sólido.

Las ventajas de usar bolsas tal como se describe en el presente documento sobre los usos en la técnica anterior de matraces (p. ej., matraces Erlenmeyer, (véase la figura 1) o frascos de Roux (véase la figura 2), incluyen:

A: el material permeable al oxígeno (p. ej., papel) en un lado tiene un área de superficie mucho más grande que los correspondientes “orificios” en la parte superior de los matraces de la técnica anterior. Esto proporciona un suministro de oxígeno mejor y más uniforme para los ácaros en crecimiento y, por tanto, un mejor crecimiento;

B: el mejor suministro de oxígeno en las bolsas también proporciona la posibilidad de tener más medio de cultivo para ácaros y unidad de espacio físico. Por ejemplo, un matraz Erlenmeyer de 250 ml puede comprender solo aproximadamente 30-50 g de medio (véase la figura 1), mientras que la bolsa mostrada en la figura 3 comprende aproximadamente 500 g de medio y puede comprender todavía más (p. ej., 1200 g). En los matraces Erlenmeyer necesita un espacio libre relativamente grande por encima del medio, ya que el suministro de oxígeno desde el orificio relativamente pequeño en la parte superior del matraz proporciona un suministro de oxígeno relativamente limitado;

C: además, el medio de cultivo para ácaros puede estar presente en forma de una capa relativamente fina en las bolsas (compárese, por ejemplo, la bolsa de la figura 3 con los matraces Erlenmeyer, figura 1). Esto también proporciona mejor crecimiento de los ácaros, ya que los ácaros generalmente viven/crecen en la superficie (los ácaros normalmente vives en camas o en otros lugares de “superficie” similar en, por ejemplo, una casa);

D: Las bolsas, tal como se describe en el presente documento,... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento para cultivar y producir ácaros, que comprende cultivar los ácaros en un medio de crecimiento sólido adecuado, en condiciones adecuadas y durante un periodo de tiempo adecuado en un cuarto de producción adecuado, de modo que los ácaros se seleccionan entre Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides microceras, Dermatophagoides siboney, Tyrophagus putrescentiae, Lepidoglyphus destructor, Glycyphagus domesticus, Acarus siro, Euroglyphus maynei, Blomia kulagini, Blomia tropicalis y Pyroglyphus africanus y los ácaros se cultivan en un medio comprendido dentro de una bolsa cerrada, en la que:

i: la bolsa tiene una permeabilidad al oxígeno que es suficiente para permitir el crecimiento de los ácaros;

ii: la bolsa comprende un área que es transparente para permitir la inspección del crecimiento de los ácaros;

iii: el medio de cultivo que comprende los ácaros en crecimiento/cultivados está presente en una capa relativamente fina de una altura inferior a 110 mm; y

iv: la bolsa cerrada comprende al menos 25 g de medio y donde las bolsas están apiladas encima unas de otras en un sistema organizador adecuado, en el que la superficie superior de una bolsa de abajo no toca la superficie inferior de una bolsa de encima.

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que la bolsa es una bolsa permeable a oxígeno que tiene una permeabilidad al aire de al menos 150 ml/min, medida de acuerdo con la norma ISO 5636-3, método de Bendtsen; o en el que la bolsa tiene una permeabilidad al oxígeno de al menos 10 cm3 de oxígeno por bolsa al día, medida de acuerdo con el procedimiento de ensayo estándar conocido para el índice de transmisión de oxígeno a través de envases secos usando un sensor colorimétrico mediante el estándar conocido del Instituto Nacional Estadounidense de Estándares documento/estándar ASTM F1307-02; o en el que la bolsa tiene una permeabilidad al oxígeno que es suficiente para proporcionar al menos el mismo rendimiento de ácaros por g de medio en la bolsa en comparación con el rendimiento en un matraz Erlenmeyer de 250 ml que comprende 30 g de medio y está cerrada con un tapón de algodón, en el que la bolsa y el matraz Erlenmeyer se cultivan en condiciones idénticas.

3. El procedimiento para cultivar y producir ácaros de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que la bolsa es una bolsa adecuada para esterilizar material en autoclave.

4. El procedimiento para cultivar y producir ácaros de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en el que la bolsa es una bolsa de grado médico, en la que la porosidad es lo bastante baja como para evitar que la atraviesen bacterias y microorganismos.

5. El procedimiento de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que el medio de cultivo ocupa al menos un 70 % del volumen total de la bolsa cerrada con el medio, ya que la bolsa cerrada con medio está físicamente presente en el cuarto de producción durante el cultivo de los ácaros del polvo.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la bolsa está hecha de al menos un material seleccionado del grupo de materiales que consiste en un material de celulosa (p. ej., papel), un material plástico y un textil (tejido o no tejido); y en el que la bolsa estará hecha de un material en el que los ácaros dentro de la bolsa cerrada esencialmente no puedan salir a través del material como tal.

7. El procedimiento de la reivindicación 6, en el que

1: un lado de la bolsa consiste esencialmente en un material de celulosa (preferentemente papel); y

2: el otro lateral de la bolsa consiste esencialmente en un material plástico transparente.

8. El procedimiento de las reivindicaciones 6 ó 7, en el que el tamaño de la bolsa es de 50 mm a 1000 mm (anchura) x de 100 mm a 1.500 mm (longitud) x con una posibilidad de extenderse a una altura adecuada con el fin de que la bolsa pueda comprender una cantidad relevante del medio de cultivo para ácaros tal como se especifica en el punto

(iii) de la reivindicación 1, y en el que la bolsa cerrada comprende al menos 400 g de medio.

9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el ácaro es un ácaro del polvo doméstico o el ácaro es un ácaro de bodega.

10. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las condiciones de cultivo de los ácaros son:

a: La temperatura es de 23 ºC  5 ºC;

b: La humedad es de 70 a 85% de humedad relativa (HR);

c: el periodo de cultivo es de 1 a 24 semanas, normalmente de 4 a 20 semanas.

11. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el medio de cultivo que comprende los ácaros en crecimiento/cultivados está presente en una capa relativamente fina de una altura inferior a 60 mm.

5 12. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el cuarto de producción comprende al menos 50 bolsas.

13. El procedimiento de la reivindicación 12, en el que el cuarto de producción comprende al menos 10 sistemas de

estante organizador adecuados, en el que cada sistema de estante organizador es un sistema organizador con al 10 menos 5 bolsas apiladas una encima de otra.

14. El procedimiento de la reivindicación 13, en el que el sistema de estante organizador es un estante que comprende un contenedor de atrapamiento en la parte inferior del estante para atrapar los ácaros que se pueden escapar de una bolsa.

15 .

15. E procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el procedimiento se sigue de etapas posteriores adecuadas con el fin de aislar una composición alergénica de ácaros adecuada que después se incorpora en una composición farmacéutica adecuada.