PÉPTIDOS CON ACTIVIDAD APOPTÓTICA.

La presente invención se refiere a péptidos con actividad apoptótica, así como a su uso para la preparación de medicamentos. La apoptosis es un programa de suicidio genéticamente codificado, el cual es inducido en células eucarióticas bajo determinadas condiciones fisiológicas o patológicas. Se comentan estados patológicos en los cuales la apoptosis tiene efectos negativos y para cuyo tratamiento debe ser inhibida la apoptosis. Un ejemplo de una enfermedad de este tipo es la ateriosclerosis. En particular, por parte de los inventores pudo demostrarse ya con anterioridad que, precisamente en la zona de las placas ateroscleróticas se manifiestan células apoptóticas (en particular: células endoteliales, células de la musculatura lisa), y que esta manifestación es reforzada por relaciones de flujo perturbadas, es decir, es dependiente del flujo (Freyberg et al., BBRC, 286, 141-149, 2001). Además, los inventores pudieron demostrar que sustancias que inhiben la unión de TSP-1 a IAP y/o vß 3 pueden también inhibir ampliamente la apoptosis dependiente del flujo. Existe, por lo tanto, una alta demanda de sustancias que influyan sobre la apoptosis de forma negativa. En particular, sería favorable poder inhibir la apoptosis dependiente del flujo y ligada de forma causal a la aterosclerosis. Además, existe una elevada demanda de formulaciones farmacéuticas que contengan este tipo de sustancias y que pueden emplearse para el tratamiento de afecciones en las que esté indicada la inhibición de la apoptosis, en particular para el tratamiento de la arteriosclerosis. En este caso, estas sustancias deben ser de un peso molecular lo más bajo posible y/o péptidos pequeños, con el fin de garantizar una buena disponibilidad. Por lo tanto, era misión de la presente invención proporcionar sustancias de actividad apoptótica, preferiblemente péptidos. En particular, otra misión de la presente invención era proporcionar sustancias, preferiblemente péptidos, que puedan inhibir una apoptosis de las células endoteliales, dependiente del flujo e inducida por TSP-1. Otra misión de la presente invención era proporcionar preparados farmacéuticos con los cuales se puedan tratar enfermedades en las que esté indicada la inhibición de la apoptosis. Estos y otros problemas, no mencionados explícitamente, pero que resultan sin más de la reseña que antecede, son resueltos por los ejemplos de realización de la presente invención, definidos en las reivindicaciones. En particular, este problema se resuelve al proporcionar medicamentos para el tratamiento de la arteriosclerosis según la reivindicación 1, que comprenden péptidos con una de las secuencias de aminoácidos representadas en las SEQ ID NOs 1 a 11. Bajo un ejemplo de realización preferido de la presente invención se trata en este caso de sustancias inhibidoras de la apoptosis que comprenden secuencias de aminoácidos de la fórmula general (1): R-A1-Y-V-V-M, en donde A1 representa A, D, E, G, M, N, T, W o Y, o sales farmacéuticamente aceptables de estas sustancias. Para los fines de la presente invención, se utiliza el código internacional usual de una letra para aminoácidos, A representa, por lo tanto, alanina (Ala), C representa cisteína (Cys), D representa ácido aspártico (Asp), E representa ácido glutámico (Glu), F representa fenilalanina (Phe), G representa glicina (Gly), L representa leucina (Leu), M representa metionina (Met), N representa asparagina (Asn), P representa prolina (Pro), R representa arginina (Arg), S representa serina (Ser), T representa treonina (Thr), V representa valina (Val), W representa triptófano (Trp) e Y representa tirosina (Tyr). Los L-aminoácidos se simbolizan en este caso por mayúsculas y los D-aminoácidos se simbolizan por el empleo de minúsculas. Bajo un punto de vista particularmente preferido, la presente invención se refiere, por lo tanto, a sustancias inhibidoras de la apoptosis, preferiblemente péptidos, que comprenden una de las secuencias de péptidos mostradas bajo SEQ ID NO 1 a SEQ ID NO 11, o sus correspondientes sales farmacéuticamente aceptables. 2   Además, la presente invención se refiere al uso de las sustancias de acuerdo con la invención, preferiblemente proteínas o péptidos que comprenden al menos una de las secuencias de aminoácidos representada en las SEQ ID NO 1 a SEQ ID NO 11, para la preparación de medicamentos para el tratamiento de la arteriosclerosis. Sorprendentemente, por parte de los autores de la invención se demostró que péptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos representada por la fórmula (1) inhiben en una medida extremadamente intensa la apoptosis. En particular, estos péptidos son extraordinariamente adecuados para inhibir la apoptosis de células endoteliales, dependiente del flujo e inducida por TSP-1. Sin embargo, se presume que estos péptidos están en condiciones de inhibir la apoptosis en otras células. Como ejemplos de realización de la presente invención muy particularmente preferidos, se proporcionan los siguientes péptidos/secuencias de péptidos: 1. R-A-Y-V-V-M (SEQ ID NO 1) 2. R-W-Y-V-V-M (SEQ ID NO 2) 3. R-Y-Y-V-V-M (SEQ ID NO 3) 4. R-E-Y-V-V-M (SEQ ID NO 4) 5. K-R-A-Y-V-V-M-W-K-K (SEQ ID NO 5) 6. K-R-E-Y-V-V-M-W-K-K (SEQ ID NO 6) 7. R-G-Y-V-V-M (SEQ ID NO 7) 8. R-M-Y-V-V-M (SEQ ID NO 8) 9. R-T-Y-V-V-M (SEQ ID NO 9) 10. R-N-Y-V-V-M (SEQ ID NO 10) 11. R-D-Y-V-V-M (SEQ ID NO 11) Para los fines de la presente invención, por el término péptido se entiende una sustancia que se compone de una cadena de 2 o más aminoácidos unidos a través de enlaces péptido. En particular, péptidos de acción apoptótica de acuerdo con la invención presentan una longitud de cadena de < 100 aminoácidos, preferiblemente < 75, de manera particularmente preferida de < 50, de manera muy particularmente preferida de < 25 y de la forma más preferida de < 15 aminoácidos. Por lo tanto, para los fines de acuerdo con la invención, se prefieren particularmente péptidos que comprenden una de las SEQ ID NOs 1-11 y que en el extremo N-terminal y/o en el extremo C-terminal comprenden en cada caso 1 a 3 aminoácidos adicionales. Para los fines de la presente invención, por actividad apoptótica se entiende que la adición de la correspondiente sustancia en el sistema de ensayo mostrado en los Ejemplos 5 y 6 genera un índice de inhibición positivo o negativo. En particular, para ello se cultivan células endoteliales, de manera particularmente preferida HUVEC, en un medio que contiene 1 µg de TSP-1 por cada ml. Los valores en porcentaje de la apoptosis de este testigo positivo sirven entonces, como se muestra en los Ejemplos, para el cálculo del índice de inhibición para las sustancias que se emplean como inhibidores potenciales junto con el inductor TSP-1 en investigaciones paralelas. Un testigo negativo indica la ausencia de demás inductores. Un índice de inhibición positivo indica en este caso que la sustancia correspondiente inhibe la apoptosis. Un índice de inhibición negativo indica en este caso que la sustancia utilizada induce la apoptosis, es decir, intensifica la apoptosis inducida por TSP-1. No obstante, los péptidos nativos presentan, a menudo, una escasa estabilidad metabólica frente a las peptidasas y una biodisponibilidad relativamente mala. Partiendo de los péptidos arriba mostrados, el experto en la materia puede desarrollar, sin una actividad inventiva, toda una serie de compuestos derivados que poseen un modo de acción similar o equiparable y que, entre otros, se denominan también miméticos de péptidos. En calidad de miméticos de péptidos se designan en este caso, para los fines de la presente invención, compuestos que imitan la estructura de péptidos y que, en calidad de ligandos, están en condiciones de imitar (agonista) o bloquear (antagonista) la actividad biológica en el plano del receptor/enzima. Ante todo, los miméticos de péptidos deben presentar una biodisponibilidad mejorada y una estabilidad metabólica mejorada. El tipo de mimetismo puede 3   abarcar desde la estructura de partida ligeramente modificada hasta el no péptido puro. Véase, por ejemplo, A. Adang et al., Recl. Trav. Chim. Pays-Bas 113 (1994), 63-78. En principio, se ofrecen las siguientes posibilidades para el mimetismo/derivatización de una estructura peptídica: Uso de D-aminoácidos en lugar de L-aminoácidos Modificación de la cadena lateral de aminoácidos Variación/prolongación de la cadena principal del péptido Ciclación para la estabilización de la conformación Uso de moldes que obligan a una estructura secundaria determinada Uso de una columna vertebral no peptídica, la cual imita con restos/cadenas laterales adecuados la estructura del péptido Mientras que la estabilidad proteolítica de un péptido puede ser aumentada por la sustitución de L-aminoácidos por D-aminoácidos, la modificación de las cadenas laterales... [Seguir leyendo]

1.- Medicamento para el tratamiento de la arteriosclerosis, que comprende al menos una sustancia de actividad apoptótica o una sal farmacéuticamente aceptable de la sustancia de actividad apoptótica y un soporte farmacéuticamente aceptable, caracterizado porque la sustancia de actividad apoptótica comprende al menos una porción peptídica con una de las secuencias de aminoácidos representadas en las SEQ ID nºs 1 a 11 y es de actividad anti-apoptótica, y la sustancia de actividad apoptótica es un péptido que presenta una longitud de cadena de < 100 aminoácidos. 2.- Medicamento según la reivindicación 1, caracterizado porque la sustancia de actividad apoptótica es un péptido que presenta una longitud de cadena de < 50 aminoácidos. 3.- Medicamento según la reivindicación 2, caracterizado porque la sustancia de actividad apoptótica es un péptido que presenta una longitud de cadena de < 25 aminoácidos.