Un método de tratamiento de medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende:

(a) exponer los medios de cultivo celular a luz ultravioleta C (UVC); (b) hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e (c) introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

1. Campo de la invención

La invención se refiere a métodos para tratar medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor usando luz ultravioleta C (UVC) y filtración.

2. Antecedentes de la invención

La contaminación viral de sobrenadantes y medios celulares plantea un gran desafío para los fabricantes biofarmacéuticos en todo el mundo. Se han empleado varios métodos para inactivar y/o eliminar partículas virales de ADN o ARN, con envuelta o sin envuelta (o “desnudas”) grandes o pequeñas, de sobrenadantes celulares. Los ejemplos de estos enfoques incluyen la tecnología de filtración de 20 nm, cromatografía sobre membrana Q y tecnología del filtro de profundidad. Sin embargo, estos métodos se han usado principalmente como medios para la inactivación viral (es decir, aclaramiento viral) de medios y sobrenadantes recogidos de líneas celulares o tejidos (es decir, aguas abajo de la producción de proteínas).

No se han usado tales métodos de aclaramiento viral para tratar medios de cultivo celular antes de su exposición a líneas celulares o tejidos (es decir, aguas arriba de la producción de proteínas) por varias razones. En primer lugar, el empleo de tales técnicas para el tratamiento de medios celulares a gran escala, en los que se procesan hasta 20.000 l de medios celulares al día, puede ser prohibitivo en cuanto a tiempo y costes. En segundo lugar, tales métodos se han empleado históricamente para eliminar contaminantes de sobrenadantes celulares a gran escala como etapa preliminar en la purificación de productos proteicos terapéuticos de sobrenadantes celulares a gran escala antes de la administración de los productos proteicos terapéuticos a los pacientes. En tercer lugar, no se ha requerido ni documentado la necesidad en la técnica de la inactivación o eliminación de partículas virales en el procedimiento aguas arriba de la producción de proteínas. Finalmente, los biorreactores y fermentadores no están equipados frecuentemente con la maquinaria requerida para llevar a cabo estas técnicas, y el coste de adecuación del equipo existente para añadir tal maquinaria puede ser exorbitadamente alto.

Además de las técnicas anteriores, se ha usado la luz ultravioleta para tratar preparaciones de proteínas a gran escala antes de la purificación de estas proteínas procedentes de sobrenadantes celulares. Sin embargo, como con otros métodos de tratamiento de sobrenadantes celulares a gran escala antes de la purificación y el aislamiento de productos proteicos terapéuticos a partir de los sobrenadantes celulares, se ha usado principalmente la exposición a luz ultravioleta aguas abajo de la producción de proteínas. En otras palabras, no existe ningún método de la técnica anterior en el que se haya usado luz ultravioleta (solo o en combinación con otros métodos de purificación o tratamiento) para tratar medios de cultivo celular antes de introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor. Por tanto, existe una necesidad en la técnica de métodos para tratar medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor. Tales métodos serían particularmente útiles para proteger líneas celulares valiosas frente a la contaminación viral, ahorrar costes perdidos como resultado de medios contaminados e inservibles, y aumentar la eficiencia de la producción de proteínas mediante tales líneas celulares. Por tanto, el desarrollo de tales métodos tendría amplia aplicación en la fabricación de productos biofarmacéuticos.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención proporciona métodos para tratar medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende exponer los medios de cultivo celular a luz ultravioleta C (UVC); hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor.

La presente invención también proporciona métodos de tratamiento de medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende exponer los medios de cultivo celular a luz UVC; hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro de profundidad; hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor.

Realizaciones específicas preferidas de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción más detallada de determinadas realizaciones preferidas y las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

La figura 1 muestra la relación entre la longitud de onda de la luz y el daño al ADN/ARN viral.

La figura 2 muestra la eficiencia de la eliminación de virus de la leucemia murina (VLMu) o virus diminuto del ratón (VDR) de medios de cultivo celular usando dos tipos de filtros de profundidad.

La figura 3 muestra la eficiencia de la eliminación de parvovirus porcino (PVP) y reovirus 3 (Reo-3) de medios de cultivo celular usando dos tipos de filtros de profundidad.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La invención proporciona métodos para tratar medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende exponer los medios de cultivo celular a luz ultravioleta C (UVC); hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor. La invención también proporciona métodos de tratamiento de medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende exponer los medios de cultivo celular a luz UVC; hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro de profundidad; hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor.

En los métodos de la invención, se exponen medios de cultivo celular a luz UVC antes de introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor. La expresión “luz ultravioleta” se refiere a una sección del espectro electromagnético de la luz que se extiende desde la región de los rayos X (100 nm) hasta la región visible (400 nm). En particular, la luz ultravioleta generalmente se divide en cuatro fracciones: (1) luz ultravioleta de vacío, que tiene una longitud de onda de 100 a 200 nm, (2) ultravioleta C (UVC), que tiene una longitud de onda de 200 a 280 nm, (3) ultravioleta B (UVB), que tiene una longitud de onda de 280 a 315 nm, y (4) ultravioleta A (UVA), que tiene una longitud de onda de 315 a 400 nm (véase la figura 1).

En una realización de la invención, se exponen medios de cultivo celular a luz UVC que tiene una longitud de onda de entre 200 y 280 nm antes de introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor. En otra realización de la invención, se exponen medios de cultivo celular a luz UVC que tiene una longitud de onda de 254 nm antes de introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor. En otras realizaciones de la invención, se exponen medios de cultivo celular a luz UVC que tiene una longitud de onda de 254 nm +/- 1 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 2 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 3 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 4 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/5 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 6 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 7 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 8 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 9 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 10 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 15 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 20 nm, o una longitud de onda de 254 nm +/- 25 nm.

En los métodos de la invención, se usa luz UVC para inactivar partículas virales sin envuelta dañando el ADN o ARN viral. El daño del ácido nucleico inactiva los virus e impide su posterior replicación. Un dispositivo típico, o reactor de UVC, para exponer disoluciones a luz UVC utiliza flujo espiral hidráulico junto con una fuente de irradiación que genera vórtices de Dean en una corriente de fluido que permite que se administren dosis de irradiación UVC de manera uniforme en toda la disolución. Cuando se usa luz UVC para inactivar partículas virales sin envuelta, la inactivación viral generalmente se produce tras aproximadamente cinco minutos de exposición.

Tal como se describe en el presente documento, se han usado métodos de aclaramiento viral conocidos en la técnica casi exclusivamente aguas abajo de la producción de proteínas. Además de consideraciones de costes y tiempo, se han usado tales métodos casi exclusivamente aguas abajo de la producción de proteínas porque el objetivo... [Seguir leyendo]

1. Un método de tratamiento de medios de cultivo celular para su uso en un biorreactor que comprende:

(a) exponer los medios de cultivo celular a luz ultravioleta C (UVC);

(b) hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro estéril; e 5 (c) introducir los medios de cultivo celular en un biorreactor.

2. Método según la reivindicación 1, que comprende además una etapa de (a2) hacer pasar los medios de cultivo a través de un filtro de profundidad; antes de la etapa (b).

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la luz UVC tiene una longitud de onda de 254 nm.

4. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se exponen los medios de cultivo celular a luz UVC a una velocidad 10 de flujo de 1-12 litros por hora, preferiblemente 6 litros por hora.

5. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el valor de reducción logarítmica es mayor que o igual a 4,85, preferiblemente, el valor de reducción logarítmica es de 6-7.

6. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se exponen los medios de cultivo celular a luz UVC a una densidad de energía de 120-320 J/m2, preferiblemente 238 J/m2.

15 7. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que el filtro estéril tiene poros con un tamaño máximo de 200 nm.

8. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la etapa de exponer los medios de cultivo celular a luz UVC es suficiente para dañar los ácidos nucleicos de cualquier virus sin envuelta en los medios de cultivo celular.

9. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se usan los medios de cultivo celular tratados para sostener el crecimiento de células de mamíferos o células de insectos.

20 10. Método según la reivindicación 9, en el que las células de mamíferos son capaces de producir anticuerpos.

11. Método según la reivindicación 2, en el que se hacen pasar los medios de cultivo celular a través del filtro de profundidad a un pH ácido, preferiblemente pH 5,0.

12. Método según la reivindicación 2, en el que la etapa de hacer pasar los medios de cultivo celular a través de un filtro de profundidad es suficiente para eliminar cualquier virus con envuelta de los medios de cultivo celular.