PROCEDIMIENTO PARA LA INACTIVACION DE PATOGENOS EN SANGRE DE DONANTES, EN PLASMA SANGUINEO O EN CONCENTRADOS DE ERITROCITOS EN RECIPIENTES FLEXIBLES BAJO AGITACION.

Procedimiento para la inactivación de patógenos en sangre de donantes,

en plasma sanguíneo y/o en concentrados de eritrocitos, que comprende las etapas siguientes:

- la preparación de las donaciones de sangre o bien de los preparados obtenidos a partir de la sangre de donantes y/o por medio de una aféresis mecánica,

(a) la adición de una substancia fotoactiva adecuada y el tratamiento fotodinámico por medio de una irradiación con luz que comprende, o que está constituida de manera exclusiva, por longitudes de onda en el intervalo de absorción de la substancia fotoactiva, o

(b) la aplicación a los preparados de una irradiación con luz ultravioleta (UV) a longitudes de onda comprendidas entre 200 y 320 nm,

- estando constituidos los preparados por una pluralidad de unidades que pueden ser manipuladas de manera individual y que pueden ser conservadas de manera separada y

- encontrándose los preparados respectivamente en bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz flexibles, permeables a la luz (alternativa (a)) o bien permeable a los UV (alternativa (b)), dispuesta en posición horizontal,

caracterizado porque

- las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz están rellenadas en una proporción menor que el 30% en volumen del volumen máximo disponible para el llenado de las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz y

- las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz se mueven durante el tratamiento fotodinámico y/o durante la irradiación con luz UV de tal manera, que se hace balancear al contenido de la bolsa para llevar a cabo la exposición a la luz y por medio del movimiento se forman zonas con espesores de la capa alternativos y, por medio del movimiento las zonas presentan regiones en las que se presentan temporalmente espesores de capa situados por debajo de 1 mm por regla general

Procedimiento para la inactivación de patógenos en sangre de donantes, en plasma sanguíneo o en concentrados de eritrocitos en recipientes flexibles bajo agitación.

El objeto de la invención es un procedimiento para llevar a cabo la inactivación de patógenos tales como bacterias y virus en sangre de donantes (sangre), en plasma sanguíneo (plasma) y/o en concentrados de eritrocitos (EKs) por medio de un tratamiento fotodinámico y/o por medio de una irradiación con luz ultravioleta.

Se sabe que la aplicación terapéutica de sangre y de preparaciones de sangre conlleva el riesgo de que el receptor sea infectado con virus y con bacterias. Pueden citarse, por ejemplo, los virus de la hepatitis-B (HBV) y de la hepatitis-C (HCV) así como los patógenos del SIDA HIV-1 y HIV-2. El riesgo existe siempre que no tenga aplicación ninguna etapa para llevar a cabo la inactivación o bien la eliminación de patógenos a la hora de llevar a cabo la obtención de los preparados correspondientes.

Existía o bien existe una pluralidad de esfuerzos para descontaminar las preparaciones de sangre por medio de métodos fotodinámicos. El principio está basado en que el producto correspondiente es expuesto a la luz en presencia de una substancia fotoactiva (de un fotosensibilizador). La luz irradiada debe contener un intervalo de longitudes de onda, que sea absorbido por el fotosensibilizador y con el cual éste pueda ser activado. La energía absorbida es transferida bien directamente hasta la estructura diana correspondiente (por ejemplo los ácidos nucleicos o las proteínas superficiales de un virus), que es destruida por este motivo, o bien es transferida a las moléculas de oxígeno disueltas, que son activadas por este motivo. Se forma oxígeno singulete, que tiene una marcada actividad virucida y bactericida.

En el caso ideal, el fotosensibilizador empleado tiene una elevada afinidad para los componentes esenciales de los virus y de otros patógenos, por ejemplo para sus ácidos nucleicos y únicamente tiene una baja afinidad o incluso no tiene en absoluto afinidad para los componentes del preparado, que debe ser descontaminado. Como resultado del tratamiento fotodinámico se inactivan en este caso los patógenos, mientras que se mantiene la actividad del producto. Se ha descrito como un fotosensibilizador adecuado para el tratamiento de plasma, por ejemplo, el colorante de fenotiazina constituido por el azul de metileno; para la descontaminación de los concentrados de trombocitos se emplea riboflavina (vitamina B2) y para la descontaminación de los EKs se han ensayado las ftalocianinas. Desde luego los procedimientos para la inactivación fotodinámica de patógenos en EKs no pasan hasta ahora de la escala de laboratorio.

Esto es aún más válido para la propia sangre. Un motivo fundamental a este respecto podría ser considerado en que la luz irradiada tiene que tener una intensidad determinada, con objeto de poder activar al fotosensibilizador empleado, y en que la sangre y los EKs tienen únicamente una permeabilidad muy pequeña para la luz de cualquier longitud de onda. El problema se presenta naturalmente también en el caso del plasma, aún cuando no lo hace en la misma cuantía.

De la misma manera se sabe que pueden ser inactivados también los patógenos por medio de la simple irradiación con luz ultravioleta de onda corta (UV), es decir en el intervalo de longitudes de onda comprendido entre aproximadamente 200 y 320 nm, de manera especial comprendido entre 200 hasta por debajo de 300 nm (UVB y UVC). Por encima de los 320 nm la energía de la irradiación es demasiado baja como para llevar a cabo la inactivación de los microorganismos y de los virus. Frente a los métodos químicos, fotoquímicos y fotodinámicos para llevar a cabo la inactivación de los patógenos, la simple irradiación con luz UV tiene fundamentalmente la ventaja de que es activa por sí misma y no requiere la adición de productos químicos reactivos ni de substancias fotoactivas.

La irradiación UVC es la más efectiva para llevar a cabo la inactivación directa de los patógenos. Esta irradiación tiene desde luego, el inconveniente de que únicamente atraviesa a las soluciones que contienen proteínas tales como el plasma o bien a las suspensiones turbias (por ejemplo sangre y EKs) únicamente hasta una profundidad de penetración muy pequeña. La irradiación UVC fue empleada durante la Segunda Guerra Mundial y brevemente después de la misma con objeto de esterilizar plasma y soluciones de albúmina, ante todo para llevar a cabo la inactivación de los virus de la hepatitis. Entonces se procedió de tal manera, que la solución se hacía pasar a través de una instalación de flujo en forma de película delgada por delante de una fuente de luz UVC. El método se reveló como insuficientemente seguro y fue abandonado (Kallenbach NR, Cornelius PA, Negus D, et al. Inactivación de virus por medio de la luz ultravioleta -Inactivation of viruses by ultraviolet light-. Curr. Stud. Hematol. Blood Transfus. 1989, 56, 70-82).

Actualmente se emplean procedimientos más desarrollados, que trabajan según el mismo principio con objeto de esterilizar preparaciones terapéuticas de proteínas plasmáticas. En cualquier caso se pretendía, o bien se pretende, tratar grandes volúmenes; es decir conjuntos de plasma o bien soluciones proteicas de hasta algunos cientos de litros inclusive e incluso en cantidades mayores (Hart H, Reid K, Hart W. Inactivación de virus durante el tratamiento con luz ultravioleta de inmunoglobulina y de albúmina humana -Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin-. Vox Sang 1993; 64(2):82-88. y Chin S, Williams B, Gottlieb P, et al. Tratamiento virucida con luz ultavioleta de longitud de onda corta de concentrados de plasma y del factor VIII: protección de proteínas por medio de antioxidantes -Virucidal short wavelength ultraviolet light treatment of plasma and factor VIII concentrate: protection of proteins by antioxidants-; Blood 1995; 86(11):4331- 4336).

Se conocen procedimientos continuos para llevar a cabo la irradiación con UV de preparados de sangre y las correspondientes instalaciones de flujo. De este modo, la publicación WO 01/54739 describe un procedimiento continuo en el que se hacen pasar los preparados o bien los líquidos a través de un tubo flexible a modo de cámara de irradiación. Para llevar a cabo el transporte del líquido se emplean tubos flexibles que están aplicados alrededor de un collarín, que transportan al líquido por vía peristáltica a través del tubo flexible. La publicación WO 01/54738 divulga un procedimiento continuo en el que los líquidos se conducen en forma de película delgada a lo largo de la pared interna de una cámara de irradiación que tiene forma cilíndrica, siendo irradiada la película con luz UV a través de la pared permeable a los UV. La publicación WO 89/09067 describe un procedimiento continuo, según el cual se conduce el líquido, que debe ser esterilizado, a través de una cámara de irradiación giratoria, que está dotada en el interior con placas deflectoras. La publicación WO 02/092806 divulga un procedimiento continuo, según el cual se conduce el líquido a través de una cámara de irradiación en forma de intersticio o de forma cilíndrica, que está dotada con un mezclador estático.

Con objeto de llevar a cabo la esterilización de una pluralidad de unidades individuales de donaciones de sangre, de plasma o de EKs, con volúmenes que toman un valor, en todo caso, de algunos cientos de ml inclusive, no son adecuadas las citadas instalaciones de flujo. Sin embargo, en la práctica diaria de un banco de sangre esto es precisamente necesario.

La irradiación UVB es igualmente microbicida y virucida, aún cuando no lo es en la misma cuantía que la irradiación UVC. La irradiación UVB penetra a través de las soluciones que contienen proteínas y a través de las suspensiones turbias algo mejor que la irradiación UVC, desde luego su profundidad de penetración, por ejemplo en plasma, sólo puede determinarse en el intervalo de algunos milímetros.

El plasma y los EKs son aislados en la mayoría de las ocasiones a partir de una sola donación de sangre, o bien se obtienen por medio de una aféresis mecánica de donaciones individuales. El volumen de los preparados está situado, en general, entre aproximadamente 200 y 350 ml. El volumen de donaciones de sangre se encuentra en la mayoría de las ocasiones comprendido entre 450 y 500 ml. Los preparados son sometidos, en general, en bolsas planas de material sintético, a una liofilización (plasma) o son almacenados...

1. Procedimiento para la inactivación de patógenos en sangre de donantes, en plasma sanguíneo y/o en concentrados de eritrocitos, que comprende las etapas siguientes:

caracterizado porque

2. Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado porque los patógenos son virus y/o bacterias.

3. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque por medio del movimiento las zonas presentan regiones en las que se presentan temporalmente espesores de la capa por debajo de 0,05 mm por regla general.

4. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la suma de las superficies del lado inferior y del lado superior de la bolsa para llevar a cabo la exposición a la luz, que se encuentra, o bien que se encuentran, en contacto con el contenido de la bolsa, supone más del 90 por ciento superficial, de manera preferente supone más del 99 por ciento superficial de la superficie interna total del contenido de la bolsa.

5. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque, en el caso de la forma de realización (B), la irradiación es o está comprendida desde por debajo de 320 nm hasta 280 nm y/o la irradiación UVC es o está comprendida desde 280 nm hasta 200 nm, de manera especial la UVC es o está comprendida entre por debajo de 260 nm hasta 220 nm y, de manera preferente, está constituida de manera exclusiva por irradiación con longitudes de onda en los intervalos que han sido citados precedentemente.

6. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la irradiación con UVB se lleva a cabo con una energía luminosa comprendida entre 0,3 y 10 J/cm², de manera preferente comprendida entre 0,5 y 5 J/cm².

7. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la irradiación se lleva a cabo con UVC con una energía luminosa comprendida entre 0,01 y 5 J/cm², de manera especial comprendida entre 0,1 y 2 J/cm².

8. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz en la instalación, en la que son sometidas a movimiento e irradiadas, están sujetas de forma móvil y, de manera especial, no están sujetas entre dos superficies.

9. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque los preparados son plasmas y están constituidos en más de un 80% en peso por plasma sanguíneo.

10. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 8, en el que los preparados son preparados de concentrado de eritrocitos EK y presentan un hematocrito comprendido entre un 10 y un 75% en peso, de manera preferente comprendido entre un 20 y un 60% en peso.

11. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la substancia fotoactiva está constituida por uno o varios colorantes de fenotiacina, especialmente está constituida por tionina, azul de metileno, azul de toluidina y/o por los colorantes Azur A, B y C.

12. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque la substancia fotoactiva está constituida por uno o por varios compuestos de ftalocianina o por uno o por varios compuestos de porfirina.

13. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz están rellenadas como máximo en un 15 % del volumen máximo disponible para el llenado.

14. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque se trata plasma sanguíneo de conformidad con la etapa (a) y en ausencia de un fotosensibilizador.

15. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz están apoyadas por un solo lado de tal manera, que se modifica constantemente durante y como consecuencia del movimiento o bien de la aplicación de sacudidas, la altura de las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz, con referencia a la distancia (normal a la superficie) comprendida entre la superficie, sobre la que yacen las bolsas para llevar a cabo la exposición a la luz y el punto de intersección con la superficie superior de la bolsa para llevar a cabo la exposición a la luz, considerado a través de toda la superficie superior de la bolsa para llevar a cabo la exposición a la luz.

16. Procedimiento según al menos una de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la bolsa para llevar a cabo la exposición a la luz presenta un nivel de llenado medio menor que 5 mm y se generan permanentemente valles de ondulación como consecuencia del movimiento, que generan espesores de la capa menores que la mitad del nivel medio de llenado, preferentemente espesores de capa menores que 1 mm o incluso menores que 0,05 mm.