Método para la detección de cáncer de vejiga.La presente invención se refiere a un método y kit para la detección de cáncer de vejiga mediante la determinación del nivel de expresión de la cadena beta de la proteína del complemento C4A

Método para la detección de cáncer de vejiga.

Campo de la invención

La presente invención se encuadra en general en el campo de la biomedicina y en particular se refiere a un método y kit para la detección del cáncer de vejiga.

Antecedentes de la invención

El cáncer de vejiga es uno de los tipos de cáncer más frecuentes, siendo el cuarto cáncer más frecuente en hombres y el octavo en mujeres, representado aproximadamente el 5% del total de los cánceres diagnosticados en Estados Unidos (A. Jemal, T. Murray, A. Samuels, A. Ghafoor, E. Ward, M.J. Thun, CA Cáncer J Clin 53 (2003) 5). De éstos, más del 90% son carcinomas transicionales (TCC) (E.M. Messing, T.B. Young, V.B. Hunt, K.W. Gilchrist, M.A. Newton, L.L. Bram, W.J. Hisgen, E.B. Greenberg, M.E. Kuglitsch, J.D. Wegenke, Urology 45 (1995) 387), (J.P. Stein, G.D. Grossfeld, D.A. Ginsberg, D. Esrig, J.A. Freeman, A.J. Figueroa, D.G. Skinner, R.J. Cote, J Urol 160 (1998) 645). Alrededor del 75% de los casos diagnosticados son superficiales y pueden ser extirpados sin demasiadas complicaciones mientras que el 25% restante son de carácter invasivo (V.B. Lokeshwar, M.G. Selzer, Urol Oncol 24 (2006) 528). En estos casos la detección precoz condicionaría el tratamiento y mejoraría las expectativas de los pacientes. Además, el índice de recurrencia del cáncer de vejiga es del os más elevados por lo que los. pacientes suelen ser sometidos a controles periódicos tras la primera aparición. La detección precoz de los tumores invasivos así como de los recurrentes, que frecuentemente revisten mayor gravedad que los primariamente detectados, sería de una enorme utilidad para aumentar las expectativas de los pacientes.

En la actualidad, el diagnóstico más seguro se realiza mediante cistoscopia y biopsia. Ambos métodos son invasivos, complicados y costosos. Es por ello que el coste por paciente de cáncer de vejiga desde su detección hasta su muerte sea el más alto de todos los tipos de cáncer (G.F. Riley, A.L. Potosky, J.D. Lubitz, L.G. Kessler, Med.Care 33 (1995) 828), (H. Hedelin, S. Holmang, L. Wiman, Scand J Urol Nephrol 36 (2002) 344), (M.F. Botteman, C.L. Pashos, A. Redaelli, B. Laskin, R. Hauser, Pharmacoeconomics 21 (2003) 1315). El diagnóstico no invasivo más utilizado es la citología de orina. Aunque tiene una alta especificidad presenta una baja sensibilidad y alta variabilidad dependiendo del patólogo que realice en examen (M. Burchardt, T. Burchardt, A. Shabsigh, A. De La Taille, M.C. Benson, I. Sawczuk, Clin Chem 46 (2000) 595). Recientemente se han descrito nuevos marcadores, algunos de ellos aprobados por la Food and Drug Administration de Estados Unidos, que han mostrado una alta sensibilidad (V.B. Lokeshwar, M.G. Selzer, Urol Oncol 24 (2006) 528), (M. Burchardt, T. Burchardt, A. Shabsigh, A. De La Taille, M.C. Benson, I. Sawczuk, Clin Chem 46 (2000) 595), (V.B. Lokeshwar, T. Habuchi, H.B. Grossman, W.M. Murphy, S.H. Hautmann, G.P. Hemstreet, 3rd, A.V. Bono, R.H. Getzenberg, P. Goebell, B.J. Schmitz-Drager, J.A. Schalken, Y. Fradet, M. Marberger, E. Messing, M.J. Droller, Urology 66 (2005) 35), (H.B. Grossman, M. Soloway, E. Messing, G. Katz, B. Stein, V. Kassabian, Y. Shen, Jama 295 (2006) 299), (B.W. van Rhijn, H.G. van der Poel, T.H. van der Kwast, Eur Urol 47 (2005) 736). No obstante, la relativamente baja especificidad y reproducibilidad hacen que la cistoscopia y la citología sean todavía las técnicas más utilizadas (V.B. Lokeshwar, M.G. Selzer, Urol Oncol 24 (2006) 528), ((M. Burchardt, T. Burchardt, A. Shabsigh, A. De La Taille, M.C. Benson, i. Sawczuk, Clin Chem 46 (2000) 595), (V.B. Lokeshwar, T. Habuchi, H.B. Grossman, W.M. Murphy, S.H. Hautmann, G.P. Hemstreet, 3rd, A.V. Bono, R.H. Getzenberg, P. Goebell, B.J. Schmitz-Drager, J.A. Schalken, Y. Fradet, M. Marberger, E. Messing, M.J. Droller, Urology 66 (2005) 35), (H.B. Grossman, M. Soloway, E. Messing, G. Katz, B. Stein, V. Kassabian, Y. Shen, Jama 295 (2006) 299), (B.W. van Rhijn, H.G. van der Poel, T.H. van der Kwast, Eur Urol 47 (2005) 736), (H. Boman, H. Hedelin, S. Holmang, J Urol 167 (2002) 80). El funcionamiento y utilidad de estos marcadores también difiere según se trate de una detección primaria o durante el seguimiento de los pacientes ya diagnosticados. Hasta el momento, los resultados obtenidos no justifican su utilización de forma generalizada ya que, si bien suelen ser más sensibles que la citología urinaria, su grado de especificidad está por debajo.

La búsqueda de nuevos biomarcadores de cáncer de vejiga sigue teniendo, por tanto, un gran interés médico y de salud pública.

Descripción de la invención

La presente invención proporciona un método de diagnóstico de cáncer de vejiga de forma sencilla y fiable, de tal forma que puede ser incluido en la práctica clínica habitual.

Así pues en primer aspecto, la presente invención se refiere a un método in vitro para la detección de cáncer de vejiga que comprende

a) analizar una muestra obtenida de un paciente,

b) determinar el nivel de expresión de la cadena beta de la proteína de complemento C4A,

c) comparar dicho nivel de expresión con un valor control,

donde la alteración del nivel de expresión de dicha proteína es indicativo de cáncer de vejiga.

En un aspecto más en particular, el término "alteración del nivel de expresión" tal y como se utiliza en la presente invención, se refiere a la expresión anormalmente alta de la cadena beta de la proteína de complemento C4A comparado con un valor control. En un aspecto más en particular, la proteína expresa de 3 a 15 veces más en las muestras tumorales que las muestras control. En un aspecto más en particular, la proteína se expresa 10 veces más en las muestras tumorales que en las muestras control.

Por valor control en la presente invención, nos referimos a un valor obtenido de muestras sin cáncer de vejiga y sin ninguna otra enfermedad.

En un aspecto más en particular, en el método de la presente invención, el nivel de expresión de la cadena beta de la proteína de complemento C4A se determina mediante técnicas de inmunoquímica. A título ilustrativo y sin que se limite el alcance de la invención, el término "técnicas inmunoquímicas" tal y como se utiliza en la presente invención, se refiere a: ELISA, Western blot, biochips o microarrays de proteínas, o cualquier otra técnica que incluya anticuerpos específicos frente a la cadena beta de la proteína de complemento C4A.

En un aspecto más en particular de la presente invención, el nivel de la cadena beta de la proteína de complemento C4A se determina mediante anticuerpos policlonales. En otro aspecto más en particular, el método de la presente invención se realiza mediante anticuerpos monoclonales.

El término "muestra" tal y como se utiliza en la presente invención se refiere pero no se limita, a tejidos y/o fluidos (sangre, orina). En un aspecto más en particular de la presente invención, la muestra obtenida del paciente es un fluido, más en particular, es orina, y más en particular es la fracción celular de la orina. En un segundo aspecto, la presente invención se refiere a un kit para la detección de cáncer de vejiga que comprende los reactivos necesarios para llevar a cabo el método descrito en la presente invención.

Descripción de las figuras

La figura 1 muestra el gel de electroforesis bidimensional.

La figura 2 se refiere a la cuantificación de la cadena beta de la proteína de complemento C4A mediante el análisis DIGE para cada una de las bandas (spots) de la proteína: 2A: Average ratio (tumor/control). 14.35, t-test: 0.0122; presente en 8 de 9 geles, 2B: Average ratio (tumor/control). 13.39, t-test: 0.0134; presente en 9 de 9 geles, 2C: Average ratio (tumor/control). 17.72, t-test: 0.0095; presente en 8 de 9 geles, 2D: Average ratio (tumor/control). 10.51, t-test: 0.0122; presente en 9 de 9 geles.

La figura 3 muestra el resultado del Western blot. C1, C2, C3 y C4 se refieren a las muestras control, T1, T2, T3, T4 y T5 se refieren a las muestras obtenidas de los pacientes con tumor de vejiga, a) muestra los resultados después de un minuto de exposición y b) muestra los resultados tras tres minutos de exposición.

Descripción detallada de la invención

Mediante técnicas de proteómica, en concreto mediante la metodología DIGE detectamos que la cadena beta de la proteína de complemento C4A tenía una expresión diferencial en pacientes con cáncer de vejiga y en pacientes control o sanos.

 

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Reivindicaciones:

1. Método in vitro para la detección de cáncer de vejiga que comprende

d) analizar una muestra obtenida de un paciente,

e) determinar el nivel de expresión de la cadena beta de la proteína de complemento C4A,

f) comparar dicho nivel de expresión con un valor control,

donde la alteración del nivel de expresión dicha proteína es indicativo de cáncer de vejiga.

2. Método para la detección de cáncer de vejiga según la reivindicación 1, donde el nivel de expresión de la cadena beta de la proteína de complemento C4A se realiza mediante técnicas de inmunoquímica.

3. Método para la detección de cáncer de vejiga según la reivindicación 2, donde las técnicas de inmunoquímica se lleva a cabo mediante la utilización de anticuerpos.

4. Método para la detección de cáncer de vejiga según la reivindicación 3, donde los anticuerpos son anticuerpos policlonales.

5. Método para la detección de cáncer de vejiga según la reivindicación 3, donde los anticuerpos son anticuerpos monoclonales.

6. Método para la detección de cáncer de vejiga según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la muestra a analizar es un fluido.

7. Método para la detección de cáncer de vejiga según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la muestra a analizar es el componente celular de la orina.

8. Kit para la detección de cáncer de vejiga que comprende los reactivos necesarios para llevar a cabo el método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

 

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