Un método in vitro para seleccionar un individuo sospechoso de tener cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico para detectar células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico,

que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido extraintestinal y/o de fluidos corporales procedente de un individuo para determinar si la GCC está siendo expresada por la células en dicha muestra, en el que la expresión de dicha GCC indica la posibilidad de células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico en dicha muestra

Composiciones y métodos para identificar y marcar células cancerosas originadas en el tubo digestivo.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a métodos de diagnóstico in vitro para detectar células cancerosas del canal alimentario, en particular cáncer de estómago y esofágico primario y metastásico, y a kits y reactivos para realizar dichos métodos. La presente invención se refiere a compuestos y a métodos para la formación de imágenes in vivo y para el tratamiento de tumores que se originan en el canal alimentario, en particular de tumores de estómago y esofágicos primarios y metastásicos. La presente invención se refiere a métodos y a composiciones para fabricar y utilizar composiciones de fármacos, antisentido y de terapia génica dirigidas.

Antecedentes de la invención

Son necesarios reactivos, kits y métodos para seleccionar, diagnosticar y controlar individuos con cáncer que se origina en el canal alimentario, en particular cáncer de estómago y esofágico primario y metastásico. Son necesarios reactivos, kits y métodos para identificar y confirmar que un cáncer de origen desconocido se origina en el canal alimentario, y para analizar muestras de tejido y de cáncer para identificar y confirmar un cáncer que se origina en el canal alimentario y para determinar el nivel de migración de dichas células cancerosas. Son necesarias composiciones que puedan dirigirse de modo específico a células de cáncer de estómago y esofágico. Son necesarios agentes de formación de imágenes que puedan unirse de modo específico a células de cáncer de estómago y esofágico. Son necesarios métodos mejorados para la formación de imágenes de células de cáncer de estómago y esofágico. Son necesarios agentes terapéuticos que puedan unirse de modo específico a células de cáncer de estómago y esofágico. Son necesarios métodos mejorados para tratar individuos sospechosos de padecer cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico. Es necesaria una composición de vacuna para tratar el cáncer de estómago y esofágico. Es necesaria una composición de vacuna para tratar y prevenir el cáncer de estómago y esofágico. Son necesarios agentes terapéuticos que puedan transportar de modo específico compuestos terapéuticos génicos, compuestos antisentido y otros fármacos a las células de cáncer de estómago y esofágico.

Sumario de la invención

La descripción se refiere también a métodos in vitro para determinar si un individuo padece o no un cáncer que se origina en el canal alimentario, en particular cáncer de estómago y esofágico primario y metastásico. La presente descripción se refiere a métodos in vitro para estudiar muestras de tejido no colorrectal y de fluidos corporales procedentes de un individuo para determinar si la GCC, que es expresada por células de colon normales y por células de tumor colorrectal, de estómago y esofágico, está siendo expresada o no por las células en muestras que no sean de colon. La presencia de la proteína GCC o de la transcripción del gen GCC en muestras obtenidas fuera del tracto colorrectal es indicativa de la expresión de GCC, y es la prueba de que el individuo puede estar padeciendo un cáncer de colon metastatizado, o un cáncer de estómago y/o esofágico primario o metastásico. En pacientes sospechosos de padecer un cáncer colorrectal, la presencia de la proteína GCC o de la transcripción del gen GCC en muestras obtenidas fuera del tracto colorrectal apoya la conclusión de que el individuo padece cáncer colorrectal metastásico. El diagnóstico del cáncer colorrectal metastásico puede realizarse o confirmarse. En pacientes sospechosos de padecer cáncer de estómago o esofágico, la presencia de la proteína GCC o de la transcripción del gen GCC en muestras obtenidas fuera del tracto colorrectal apoya la conclusión de que el individuo padece cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico. El diagnóstico del cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico puede realizarse o confirmarse.

La descripción se refiere además a métodos in vitro para determinar si células tumorales sospechosas de ser cáncer de estómago o esofágico tienen un origen en el estómago o esofágico. La presente descripción se refiere a métodos in vitro para diagnosticar si un individuo sospechoso de padecer cáncer de estómago o esofágico padece cáncer de estómago o esofágico. La presente descripción se refiere a métodos in vitro para estudiar muestras de tumores procedentes de un individuo para determinar si la proteína GCC, que es expresada por células de tumor colorrectal, de estómago o esofágico, está siendo expresada o no por las células tumorales. La presencia de la proteína GCC o de la transcripción del gen GCC en una muestra procedente de un paciente sospechoso de padecer cáncer de estómago o esofágico es indicativa de la expresión de GCC, y es la prueba de que el individuo puede estar padeciendo un cáncer de estómago o esofágico. En tumores sospechosos de ser tumores de estómago o esofágicos, la presencia de la proteína GCC o de la transcripción del gen GCC apoya la conclusión de que los tumores son de cáncer de estómago o esofágico y el diagnóstico de cáncer de estómago o esofágico.

La descripción se refiere también a kits in vitro para practicar los métodos de la invención, y a reactivos y composiciones útiles como componentes en dichos kits in vitro de la invención.

Descripción de las realizaciones preferidas

Definiciones

Tal como se emplea en la presente, el término "GCC" se refiere a la proteína celular expresada por células colorrectales normales, así como a células de cáncer colorrectal, de estómago y esofágico primario y metastatizado. En individuos normales, la GCC se encuentra exclusivamente en células del intestino, en particular en células del duodeno, del intestino delgado (yeyuno e íleon), del intestino grueso, del colon (ciego, colon ascendente, colon transverso, colon descendente y colon sigmoide) y del recto.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "fragmento funcional" tal como se emplea en la expresión "fragmento funcional de una transcripción del gen GCC" se refiere a fragmentos de la transcripción del gen GCC que son funcionales con respecto a moléculas de ácido nucleico con secuencias de longitud completa. Por ejemplo, un fragmento funcional puede ser útil como sonda oligonucleotídica o de ácido nucleico, cebador, oligonucleótido antisentido o molécula de ácido nucleico o secuencia codificadora. La secuencia de nucleótidos que codifica proteínas GCC humanas se describe en F.J. Sauvage et al., 1991, J. Biol. Chem., 266:17912-17918.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "fragmento funcional" tal como se emplea en la expresión "fragmento funcional de una proteína GCC" se refiere a fragmentos de la proteína GCC que actúan de la misma manera que la proteína GCC con secuencias de longitud completa. Por ejemplo, un fragmento inmunogénicamente funcional de una proteína GCC comprende un epitopo reconocido por un anticuerpo anti-GCC. Un fragmento funcional de unión al ligando de GGC comprende una secuencia que forma una estructura que puede unirse a un ligando que reconoce y se une a la proteína GCC.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "epitopo reconocido por un anticuerpo antiproteína GCC" se refiere a los epitopos que son reconocidos de modo específico por un anticuerpo antiproteína GCC.

Tal como se emplea en la presente, el término "anticuerpo" se refiere a anticuerpos completos e intactos, y a sus fragmentos Fab y F(ab)₂. Los anticuerpos completos e intactos incluyen anticuerpos monoclonales, tales como anticuerpos monoclonales murinos, anticuerpos quiméricos y anticuerpos humanizados.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "ligando de GCC" se refiere a compuestos que se unen de modo específico a una proteína GCC. Los anticuerpos que se unen a GCC son ligandos de GCC. Un ligando de GCC puede ser una proteína, un péptido o un no peptido.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "agente activo" se refiere a compuestos que son agentes terapéuticos o agentes de formación de imágenes.

Tal como se emplea en la presente, el término "radioestable" se refiere a compuestos no sufren descomposición radiactiva, es decir, compuestos que no son radiactivos.

Tal como se emplea en la presente, la expresión "agente terapéutico" se refiere a compuestos quimioterapéuticos, toxinas,...

1. Un método in vitro para seleccionar un individuo sospechoso de tener cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico para detectar células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico, que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido extraintestinal y/o de fluidos corporales procedente de un individuo para determinar si la GCC está siendo expresada por la células en dicha muestra, en el que la expresión de dicha GCC indica la posibilidad de células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico en dicha muestra.

2. El método de la reivindicación 1, en el que la expresión de dicha GCC por dichas células se determina detectando la presencia de un producto de la transcripción del gen GCC.

3. El método de la reivindicación 1, en el que la expresión de dicha GCC por dichas células se determina mediante una reacción en cadena de polimerasa, en el que dicha muestra se pone en contacto con cebadores que amplifican de modo selectivo la transcripción del gen GCC o del ADNc generado a partir de ésta.

4. El método de la reivindicación 1, en el que la expresión de dicha GCC por dichas células se determina mediante un inmunoensayo, en el que dicha muestra se pone en contacto con anticuerpos que se unen de modo específico al producto de la traducción de GCC.

5. El método de la reivindicación 1, en el que dicha muestra es un fluido corporal.

6. El método de la reivindicación 1, en el que dicha muestra es sangre.

7. El método de la reivindicación 1, en el que dicha muestra es tejido y/o fluido linfático.

8. El método de la reivindicación 1, en el que dicha muestra es una muestra de nódulo linfático.

9. El método de la reivindicación 1, en el que el individuo se ha diagnosticado previamente con cáncer de estómago o esofágico.

10. El método de la reivindicación 1, en el que el individuo se ha diagnosticado previamente y se ha tratado del cáncer de estómago o esofágico.

11. El método según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la muestra es una célula tumoral.

12. Un método in vitro para seleccionar un individuo sospechoso de tener cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico para detectar células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico, que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido extraintestinal y/o de fluidos corporales procedente de un individuo para determinar si el producto de la transcripción o de la traducción del gen GCC está presente en dicha muestra, en el que la presencia de dicho producto de la transcripción o de la traducción del gen GCC en dicha muestra indica que el individuo puede tener células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico en dicha muestra.

13. El método de la reivindicación 12, que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido extraintestinal y/o de fluidos corporales procedente de un individuo para determinar si el producto de la transcripción del gen GCC está presente en dicha muestra.

14. El método de la reivindicación 13, en el que la presencia del producto de la transcripción del gen GCC se determina mediante una reacción en cadena de polimerasa, en el que dicha muestra se pone en contacto con cebadores que amplifican de modo selectivo la transcripción del gen GCC o del ADNc generado a partir de ésta.

15. El método de la reivindicación 12, en el que la presencia del producto de la traducción del gen GCC se determina mediante un inmunoensayo, en el que dicha muestra se pone en contacto con anticuerpos que se unen de modo específico al producto de la traducción del gen GCC.

16. El método de la reivindicación 12, en el que dicha muestra es un fluido corporal.

17. El método de la reivindicación 12, en el que dicha muestra es sangre.

18. El método de la reivindicación 12, en el que dicha muestra es tejido y/o fluido linfático.

19. El método de la reivindicación 12, en el que dicha muestra es una muestra de nódulo linfático.

20. El método de la reivindicación 12, en el que el individuo se ha diagnosticado previamente con cáncer de estómago o esofágico.

21. El método de la reivindicación 12, en el que el individuo se ha diagnosticado previamente y se ha tratado del cáncer de estómago o esofágico.

22. Un método para diagnosticar un individuo que tiene cáncer de estómago, que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido de estómago para detectar la presencia de un producto de la transcripción o de la traducción de GCC, en el que la presencia del producto de la transcripción o de la traducción de GCC en una muestra de estómago indica cáncer de estómago.

23. El método de la reivindicación 22, que comprende las etapas de estudiar dicha muestra de tejido de estómago para determinar si el producto de la transcripción del gen GCC está presente en dicha muestra.

24. El método de la reivindicación 23, en el que la presencia del producto de la transcripción del gen GCC se determina mediante una reacción en cadena de polimerasa, en el que dicha muestra se pone en contacto con cebadores que amplifican de modo selectivo la transcripción del gen GCC o del ADNc generado a partir de ésta.

25. El método de la reivindicación 23, en el que la presencia del producto de la traducción del gen GCC se determina mediante un inmunoensayo, en el que dicha muestra se pone en contacto con anticuerpos que se unen de modo específico al producto de la traducción del gen GCC.

26. Un método para diagnosticar un individuo que tiene cáncer esofágico, que comprende las etapas de estudiar una muestra de tejido de esófago para detectar la presencia de un producto de la transcripción o de la traducción de GCC, en el que la presencia del producto de la transcripción o de la traducción de GCC en una muestra de esófago indica cáncer de esófago.

27. El método de la reivindicación 26, que comprende las etapas de estudiar dicha muestra de tejido de esófago para determinar si el producto de la transcripción del gen GCC está presente en dicha muestra.

28. El método de la reivindicación 27, en el que la presencia del producto de la transcripción del gen GCC se determina mediante una reacción en cadena de polimerasa, en el que dicha muestra se pone en contacto con cebadores que amplifican de modo selectivo la transcripción del gen GCC o del ADNc generado a partir de ésta.

29. El método de la reivindicación 26, en el que la presencia del producto de la traducción del gen GCC se determina mediante un inmunoensayo, en el que dicha muestra se pone en contacto con anticuerpos que se unen de modo específico al producto de la traducción del gen GCC.

30. El uso de un ligando de GCC conjugado con un agente activo, en el que el agente activo se selecciona de una enzima activa, un compuesto quimioterapéutico, una toxina, un compuesto radioterapéutico, un agente de transporte dirigido o un agente radiosensibilizante para su uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico, en el que dicho ligando de GCC es un anticuerpo.

31. El uso según la reivindicación 30, en el que dicho agente activo se selecciona del grupo que consiste en metotrexato, doxorrubicina, daunorrubicina, citosinarabinósido, etopósido, 5-4-fluorouracilo, melfalano, clorambucilo, cis-platino, vindesina, mitomicina, bleomicina, purotionina, macromicina, derivados de 1,4-benzoquinona, trenimón, ricina, cadena A de ricina, exotoxina de Pseudomonas, toxina de la difteria, fosfolipasa C de Clostridium perfringens, ribonucleasa pancreática bovina, proteína antivírica de la hierba carmín, abrina, cadena A de la abrina, factor del veneno de cobra, gelonina, saporina, modecina, viscumina, volkensina, fosfatasa alcalina, nitroimidazol, metronidazol, misonidazol, ⁴⁷Sc, ⁶⁷Cu, ⁹⁰Y, ¹⁰⁹Pd, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁹⁹Au, ²¹¹At, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ³²P y ³³P, ⁷¹Ge, ⁷⁷As, ¹⁰³Pb, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹¹⁹Sb, ¹²¹Sn, ¹³¹Cs, ¹⁴³Pr, ¹⁶¹Tb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁹¹Os, ^193MPt, ¹⁹⁷Hg, ⁴³K, ⁵²Fe, ⁵⁷Co, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷⁷Br, ⁸¹Rb/^81MKr, ^87MSr, ^99MTc, ¹¹¹In, ^113MIn, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹²⁷Cs, ¹²⁹Cs, ¹³¹I, ¹³²I, ¹⁹⁷Hg, ²⁰³Pb y ²⁰⁶Bi.

32. El uso de la reivindicación 31, en el que dicho anticuerpo está humanizado, primatizado o es humano.

33. El uso de la reivindicación 31, en el que dicho ligando de GCC es un anticuerpo monoclonal murino o un anticuerpo quimérico.

34. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 30-33, en el que dicho ligando de GCC es un anticuerpo completo e intacto, un fragmento Fab o un fragmento F(ab)₂.

35. El uso de una cualquiera de las reivindicaciones 30 a 34, en el que el agente activo es un agente quimioterapéutico que provoca la muerte celular, inhibe la división celular o induce la diferenciación.

36. El uso de un ligando de GCC unido a un agente detectable para la fabricación de un medicamento para la formación de radioimágenes de células de cáncer de estómago o esofágico primario y/o metastásico, en el que dicho ligando de GCC es un anticuerpo.

37. El uso de la reivindicación 36, en el que dicho agente detectable se selecciona del grupo que consiste en ⁴⁷Sc, ⁶⁷Cu, ⁹⁰Y, ¹⁰⁹Pd, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁹⁹Au, ²¹¹At, ²¹²Pb, ²¹²Bi, ³²P y ³³P, ⁷¹Ge, ⁷⁷As, ¹⁰³Pb, ¹⁰⁵Rh, ¹¹¹Ag, ¹¹⁹Sb, ¹²¹Sn, ¹³¹Cs, ¹⁴³Pr, ¹⁶¹Tb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁹¹Os, ^193MPt, ¹⁹⁷Hg, ⁴³K, ⁵²Fe, ⁵⁷Co, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷⁷Br, ⁸¹Rb/^81MKr, ^87MSr, ^99MTc, ¹¹¹In, ^113MIn, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹²⁷Cs, ¹²⁹Cs, ¹³¹I, ¹³²I, ¹⁹⁷Hg, ²⁰³Pb y ²⁰⁶Bi.

38. Un método para detectar pruebas de la expresión del gen GCC en una muestra de tejido esofágico procedente de un individuo susceptible al cáncer de estómago o esofágico, comprendiendo dicho método la etapa de estudiar una muestra de tejido esofágico procedente de un individuo para detectar la presencia de la proteína GCC en la muestra.

39. El método de la reivindicación 38, que comprende además la etapa de retirar la muestra de tejido esofágico del individuo antes de detectar la presencia de la proteína GCC.

40. El método de la reivindicación 38 o de la reivindicación 39, en el que la proteína GCC se detecta mediante un inmunoensayo en el que dicha muestra se pone en contacto con anticuerpos que se unen de modo específico a la proteína GCC.

41. Un método para detectar pruebas de la expresión del gen GCC en una muestra de tejido esofágico procedente de un individuo susceptible al cáncer de estómago o esofágico, comprendiendo dicho método la etapa de estudiar una muestra de tejido esofágico procedente de un individuo para detectar la presencia de ARNm que codifica la GCC.

42. El método de la reivindicación 41, que comprende además la etapa de retirar la muestra de tejido esofágico del individuo antes de detectar la presencia del ARNm que codifica la GCC.

43. El método de la reivindicación 41 o de la reivindicación 42, en el que el ARNm que codifica la GCC se detecta mediante una reacción en cadena de polimerasa utilizando cebadores que amplifican de modo selectivo el ARNm que codifica la GCC o del ADNc generado a partir de éste.

44. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 38, 39, 41 ó 42, en el que el individuo ha sido previamente diagnosticado con cáncer de esófago.