Método para detectar un cáncer urotelial que comprende la medición de la proteína CXCL1 o la expresión de un gen que codifica la proteína,

in vitro, en una muestra biológica procedente de un sujeto

Kit y método para la detección del cáncer urotelial.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método para detectar un cáncer urotelial que comprende medir la proteína CXCL1 o la expresión de un gen que codifica tal proteína, método que es útil para detectar o diagnosticar el cáncer urotelial.

La presente invención también se refiere un kit para diagnosticar o detectar un cáncer urotelial, kit que comprende una sustancia capaz de unirse a la proteína CXCL1 o a un gen que codifica dicha proteína.

Antecedentes de la invención

El "cáncer urotelial" es un término colectivo para el cáncer de vejiga, el cáncer de pelvis renal, el cáncer de uréter urinario y similares. Tales cánceres son provocados por la canceración de una célula epitelial transicional del tracto urinario y se considera que sus propiedades son comunes o están compartidas. El número de pacientes que padecen cáncer urotelial es el segundo más alto de entre los pacientes con cánceres urogenitales después del cáncer de próstata. Según el "Population Survey Report" de 2001 del Departamento de Estadísticas e Información del Ministerio de Salud, Trabajo y Bienestar Social de Japón, el número de pacientes con cáncer de vejiga ascendió a 9.765 varones y 3.243 mujeres, y el número de pacientes que fallecen anualmente en Japón por cáncer de vejiga es de 3.459 varones y 1.587 mujeres. Por otra parte, el número de pacientes con cáncer de pelvis renal o cáncer de uréter es notablemente inferior al correspondiente del cáncer de vejiga, siendo el número de pacientes que fallecieron por estos cánceres de, respectivamente, de 797 y 713 varones y mujeres en total.

Aunque no existen estudios sobre la prevención del cáncer de vejiga o de cualquier otro cáncer urotelial, a menudo el desarrollo del cáncer de vejiga se produce en personas de 50 años o de mayor edad, y la probabilidad de que los varones desarrollen dicho cáncer tiene una proporción 2 a 3 veces más alta que en el caso de las mujeres. Asimismo, los fumadores son 4 veces más susceptibles de desarrollar un cáncer de vejiga que los no fumadores. El cáncer de vejiga se suele clasificar como de dos tipos: esto es, cáncer superficial de vejiga y cáncer infiltrante de vejiga. Los tumores papilares superficiales son de malignidad relativamente baja y sobresalen en la cavidad interna de la vejiga (es decir la superficie interna de la vejiga), pero el grado de infiltración es poco profundo, y la superficie es papiliforme (como una coliflor) con troncos finos. Dicho cáncer puede ser tratado de forma endoscópica; sin embargo, se reproduce en las vejigas de la mitad o de más de la mitad de los pacientes. La profundidad de la invasión del cáncer puede alcanzar el nivel submucoso, aunque no alcanzaría la capa muscular de la vejiga. Por otra parte, el cáncer infiltrante es de malignidad alta, el grado de invasión es profundo, tiende a invadir la parte profunda de la pared de la vejiga y puede metastatizarse a otras partes del cuerpo. Por ello, con el fin de tratar el cáncer infiltrante se requiere un tratamiento que impone una carga para el cuerpo del paciente, tal como la extirpación de la vejiga, la utilización de un agente anticanceroso o radioterapia.

El síntoma más común del cáncer de vejiga es la hematuria indolora; sin embargo, los síntomas pueden ser similares a los de la cistitis, por ejemplo aumento de la frecuencia urinaria, dolor durante la micción o sensación de vaciar de forma incompleta la vejiga. El diagnóstico del cáncer de vejiga se lleva a cabo, por ejemplo, mediante un análisis de orina (diagnóstico citológico), fotografía de rayos X o diagnóstico endoscópico, sin embargo, debido a la falta de marcadores tumorales específicos y altamente sensibles que se puedan utilizar para la sangre o la orina y útiles para el diagnóstico temprano, con frecuencia el cáncer de vejiga se detecta después de que haya progresado. El cáncer urotelial que se desarrolla en sitios distintos de la vejiga tiene también las mismas propiedades. En consecuencia, se desea la aplicación práctica de un método de detección simple mediante la utilización de marcadores tumorales específicos y altamente sensibles para el cáncer urotelial y, en particular, para el cáncer de vejiga.

Se han propuesto diversos marcadores y métodos para la detección y determinación del cáncer de vejiga. Como ejemplos se incluyen métodos en los que el cáncer de vejiga se evalúa en base a los cambios en los niveles de expresión de genes tales como nucleofosmina/B23 (Publicación de Patente Japonesa (kokai) Nº 2004-337120 (A)), HUMP (Publicación de Patente Japonesa (kokai) Nº 2004-248508 (A)) o CYP4B1 o CYP4B2 (Publicación de Patente Japonesa (kokai) Nº 2002-238599 (A)); un método con el que se evalúa el cáncer de vejiga en base a la expresión o la cantidad de una determinada proteína en una muestra de orina (Publicación de Patente Japonesa (kokai) Nº 2004-61288 (A) y H7-309895 (1995) (A); y un método con el que se evalúa el cáncer de vejiga mediante la concentración de Fas soluble en sangre como indicador (Publicación de Patente Japonesa (kokai) Nº 2000-131321 (A)).

Descripción de la invención

La presente invención pretende describir un nuevo marcador tumoral para el cáncer urotelial y proporcionar un método para detectar eficazmente un cáncer urotelial, en particular el cáncer de vejiga.

Se han realizado estudios intensivos con el fin de alcanzar los objetos mencionados anteriormente. En consecuencia, hemos descubierto ahora que los cánceres uroteliales podrían ser significativamente detectados mediante la utilización de un anticuerpo capaz de unirse específicamente a un marcador tumoral, es decir, a la proteína CXCL1, o, como alternativa, un ácido nucleico capaz de unirse a un gen que codifica dicha proteína, un producto de transcripción del mismo, o el ADNc del mismo. Esto ha llevado a la realización de la presente invención.

Sumario de la invención

Específicamente, la presente invención incluye las siguientes invenciones.

1. Método para detectar un cáncer urotelial que comprende la medición de la proteína CXCL1 o la expresión de un gen que codifica la proteína, in vitro, en una muestra biológica procedente de un sujeto.

2. Método según la reivindicación 1, caracterizado porque se mide la cantidad de proteína o el nivel de expresión del gen.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque se utiliza como indicador el incremento significativo de la cantidad de proteína o del nivel de expresión del gen con respecto al de una muestra de control.

4. Método según la reivindicación 3, caracterizado porque el incremento es de al menos 2 veces.

5. Método según la reivindicación 3, caracterizado porque el incremento es de al menos 3 veces.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la medición se lleva a cabo por medio de un método inmunológico.

7. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque la medición se lleva a cabo por hibridación.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la medición se lleva a cabo mediante el uso de una sustancia capaz de unirse a la proteína o al gen.

9. Método según la reivindicación 8, caracterizado porque la sustancia capaz de unirse a la proteína es un anticuerpo o un fragmento del mismo.

10. Método según la reivindicación 8, caracterizado porque la sustancia capaz de unirse al gen es una sonda de ácido nucleico.

11. Método según la reivindicación 10, caracterizado porque la sonda de ácido nucleico comprende un ácido nucleico que se compone de la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en la SEQ ID NO:1 o un mutante del mismo, un ácido nucleico que se compone de una secuencia complementaria del mismo, un ácido nucleico que se hibridiza en condiciones astringentes al ácido nucleico, o un fragmento que comprende 15 o más nucleótidos continuos del mismo.

12. Método según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 11, caracterizado porque se etiqueta el anticuerpo o la sonda de ácido nucleico.

13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 8, 9 y 12, caracterizado porque la proteína se mide inmunológicamente en una muestra utilizando un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une específicamente a la proteína o a un fragmento de la misma, detectando así un cáncer urotelial, utilizando como indicador un incremento de la cantidad de proteína con respecto a la de un muestra de control.

14. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, 7, 8 y 10 a 12, caracterizado porque el nivel de expresión del gen se mide en la muestra por medio de una sonda, que es un ácido nucleico consistente en la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en la SEQ ID NO:1 o un mutante del mismo, un ácido nucleico que se compone de una secuencia complementaria del mismo, un ácido nucleico que se hibridiza en condiciones astringentes al ácido nucleico, o un fragmento que comprende 15 o más nucleótidos continuos del mismo, detectando así un cáncer urotelial utilizando como indicador el incremento del nivel de expresión del gen con respecto al de una muestra de control.

15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado porque el cáncer urotelial se selecciona de entre el grupo consistente en cáncer urotelial, cáncer de pelvis renal, cáncer de uréter y cáncer de tracto urinario.

16. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque la muestra es sangre, plasma, suero u orina.

17. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque la muestra es un tejido o una célula urotelial.

18. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 8, 9, 12, 13 y 15 a 17, caracterizado porque la proteína tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO:2 o un mutante de la misma.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, 7, 8, 10 a 12 y 14 a 17, caracterizado porque el gen tiene la secuencia de nucleótidos que se muestra en la SEQ ID NO:1 o un mutante del mismo.

20. Utilización de un kit que comprende un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une específicamente a la proteína CXCL1 o a un fragmento de la misma, o un derivado químicamente modificado del anticuerpo o fragmento del mismo, para diagnosticar un cáncer urotelial.

21. Utilización del kit según la reivindicación 20, caracterizada porque la proteína tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEQ ID NO:2 o un mutante de la misma.

22. Utilización del kit según la reivindicación 20 ó 21, caracterizada porque el fragmento de proteína comprende un epítopo que tiene al menos 8 aminoácidos.

23. Utilización del kit según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 22, caracterizada porque el cáncer urotelial se selecciona de entre el grupo consistente en cáncer de vejiga, cáncer de pelvis renal, cáncer de uréter y cáncer del tracto urinario.

24. Utilización del kit según una cualquiera de las reivindicaciones 20 a 23, caracterizada porque el anticuerpo o fragmento del mismo se une a un soporte de fase sólida.

25. Utilización del kit según cualquiera de las reivindicaciones 20 a 24, que comprende además un anticuerpo secundario etiquetado capaz de unirse al anticuerpo o un fragmento del mismo.

26. Utilización del kit según la reivindicación 25, caracterizada porque la etiqueta del anticuerpo secundario es una etiqueta enzimática, fluorescente o radioactiva.

27. Utilización de un kit que comprende un ácido nucleico consistente en la secuencia de nucleótidos tal como se muestra en la SEQ ID NO:1 o un mutante del mismo, un ácido nucleico consistente en una secuencia complementaria del mismo, un ácido nucleico que se hibridiza en condiciones astringentes al ácido nucleico, un fragmento que comprende 15 o más nucleótidos continuos del mismo, o un derivado químicamente modificado de uno cualquiera de los mismos, para diagnosticar un cáncer urotelial.

28. Utilización del kit según la reivindicación 27, caracterizada porque el ácido nucleico tiene la secuencia de nucleótidos que se muestra en la SEQ ID NO:1 o un mutante del mismo.

29. Utilización del kit según la reivindicación 27 ó 28, caracterizada porque el cáncer urotelial se selecciona de entre el grupo consistente en cáncer de vejiga, cáncer de pelvis renal, cáncer de uréter y cáncer del tracto urinario.

30. Utilización del kit según una cualquiera de las reivindicaciones 27 a 29, caracterizada porque el ácido nucleico se une a un soporte de fase sólida.

31. Utilización del kit según la reivindicación 30, caracterizada porque el soporte de fase sólida es un chip de ADN o un sustrato de microarrays.