INHIBIDORES DE JNK.

Un compuesto de fórmula (I): **Fórmula** en la que X es O, S, C(R4)2, SO, SO2, NR3, NR3-C(O)- o NR3-C(O)-O;

R1 es hidrógeno, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C3-10, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, o heterociclilo C3-10; estando dicho grupo R1 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, alcoxi C1-10, cicloalquilo C3-10, halo, hidroxi, oxo, CO2R5, arilo C3-10, heterociclilo C3-10, alquilo C1-6arilo C3-10, NR6 2 y en la que el grupo heterociclilo C3-10 puede estar sustituido opcionalmente además con alquilo C1-6; y R2 es un heterociclilo de 3-10 miembros; estando dicho grupo R2 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, CO2H heterociclilo C3-10, COheterociclilo C3-10, alquilo C1-6 heterociclilo C3-10, y en la que el grupo heterociclilo puede estar sustituido opcionalmente además con un grupo alquilo C1-6; en la que R3 es hidrógeno o alquilo C1-6; R4 es hidrógeno o alquilo C1-6; R5 es hidrógeno o alquilo C1-6; y R6 es hidrógeno o alquilo C1-6

La presente invención se refiere a nuevos compuestos, a su uso en la inhibición de quinasas c-Jun N-terminal, a su uso en medicina y particularmente en la prevención y/o tratamiento de trastornos neurodegenerativos relacionados con la apoptosis y/o la inflamación. La invención también proporciona procesos para la fabricación de dichos compuestos, composiciones que los contienen y procesos para la fabricación de dichas composiciones. 5

Las quinasas c-Jun N-terminal (referidas de aquí en adelante como "JNK") son miembros de la familia de proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK). JNK están implicadas en la respuesta a varios estímulos, incluyendo citoquinas proinflamatorias y estrés medioambiental. JNK, y JNK3 en particular, juegan un papel importante durante la muerte apoptótica de las células y por lo tanto se han implicado en varios trastornos incluyendo ictus, daño cerebral traumático y otras enfermedades neurodegenerativas tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de 10 Alzheimer y otras. Como la actividad de JNK es un regulador fisiológico de la actividad transcripcional AP-1, se espera que los inhibidores de JNK reduzcan la respuesta inflamatoria.

La apoptosis es una forma de muerte celular en la que la célula participa activamente en su propia destrucción en un proceso que implica una serie característica de cambios bioquímicos y morfológicos, que están regulados por genes de muerte celular específicos. La muerte celular apoptótica es un proceso que se ha observado en el sistema 15 nervioso en desarrollo de los mamíferos. En ratones, la inactivación por recombinación homóloga de genes que codifican proteínas que estimulan la apoptosis, tales como la proteína caspasa-3 o Bax, evita la muerte de células neuronales en desarrollo. La destrucción de genes que codifican supresores de la muerte celular tales como BcI-x, da lugar a una muerte de células neuronales incrementada. Existen evidencias crecientes de que la apoptosis juega un papel importante en la patología de enfermedades neurodegenerativas agudas y crónicas. Por ejemplo, en ratones 20 transgénicos que sobreexpresan la proteína anti-apoptótica BcI-2 en el sistema nervioso hay una disminución en el volumen de infarto después de una isquemia cerebral. De manera similar, la inyección del inhibidor de caspasa BAF reduce la muerte de células neuronales después de hipoxia/isquemia en ratas neonatales. Otro ejemplo es la atrofia muscular espinal (una enfermedad neuronal motora) en la que la pérdida de mutaciones de función en el gen SMN está asociada con la enfermedad. Datos recientes han mostrado que la proteína SMN de tipo salvaje se une a Bcl-2 y 25 coopera con ella para inhibir la apoptosis. Estos resultados sugieren que los inhibidores de la apoptosis neuronal podrían ser beneficiosos en el tratamiento de las enfermedades neurodegenerativas humanas. Existen evidencias crecientes de que la apoptosis neuronal es una característica patológica importante del ictus, daño cerebral traumático y otras enfermedades neurodegenerativas. Por lo tanto, la farmacoterapia usando inhibidores de la apoptosis neuronal puede proporcionar un beneficio terapéutico en las condiciones neurodegenerativas. 30

Varios grupos han estudiado los mecanismos de la muerte de células neuronales usando sistemas de cultivo celular in vitro y los resultados sugieren que en algunos sistemas el factor de transcripción c-Jun se activa por la eliminación de señales de supervivencia y estimula la muerte celular.

Los anticuerpos específicos para c-Jun protegieron a neuronas simpáticas de ratas sin NGF frente a la apoptosis. Se ha demostrado una neuroprotección análoga debida a la expresión de un mutante negativo dominante c-35 Jun, mientras que la sobreexpresión de la proteína c-Jun de tipo salvaje fue suficiente para inducir la apoptosis en presencia de NGF. Estus y colaboradores mostraron recientemente que ocurre un incremento en los niveles del ARN de c-Jun en neuronas corticales que sufren apoptosis después de tratamiento con péptido -amiloide. También se ha mostrado que se requiere c-Jun para la apoptosis en neuronas de los gránulos cerebelares desprovistas de señales de supervivencia. 40

c-Jun se activa por JNK, que fosforilan su dominio de activación transcripcional. En los seres humanos hay tres genes JNK: JNK1, JNK2 y JNK3. Los ARN que codifican JNK1 y JNK2 se expresan en muchos tejidos, incluyendo el cerebro, pero JNK3 está restringida al sistema nervioso y en un nivel menor el corazón y los testículos.

JNK se activan fuertemente en respuestas celulares a varios estrés tales como radiación UV, choque térmico, choque osmótico, agentes que dañan el ADN, y citoquinas proinflamatorias tales como TNF, IL-1 y otras. Los 45 reguladores más arriba de la vía de JNK incluyen quinasas tales como SEK1, MKK7 y MEKK1. Existe evidencia de que la actividad quinasa Jun se requiere para la apoptosis neuronal in vitro. La sobreexpresión de MEKK1 en neuronas simpáticas incrementó los niveles de proteína c-Jun y la fosforilación e indujo la apoptosis en presencia de NGF lo que indica que la activación de la vía de la quinasa Jun puede desencadenar la muerte de células neuronales. Se ha mostrado que la vía de la quinasa Jun es necesaria para la muerte de células PC12 diferenciadas desprovistas de NGF. 50 Además, el compuesto CEP-1347, que inhibe la vía c-Jun (más arriba de la quinasa Jun) protege a las neuronas motoras frente a la muerte celular inducida por la eliminación del factor de supervivencia.

En ratones homocigotos con inactivación génica de JNK3 (-/-), las convulsiones epilépticas y la muerte de neuronas CA3 del hipocampo inducidas por inyección de ácido kaínico se bloquearon. Esto indica que JNK3 está implicada en determinadas formas de muerte de células neuronales in vivo. También es un componente crítico de la 55 excitoxicidad mediada por GluR6. Además, los ratones JNK3 (-/-) parece que se desarrollan normalmente y que son viables lo que sugiere que JNK3 no es esencial para el desarrollo o viabilidad.

La fuerte inmunoreactividad nuclear de JNK3 en las neuronas CA1 cerebrales de pacientes con hipoxia aguda sugiere que JNK3 está implicada en la neurodegeneración relacionada con hipoxia. La hipoxia transitoria también puede desencadenar la apoptosis a través de la vía de señalización JNK en las neuronas cerebrales en desarrollo.

Además, la inmunoreactividad de JNK3 se colocaliza con las neuronas afectadas por la enfermedad de Alzheimer. Además, JNK3 está relacionada con la patología neurofibrilar de la enfermedad de Alzheimer. En particular, 5 JNK3 induce una fuerte fosforilación de la proteína precursora del amiloide (APP) afectando así su metabolismo en el estado patológico.

Los presentes inventores han proporcionado compuestos, que son inhibidores de las quinasas c-Jun N-terminal.

El primer aspecto de la invención se refiere por lo tanto a un compuesto de fórmula (I) como se ilustra a 10 continuación:

en la que X es O, S, C(R4)2, SO, SO2, NR3, NR3-C(O)- o NR3-C(O)-O;

R1 es hidrógeno, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C3-10, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, o heterociclilo C3-10; 15

estando dicho grupo R1 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, alcoxi C1-10, cicloalquilo C3-10, halo, hidroxi, oxo, CO2R5, arilo C3-10, heterociclilo C3-10, alquilo C1-6arilo C3-10, NR62 y en la que el grupo heterociclilo C3-10 puede estar sustituido opcionalmente además con alquilo C1-6;

y R2 es un heterociclilo de 3-10 miembros;

estando dicho grupo R2 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, CO2H heterociclilo C3-10, CO-20 heterociclilo C3-10, alquilo C1-6 heterociclilo C3-10, y en la que el grupo heterociclilo puede estar sustituido opcionalmente además con un grupo alquilo C1-6;

en la que R3 es hidrógeno o alquilo C1-6;

R4 es hidrógeno o alquilo C1-6;

R5 es hidrógeno o alquilo C1-6; y 25

R6 es hidrógeno o alquilo C1-6.

y las sales farmacéuticamente aceptables, y otros derivados biohidrolizables farmacéuticamente aceptables de éstos, incluyendo ésteres, amidas, carbamatos, carbonatos, ureidas, solvatos, hidratos, reactivos de afinidad o profármacos de éstos.

R1 es preferiblemente un grupo alquilo no ramificado que tiene 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono, un grupo 30 alquenilo o alquinilo no ramificado que tiene 2, 3, 4, 5 ó...

1. Un compuesto de fórmula (I):

en la que X es O, S, C(R4)2, SO, SO2, NR3, NR3-C(O)- o NR3-C(O)-O;

R1 es hidrógeno, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C3-10, cicloalquilo C3-10, cicloalquenilo C3-10, o 5 heterociclilo C3-10;

estando dicho grupo R1 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, alcoxi C1-10, cicloalquilo C3-10, halo, hidroxi, oxo, CO2R5, arilo C3-10, heterociclilo C3-10, alquilo C1-6arilo C3-10, NR62 y en la que el grupo heterociclilo C3-10 puede estar sustituido opcionalmente además con alquilo C1-6;

y R2 es un heterociclilo de 3-10 miembros; 10

estando dicho grupo R2 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-6, CO2H heterociclilo C3-10, CO-heterociclilo C3-10, alquilo C1-6 heterociclilo C3-10, y en la que el grupo heterociclilo puede estar sustituido opcionalmente además con un grupo alquilo C1-6;

en la que R3 es hidrógeno o alquilo C1-6;

R4 es hidrógeno o alquilo C1-6; 15

R5 es hidrógeno o alquilo C1-6; y

R6 es hidrógeno o alquilo C1-6.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es un grupo alquilo no ramificado que tiene 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono.

3. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es un grupo alquenilo o alquinilo no ramificado que 20 tiene 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono.

4. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R1 es un grupo cicloalquilo o arilo C5 o C6 sustituido opcionalmente con uno o más alquilo C1-4 o halógeno.

5. Un compuesto según la reivindicación 4, en el que el grupo arilo está sustituido en la posición orto o para.

6. Un compuesto según la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que R1 es fenilo. 25

7. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que R2 es un heterociclo de 5 miembros que comprende uno o más heteroátomos seleccionados de O, S o N.

8. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que R2 es un heterociclo de 5 miembros que comprende dos o más heteroátomos seleccionados de O, S o N.

9. Un compuesto según la reivindicación 7 o la reivindicación 8, en el que uno o más de los heteroátomos de 30 R2 están sustituidos con alquilo C1-6.

10. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que R2 es un heterociclo de 5 miembros seleccionado de furano, imidazol, imidazolina, imidazolidina, isoxazol, isotiazol, oxazol, oxadiazol, oxatiazol, oxatiazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, pirrol, tetrahidrofurano, tetrazol, tiofeno, tiadiazol, tiazol o triazol; en el que dicho heterociclo está sustituido opcionalmente con un grupo alquilo que tiene 1, 2, 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono. 35

11. Un compuesto según la reivindicación 10 en el que dicha sustitución opcional ocurre en uno o más de O, S o N en el heterociclo.

12. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10 en el que R2 está sustituido con un grupo

en el que R7 es un grupo alquilo o alquenilo C4 o C5, que, con el átomo de nitrógeno, forma un anillo de cinco o seis miembros, estando dicho grupò alquilo o alquenilo interrumpido opcionalmente con uno o más de O, S o NR10 en el que R10 es hidrógeno o un alquilo C1-6 y sustituido opcionalmente con alquilo C1-6.

13. Un compuesto de fórmula II 5

en el que R1 es arilo C3-8 o alquilo C1-10 sustituido opcionalmente con uno o más de halo o CO2R4;

en el que R4 es hidrógeno o alquilo C1-6,

R3 es hidrógeno o alquilo C1-6,

y R2 es un heterociclilo de 3-8 miembros sustituido opcionalmente con uno o más de alquilo C1-6. 10

14. Un compuesto según la reivindicación 13 en el que R1 es un alquilo ramificado que tiene 3, 4, 5 ó 6 átomos de carbono.

15. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14 seleccionado de

16. Una composición que comprende un compuesto como se ha definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1-15 en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

17. Una composición según la reivindicación 16 que comprende además uno o más agentes activos adicionales. 5

18. Una composición según la reivindicación 17 en la que dicho agente activo adicional es un agente antiinflamatorio.

19. Un proceso para la fabricación de una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 16-18, que comprende combinar un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15, con el vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. 10

20. Un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15, o una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 16-18, para uso en medicina.

21. Un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15, o una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 16-18, para inhibir JNK.

22. Un compuesto según la reivindicación 21 para inhibir JNK3 selectivamente. 15

23. Un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15, o una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 16-18, para uso en la prevención o tratamiento de un trastorno mediado por JNK.

24. Un compuesto o una composición según la reivindicación 23, en el que el trastorno es un trastorno neurodegenerativo, demencia, enfermedad inflamatoria, un trastorno de la apoptosis, enfermedad autoinmune, trastorno 20 destructor del hueso, trastorno proliferativo, cáncer, enfermedad infecciosa, alergia, daño por isquemia reperfusión, ataque al corazón, trastorno angiogénico, hipoxia orgánica, hiperplasia vascular, hipertrofia cardiaca, agregación de plaquetas inducida por trombina y/o una condición de prostaglandina endoperoxidasa sintasa 2.

25. Un compuesto o una composición según la reivindicación 24, en el que el trastorno neurodegenerativo es un trastorno neurodegenerativo de apoptosis y/o un trastorno neurodegenerativo de inflamación. 25

26. Un compuesto o una composición según la reivindicación 24 ó 25, en el que el trastorno neurodegenerativo es: demencia; enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Parkinson; Esclerosis Lateral Amiotrófica; enfermedad de Huntington; corea senil; corea de Sydenham; hipoglucemia; trauma de cabeza y médula espinal; daño de cabeza traumático; dolor agudo y crónico; epilepsia y convulsiones; demencia olivopontocerebelar; muerte de células neuronales; neurodegeneración relacionada con hipoxia; hipoxia aguda; toxicidad por glutamato; neurotoxicidad por 30 glutamato; isquemia cerebral; demencia en un paciente con meningitis y/o demencia en un paciente con neurosis; demencia cerebrovascular; o demencia en un paciente infectado con VIH o en el que el trastorno neurodegenerativo es una neuropatía periférica, incluyendo mononeuropatía, mononeuropatía múltiple o polineuropatía, como pueden encontrarse en la diabetes mellitus, enfermedad de Lyme o uremia; neuropatía periférica; enfermedad desmielinizante, leucodistrofias, o síndrome de Guillain-Barré; mononeuropatía múltiple secundaria a un trastorno vascular de colágeno; 35 mononeuropatía múltiple secundaria a sarcoidosis; mononeuropatía múltiple secundaria a una enfermedad metabólica; o mononeuropatía múltiple secundaria a una enfermedad infecciosa.

27. Un compuesto o una composición según la reivindicación 24, en el que el trastorno es trastorno inflamatorio del intestino delgado; bronquitis; asma; pancreatitis aguda; pancreatitis crónica; alergias de varios tipos; enfermedad de Alzheimer; enfermedad autoinmune tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, 40 glomerulonefritis, escleroderma, tiroiditis crónica, enfermedad de Graves, gastritis autoinmune, diabetes, anemia hemolítica autoinmune, neutropenia autoinmune, trombocitopenia, dermatitis atópica, hepatitis activa crónica, miastenia grave, esclerosis múltiple, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, psoriasis o enfermedad de injerto frente a anfitrión.

28. Uso de un compuesto como se ha definido en la reivindicación 1-15 en la fabricación de un medicamento para la prevención o tratamiento de un trastorno mediado por JNK, en el que el trastorno es un trastorno 45 neurodegenerativo, enfermedad inflamatoria, un trastorno de la apoptosis, particularmente apoptosis neuronal,

enfermedad autoinmune, trastorno destructor del hueso, trastorno proliferativo, cáncer, enfermedad infecciosa, alergia, daño por isquemia reperfusión, ataque al corazón, trastorno angiogénico, hipoxia orgánica, hiperplasia vascular, hipertrofia cardiaca, agregación de plaquetas inducida por trombina y/o una condición de prostaglandina endoperoxidasa sintasa 2.

29. Un ensayo in vitro o in silico para determinar la actividad de los compuestos como se ha definido en 5 cualquiera de las reivindicaciones 1-15, que comprende proporcionar un sistema para ensayar la actividad y ensayar la actividad de un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15.

30. Un ensayo según la reivindicación 29 en el que el ensayo es para la actividad inhibidora de JNK del compuesto.

31. Un ensayo según la reivindicación 30 en el que el ensayo es para la actividad inhibidora específica de 10 JNK3 del compuesto.

32. Un ensayo según la reivindicación 29, 30 ó 31, en el que el ensayo es un Ensayo de Centelleo por Proximidad (SPA) usando ATP radiomarcado, o es un ELISA.

33. Un método in vitro o in silico para inhibir la actividad o función de una JNK, particularmente JNK3, método que comprende exponer una JNK a un compuesto como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-15 o una 15 composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 16-27.

34. Un método según la reivindicación 33, que se realiza en un modelo de investigación.