PROCEDIMIENTO PARA INHIBICIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LOS OSTEOCLASTOS.

Un anticuerpo que se une a un polipéptido RANKL y antagoniza la interacción de RANK y RANKL para uso en la mejora de los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica en un paciente con mieloma múltiple

Procedimiento para inhibición de la actividad de los osteoclastos Campo técnico de la invención La presente invención se refiere general al campo de los receptores de las citocinas, y de manera más específica, a las parejas receptor/ligando de citocinas que tienen actividad reguladora de los osteoclastos. La invención pertenece a la actividad de un anticuerpo que se une a un polipéptido rankl y antagoniza la reacción de rank y rankl. Antecedentes de la invención RANK (Activador del receptor de NF-B) y su ligando (RANKL) son una pareja receptor/ligando recientemente descrita que juega un importante papel en una respuesta inmune. En los documentos US 6017729 y US 6242213 se describe la clonación de RANK y RANKL respectivamente. Se ha encontrado recientemente que RNAKL contiene una proteína denominada como osteoprotegerina (OPG), un miembro de la familia del Receptor del Factor de Necrosis Tumoral (TNFR). Yasuda y col. (Proc. Natl. Acad. Sci. 95:3597; 1998) por ejemplo clonaron la expresión de un ligando de OPG, que se denominó como factor inhibidor de la osteoclastogénesis. Lacey y col. (Cell 93:165; 1998) repitieron su trabajo. En ambos casos, el ligando que clonaron resultó ser idéntico a RANKL. El documento de Simonet y col., Cell, vol.89, pp.309-319 describe la clonación y la caracterización de la osteoprotegerina (OPG). El documento de Anderson y col., Nature, vol.390, pp.175-179 describe el uso de una fusión entre una IgFc y el dominio extracelular de RANK para identificar el Ligando de RANK (RANKL). El documento de Read R, J. Antimicrob. Chemother., vol. 41, Suppl. A, pp.65-69 descubre TNFR y anticuerpos contra TNF solubles como antagonistas de TNF. En la osteoclastogénesis, la interacción de un osteoblasto o célula estromal con un precursor osteoclástico conduce a la diferenciación del precursor en un osteoclasto. Se sabe que la OPG inhibe esta diferenciación. Se ha propuesto un modelo en el que RANKL en el osteoblasto o en la superficie de la célula estromal interactúa con un receptor específico sobre una superficie del osteoclasto progenitor, señalizando un episodio de diferenciación. OPG bloquea eficazmente la interacción de RANKL con un receptor sobre los osteoclastos progenitores in vitro, y se ha demostrado que mejora los efectos de la ovariectomía sobre la pérdida ósea en ratones. Sin embargo. Se sabe también que la OPG se une a otros ligandos de la familia TNF, lo que puede tener un efecto perjudicial sobre las actividades de dichos ligandos in vivo. Además, la presencia de otros ligandos que se unen a la OPG in vivo puede requerir elevadas dosificaciones de la OPG que se va a administrar con el fin de tener suficiente OPG soluble disponible para inhibir la osteoclastogénesis. De acuerdo con esto, existe una necesidad en la técnica de identificar factores solubles que se unan específicamente a RANKL e inhiban la capacidad de RANKL para inducir la osteoclastogénesis sin reaccionar con otros ligandos. Resumen de la invención La invención en su sentido más amplio es tal como se define en las reivindicaciones independientes. Las formas de realización preferidas son como se enumeran en las reivindicaciones dependientes. Descripción detallada de la invención La presente divulgación proporciona procedimientos asociados con el uso de un receptor novedoso, denominado como RANK (por activador del receptor de NF-B), que es un miembro de la superfamilia de receptores de TNF. RANK es una proteína transmembrana de Tipo I que tiene 616 restos de aminoácidos, que comprende un dominio extracelular, una región transmembrana y un dominio citoplásmico. RANKS interactúa con diversos Factores Asociados al Receptor de TNF (TRAF); que estimulan los resultados de RANK en la regulación en exceso del factor de transcripción NF-B, un factor de transcripción ubicuo que se utiliza lo más extensamente en células del sistema inmune. Se pueden preparar formas solubles del receptor y usarse para interferir con la transducción de la señal a través de RANK unido a membrana. La inhibición de la transducción de la señal medida por RANKL será útil para mejorar los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica en estados de enfermedad en los que existen demasiadas roturas de huesos. Entre los ejemplos de dichas dolencias se incluyen osteoporosis, enfermedad de Paget, cánceres que pueden metastatizar el hueso e inducir roturas de huesos (es decir, mieloma múltiple, cáncer de mama, algunos melanomas, véase también Mundy, C. Cancer Suppl. 80: 1546; 1997), y cánceres que no metastatizan necesariamente el hueso, pero dan como resultado una hipercalcemia y la pérdida de hueso (por ejemplo, carcinoma de células escamosas). Las formas solubles de RANK comprenden el dominio extracelular de RANK o uno de sus fragmentos que se une a 2   RANKL. Se pueden preparar proteínas de fusión de RANK para facilitar la preparación de RANK soluble. Entre los ejemplos de dichas proteínas de fusión se incluyen una proteína de fusión RANK/Fc, una proteína de fusión de un resto en cremallera (es decir, una cremallera de leucina), y diversas etiquetas que son conocidas en la materia. Se dan a conocer también en la invención otros antagonistas de la interacción de RANK y RANKL (es decir, anticuerpos dirigidos contra RANKL, moléculas pequeñas), tal como se define en las reivindicaciones. Estos y otros aspectos de la presente invención llegarán a ser evidentes tras referencia a la siguiente descripción detallada de la invención. Se identificó una inserción de ADNc parcial novedosa con un marco de lectura abierto previsto que tiene alguna similitud con CD40 y se usó para hibridar las manchas de colonias generadas a partir de una biblioteca de ADNc de una célula dendrítica (CD) que contenía los ADNc de longitud completa. La SEQ ID NO: 1 muestra los nucleótidos y la secuencia de aminoácidos de una proteína de longitud completa prevista. RANK es un miembro de la superfamilia de receptores de TNF; se asemeja mucho a CD40 en la región extracelular. RANK se expresa en las células epiteliales, algunas líneas de linfocitos B, y en linfocitos T activados. Sin embargo, su expresión en linfocitos T activados es tardía, aproximadamente cuatro días después de la activación Este curso temporal de la expresión coincide con la expresión de Fas, un conocido agente de la apoptosis. RANK puede actuar como una señal antiapoptótica, rescatando células que expresan RANK de la apoptosis tal como se sabe que hace CD40. Alternativamente, RANK puede confirmar una señal apoptótica en las circunstancias apropiadas, de nuevo, de manera similar a CD40. Es probable que RANK y su ligando jueguen un papel integral en la regulación de la respuesta inmune e inflamatoria. Se describe el aislamiento de un ADN que codifica RANK en el documento US 6017729. El documento US 6017729 describe algunas formas de RANK. RANK soluble comprende el péptido señal y el dominio extracelular (restos 1 a 213 de la SEQ ID NO: 2) o uno de sus fragmentos Alternativamente se puede sustituir un péptido señal diferente por el líder nativo, comenzando con el resto 1 y continuando a través de un resto seleccionado entre el grupo constituido por los aminoácidos 24 a 33 (inclusive) de la SEQ ID NO: 2. Además, los fragmentos del dominio extracelular proporcionarán también formas solubles de RANK. Se pueden preparar los fragmentos usando técnicas conocidas para aislar una porción deseada de la región extracelular, y se pueden preparar, por ejemplo, comparando la región extracelular con las de otros miembros de la familia de TNFR (de la cual RANK es un miembro) y seleccionando las formas similares a las preparadas para otros miembros de la familia. Alternativamente, se pueden usar sitios de restricción únicos o técnicas de la PCR que se conocen en la materia para preparar numerosas formas truncadas que se pueden expresar y analizar para la actividad. Otros derivados de las proteínas RANK incluyen conjugados covalentes o agregativos de las proteínas o de sus fragmentos con otras proteínas o polipéptidos, tales como mediante síntesis en cultivo recombinante como fusiones N terminales o C terminales. Por ejemplo, el péptido conjugado puede ser una secuencia polipeptídica señal (o líder) en la región N terminal de la proteína que dirige de manera traduccionalmente simultánea o después de la traducción la transferencia de la proteína desde su sitio de síntesis a su sitio de función en el interior o en el exterior de la membrana o de la pared celular (por ejemplo, el factor líder de levadura). La proteínas de fusión pueden comprender péptidos añadidos para facilitar la purificación o la identificación de las proteínas RANK y los homólogos (por ejemplo, poli-His). Se puede unir también la secuencia de aminoácidos de la proteína a un péptido de identificación tal como el descrito... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo que se une a un polipéptido RANKL y antagoniza la interacción de RANK y RANKL para uso en la mejora de los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica en un paciente con mieloma múltiple. 2. El anticuerpo para el uso tal como se reivindica en la reivindicación 1, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. 3. El anticuerpo para el uso tal como se reivindica en la reivindicación 1 o en la reivindicación 2, en el que la mejora en los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica disminuye la resorción ósea en exceso. 4. Uso de un anticuerpo que se une a un polipéptido RANKL y antagoniza la interacción de RANK y RANKL en la fabricación de un medicamente para mejorar los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica en un paciente con mieloma múltiple. 5. Uso, tal como se reivindica en la reivindicación 4, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. 6. Uso, tal como se reivindica en la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que la mejora en los efectos de la osteoclastogénesis y la actividad osteoclástica disminuye la resorción ósea en exceso. 19