DOMINIO 10FN3 PARA EL USO EN EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES ASOCIADAS A ANGIOGÉNESIS INAPROPIADA.

Dominio 10 Fn3 para el uso en el tratamiento de enfermedades asociadas a angiogénesis inapropiada Campo de la invención La presente invención se refiere a proteínas innovadoras que bloquean la patología y biología mediadas por la ruta VEGF-VEGFR para el uso en el tratamiento de ciertas afecciones asociadas a angiogénesis inapropiada. Introducción La angiogénesis es el proceso por el que se forman los nuevos vasos sanguíneos a partir de capilares preexistentes o vénulas postcapilares; es un componente importante de muchos procesos fisiológicos incluyendo la ovulación, desarrollo embrionario, reparación de heridas, y generación vascular colateral en el miocardio. La angiogénesis también es central para un número de afecciones patológicas tales como crecimiento tumoral y metástasis, retinopatía diabética, y degeneración macular. En muchos casos, el proceso comienza con la activación de células endoteliales vasculares existentes en respuesta a una variedad de citocinas y factores de crecimiento. En el cáncer, las citocinas liberadas del tumor y factores angiogénicos estimulan las células endoteliales vasculares mediante la interacción con receptores superficiales de células específicas. Las células endoteliales activadas secretan enzimas que degradan la membrana basal de los vasos, permitiendo la invasión de las células endoteliales en el tejido tumoral. Una vez situadas, las células endoteliales se diferencian para formar nuevas divisiones de vasos de vasos preexistentes. Los nuevos vasos sanguíneos proporcionan nutrientes al tumor, facilitando el crecimiento adicional, y también proporcionan una vía para la metástasis. Hasta la fecha, se han identificado numerosos factores angiogénicos, incluyendo el factor particularmente potente VEGF. VEGF fue inicialmente purificado a partir de los medios condicionados de células folículo estrelladas y de una variedad de líneas celulares. Más recientemente se ha identificado un número de homólogos estructurales y alternativamente formas unidas de VEGF. Las diversas formas de VEGF se unen como ligandos de alta afinidad a una serie de receptores VEGF (VEGFR). Los VEGFR son receptores de tirosina quinasa, muchos de los que son reguladores importantes de angiogénesis. La familia de VEGFR incluye 3 importantes subtipos: VEGFR-1, VEGFR- 2 (también conocido como Receptor del Dominio de Inserción Quinasa, "KDR", en seres humanos), y VEGFR-3. Entre las formas de VEGF, VEGF-A, VEGF-C y VEGF-D son conocidos por unirse y activar VEGFR-2. El VEGF, actuando a través de sus receptores afines, puede funcionar como un mitógeno endotelial especifico durante la angiogénesis. Además, existe evidencia sustancial de que VEGF y VEGFR son aumentados en afecciones caracterizadas por angiogénesis inapropiada, tales como cáncer. Como resultado, una gran cantidad de investigación se ha focalizado en la identificación de productos terapéuticos que reconozcan e inhiban VEGF o VEGFR. En vista de los roles que VEGF y VEGFR tienen en los trastornos sería deseable generar productos terapéuticos y formulaciones para tratar las afecciones asociadas a angiogénesis inapropiada. El documento WO2005/056764 describe polipéptidos de unión a VEGFR que comprenden un décimo dominio de fibronectina de tipo III ( 10 Fn3) y su uso en una afección caracterizada por angiogénesis inapropiada. Resumen de la invención ES 2 367 916 T3 La presente invención se refiere a un polipéptido para el uso en el tratamiento de una afección seleccionada de un trastorno autoinmune, un trastorno inflamatorio, una retinopatía, y un cáncer en el que el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en SED ID NO:4 y se une al VEGFR2 humano con una constante de disociación de 1µM o menos, en el que la administración del polipéptido da como resultado una concentración pico de entre 1 y 7 µM del polipéptido. En algunas realizaciones, el polipéptido es administrado por vía intravenosa previo a la administración subcutánea. Por ejemplo, una primera dosis inicial de saturación intravenosa administrada seguida por terapia de administración subcutánea. En algunas realizaciones, se administra menos que 2 ml de polipéptido en una única dosis. En algunas realizaciones, se administra menos que 1 ml de polipéptido en una única dosis En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía intravenosa al menos una vez, dos veces, o tres veces por semana. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía intravenosa una vez por semana. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía intravenosa una vez cada dos semanas. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía intravenosa menos que una vez cada dos semanas. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía subcutánea al menos una vez, dos veces, o tres veces por semana. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía subcutánea menos que una vez, dos veces, o tres veces por semana. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía subcutánea al menos una vez, dos veces, o tres veces por día. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía subcutánea dos veces 2 ES 2 367 916 T3 por día. En algunas realizaciones, el polipéptido se administra por vía subcutánea menos que una vez por día. La solicitud describe procedimientos para determinar una dosificación efectiva del polipéptido para la administración a un sujeto que tiene una afección asociada a angiogénesis inapropiada. El procedimiento comprende determinar primero la concentración plasmática basal de VEGF-A, administrar una dosificación del polipéptido al sujeto, determinar la concentración plasmática de VEGF-A en el sujeto después de la administración, y después ajustar la dosificación del polipéptido para lograr al menos un incremento del 20% en la concentración plasmática de VEGF-A en el sujeto respecto de la concentración plasmática basal de VEGF-A. En algunas realizaciones, la concentración plasmática de VEGF-A se determina al menos 2, 4, 6, 8, 12, o 24 horas después de la administración del polipéptido. En algunas realizaciones, la concentración plasmática de VEGF-A determinada es la concentración pico. En algunas realizaciones, la dosificación se ajusta para lograr al menos un incremento del 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% o más en la concentración plasmática de VEGF-A respecto de la concentración plasmática basal de VEGF-A. En algunas realizaciones, la dosificación se ajusta para lograr un incremento máximo en la concentración plasmática de VEGF-A respecto del valor basal. En algunas realizaciones, la concentración plasmática basal de VEGF-A se determina mediante la medición de la concentración plasmática de VEGF-A en un sujeto previo al comienzo de la terapia con polipéptido, es decir, antes de que al sujeto se le haya administrado alguna vez un polipéptido de la invención. En algunas realizaciones, la concentración basal se determina mediante la medición de la concentración plasmática de VEGF-A en un sujeto que pasa por terapia con polipéptido previo a la administración del polipéptido, por ejemplo, cuando el polipéptido ha alcanzado su nivel valle. En algunas realizaciones, la concentración basal se determina en base a la concentración plasmática promedio de VEGF-A en una población. En los procedimientos descritos más arriba, el polipéptido comprende un décimo dominio de fibronectina de tipo III ( 10 Fn3), comprendiendo el dominio 10 Fn3 (i) un bucle AB, un bucle BC, un bucle CD, un bucle DE, un bucle EF, y un bucle FG (ii) posee al menos un bucle seleccionado de bucle BC, DE, y FG con una secuencia de aminoácidos alterada respecto de la secuencia del bucle correspondiente del dominio 1oFn3 humano, y (iii) se une a VEGFR2 humano con una constante de disociación de 1 µM o menor. El polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada de SEC ID NO: 4 o SEC ID NO. 5. La solicitud describe procedimientos para determinar la eficacia de un polipéptido en el tratamiento de un sujeto que tiene una afección asociada a angiogénesis inapropiada, que comprende determinar la concentración plasmática basal de VEGF-A, administrar una dosificación del polipéptido al sujeto, determinar la concentración plasmática de VEGF-A en el sujeto después de la administración, y determinar la eficacia del polipéptido en base al cambio de la concentración plasmática basal de VEGF-A en comparación con la concentración plasmática de VEGF-A determinada después de la administración del polipéptido. En algunas realizaciones, la concentración plasmática de VEGF-A se determina al menos 2, 4, 6, 8, 12, o 24 horas después de la administración del polipéptido. En algunas realizaciones, la concentración plasmática de VEGF-A determinada es la concentración pico. En... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido para el uso en el tratamiento de una afección seleccionada de un trastorno autoinmune, un trastorno inflamatorio, una retinopatía, y un cáncer, comprendiendo el polipéptido la secuencia de aminoácidos expuesta en SEC ID NO 4 y se une a VEGFR2 humano con una constante de disociación de 1 µM o menor, en el que la administración del polipéptido da como resultado una concentración pico de entre 1 y 7 µM del polipéptido. 37 Figura 1 ES 2 367 916 T3 38 Figura 2 ES 2 367 916 T3 39 Figura 3 Figura 4 Vehículo ES 2 367 916 T3 Figura 5 Figura 6 ES 2 367 916 T3 41 Figura 7 Figura 8 ES 2 367 916 T3 42 Figura 9A Porcentaje por grupo para alcanzar 300m 3 Días Vehículo 1 mg/kg 5 mg/kg 30 mg/kg 60 mg/kg 120 mg/kg Figura 9B 0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 1 22,22 100,00 11,11 11,11 4 33,33 11,11 22,22 8 44,44 55,56 55,56 11 66,67 77,78 77,78 22,22 15 77,78 88,89 11,11 18 88,89 33,33 22 88,89 25 55,56 29 66,67 35 88,89 33,33 43 77,78 33,33 46 44,44 44,44 57 66,67 55,56 60 100,00 77,78 64 77,78 66,67 77,78 Porcentaje por grupo para alcanzar 1000mm 3 Días Vehículo 1 mg/kg 5 mg/kg 30 mg/kg 60 mg/kg 120 mg/kg 0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 22 22,22 25 22,22 29 55,56 11,11 35 77,78 22,22 39 55,56 43 66,67 33,33 46 55,56 11,11 50 77,78 ES 2 367 916 T3 64 77,78 55,56 22,22 0,00 0,00 43 Figura 10 ES 2 367 916 T3 predosis Día 3 Día 7 Día 12 44 Figura 11 Figura 12 ES 2 367 916 T3 Día 2 Día 4 Día Día 14 4 horas post-infusión Figura 13 Figura 14 ES 2 367 916 T3 46 Figura 15 Figura 16 ES 2 367 916 T3 47