PROCEDIMIENTO DE DIAGNOSIS IN VITRO POR EXAMEN DEL LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO PARA EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES DE DEMENCIA Y ENFERMEDADES NEUROINFLAMATORIAS.

Procedimiento de diagnosis in vitro por examen del líquido cefalorraquídeo para la detección,

para la determinación del grado de severidad y para la valoración evolutiva y la prognosis de enfermedades de demencia y de enfermedades neuroinflamatorias crónicas de etiología no infecciosa y para su ejecución dentro del marco de la diagnosis diferencial de enfermedades de demencia, estando las enfermedades de demencia seleccionadas de entre los miembros del grupo que comprende la demencia de Alzheimer (AD), la demencia con corpúsculos de Lewy (DLB), la demencia frontotemporal (FTD) y distintas formas de demencia vascular (VD); caracterizado por el hecho de que en una muestra del líquido cefalorraquídeo (CSF) de un paciente que padece de una enfermedad de demencia o una enfermedad neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa o con respecto al que se tiene la sospecha de que hay una enfermedad de este tipo se efectúa una determinación de la inmunorreactividad de procalcitonina (inmunorreactividad de PCT), y de una inmunorreactividad de PCT medida que es superior a un valor umbral típico de las personas de control sanas se sacan conclusiones con respecto a la existencia, a la evolución, al grado de severidad o al éxito de una terapia de la enfermedad de demencia o de la enfermedad neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa

La presente invención se refiere a un nuevo procedimiento de diagnosis in vitro por examen del líquido cefalorraquídeo para el diagnóstico de enfermedades de demencia y enfermedades neuroinflamatorias crónicas de etiología no infecciosa según la reivindicación 1. 5

Dentro del marco de la presente invención el concepto de “diagnóstico” (o “diagnosis”) se usa como concepto general para determinaciones médicas que según el estado clínico del paciente al que se le efectúa la determinación pueden estar basadas en distintos planteamientos y sirven en particular para la detección y la detección precoz, la determinación del grado de severidad y la valoración evolutiva, y también la valoración 10 evolutiva como acompañamiento a la terapia y la prognosis de la futura evolución de una enfermedad.

El procedimiento según la invención es un procedimiento de diagnosis in vitro por examen del líquido cefalorraquídeo. Se entiende por procedimiento de diagnosis por examen del líquido cefalorraquídeo un procedimiento que habitualmente se ejecuta dentro del marco 15 de la diagnosis de enfermedades neurológicas y en el que se efectúa la determinación de una característica del llamado líquido cefalorraquídeo (para el que se usa la abreviatura CSF, que viene del concepto técnico de “cerebrospinal fluid” en inglés) que como tal característica proporciona valiosa información a efectos diagnósticos. En el caso de la presente invención la característica específica es el contenido determinable por análisis 20 inmunodiagnóstico de una biomolécula en el CSF.

Las enfermedades que se diagnostican según la presente invención son en particular enfermedades de demencia presenil como las que se discuten más detalladamente más adelante en la presente solicitud, y otras enfermedades neuroinflamatorias crónicas de etiología no infecciosa. 25

Se califican de enfermedades de demencia (demencia) en general las enfermedades para las que una característica común es la pérdida de capacidades intelectuales adquiridas, y ante todo de la memoria, y del nivel de personalidad normal como consecuencia de lesiones cerebrales. Las enfermedades de demencia son enfermedades de carácter crónico que por regla general evolucionan con relativa lentitud. Si surgen fenómenos de 30 demencia en la mediana edad y antes de la edad avanzada, se les califica de enfermedades de demencia presenil, y entre las mismas se distinguen sobre la base de los síntomas y de las modificaciones cerebrales patológicas que se dan típicamente para las mismas en particular las siguientes cuatro enfermedades, o mejor dicho los siguientes cuatro grupos de enfermedades: 35

La demencia de Alzheimer (AD) (enfermedad de Alzheimer; Morbus Alzheimer) es la enfermedad de demencia neurodegenerativa más frecuente y constituye los 2/3 de todos los casos de demencia. La AD se distingue por tres importantes características patológicas: La formación de placas amiloides y de haces neurofibrilares, así como la pérdida de células nerviosas (para la sinopsis, véase 24; los datos de referencias de la 40 literatura que se dan en la descripción en forma de números se refieren a la lista de referencias de la literatura que se da a continuación de la descripción). Las placas amiloides constan de agregados extraneuronales de la proteína β-amiloide, mientras que los haces de neurofibrillas contienen principalmente proteína tau y neurofilamentos. Se presume que la formación de placas y de neurofibrillas es la causa de la necrosis de 5 células nerviosas.

Los síntomas más importantes de la AD son los crecientes trastornos de la capacidad de concentración y de la capacidad de razonamiento con irritabilidad relativamente persistente, yendo estos síntomas acompañados de otros trastornos menos específicos que dificultan la delimitación entre la AD y otras formas de demencia. 10

La demencia con corpúsculos de Lewy (dementia with lewy-bodies: DLB) es después de la demencia de Alzheimer la segunda causa más común de enfermedad demencial (11; 18). Neuropatológicamente la DLB está caracterizada por la aparición de los llamados corpúsculos de Lewy en el tronco cerebral y en la corteza. Estos corpúsculos de Lewy constan predominantemente de agregados de la proteína presináptica (α-sinucleina) y 15 ubiquitina. La patología de los corpúsculos de Lewy puede en distinta medida estar asociada a las modificaciones neuropatológicas típicas del Parkinson y del Alzheimer. Así, también en la DLB se produce la formación de beta-amiloide y de placas seniles, pero no se producen haces de neurofibrillas (para la sinopsis, véase 6). También en el cerebro de pacientes con Morbus Parkinson hay corpúsculos de Lewy, si bien en una distinta 20 distribución (para la sinopsis, véase 19).

Son síntomas centrales de DLB un trastorno cognitivo progresivo, episodios de confusión mental con un fluctuante estado de atención y de conciencia, el parkinsonismo, y frecuentes caídas y síncopes (desmayos de corta duración del tipo de un ataque) (17). La sensibilidad y especificidad de los criterios diagnósticos (17) presentan en todos los casos 25 una alta especificidad, pero en parte una muy baja sensibilidad. Esto significa que en la cotidianidad clínica a menudo no se diagnostica la DLB. En particular debe mejorarse adicionalmente la delimitación con respecto al Morbus Alzheimer.

La demencia frontotemporal (FTD) se denomina también enfermedad de Pick y supone aproximadamente el 20% de las enfermedades de demencia presenil. La FTD está en 30 parte condicionada genéticamente y se cuenta entre las llamadas tauopatías, que se distinguen por una sobreexpresión o subexpresión de un subtipo de proteína tau (34) o por la expresión de una proteína tau mutada (23). Neuropatológicamente se produce una atrofia local de la corteza frontal y/o temporal, así como de la substantia nigra y de los ganglios basales. Esto trae como consecuencia trastornos del habla diversamente 35 pronunciados, una modificación del carácter y excentricidades del comportamiento. En total la FTD es subdiagnosticada con una sensibilidad de un 93% para una especificidad de tan sólo un 23%, representando la AD el diagnóstico erróneo más frecuente (30).

Se agrupan bajo el concepto de demencia vascular (vascular dementia; VAD) enfermedades en las que es provocada una demencia debido a trastornos de la perfusión 40 en el cerebro. Hay distintos tipos de VAD, de los cuales la demencia con infartos múltiples (MID) y la VAD subcortical (también denominada enfermedad de Binswanger) representan las formas más frecuentes.

En el caso de la enfermedad de Binswanger se trata de una evolución demencial lentamente progresiva que patológicamente está caracterizada por lesiones 5 cerebrovasculares en la sustancia cerebral blanca. Clínicamente esto redunda en excentricidades del comportamiento tales como agitación, irritabilidad, depresión y euforia, así como en un ligero trastorno de la memoria (4).

La demencia con infartos múltiples se produce gradualmente como consecuencia de varias pequeñas apoplejías cerebrales, también llamadas ataques isquémicos transitorios 10 (TIA), que condujeron al perecimiento de tejido cerebral en la corteza y/o en áreas subcorticales (9). Las apoplejías cerebrales también pueden haber pasado totalmente desapercibidas, siendo la demencia en este caso la primera consecuencia perceptible. En caso de haber una MID, se produce una disminución escalonada de capacidades cognitivas, combinada con severas depresiones, saltos de humor y epilepsia. 15

Un diagnóstico de enfermedades de demencia se efectúa hoy en día preponderantemente sobre la base de exámenes neuropsicológicos y de la observación del desarrollo de la enfermedad y de su evolución, recurriendo a criterios de exclusión para determinadas formas de demencia. Estos exámenes dan en muchísimos casos resultados ambiguos que aclaran las cifras anteriormente mencionadas para las formas de demencia 20 subdiagnosticadas o los casos diagnosticados incorrectamente. Naturalmente, las modificaciones del cerebro típicas de enfermedad no pueden constatarse directamente en el paciente viviente, y los exámenes con aparatos médicos de las funciones cerebrales p. ej. mediante tomografía de rayos X o tomografía de resonancia magnética nuclear son laboriosos y caros. 25

Hay necesidad de métodos de examen complementarios que permitan un diagnóstico de demencia y que en particular también faciliten la distinción entre distintas formas de demencia con síntomas clínicos similares...

1.Procedimiento de diagnosis in vitro por examen del líquido cefalorraquídeo para la detección, para la determinación del grado de severidad y para la valoración evolutiva y la prognosis de enfermedades de demencia y de enfermedades neuroinflamatorias crónicas 5 de etiología no infecciosa y para su ejecución dentro del marco de la diagnosis diferencial de enfermedades de demencia, estando las enfermedades de demencia seleccionadas de entre los miembros del grupo que comprende la demencia de Alzheimer (AD), la demencia con corpúsculos de Lewy (DLB), la demencia frontotemporal (FTD) y distintas formas de demencia vascular (VD); caracterizado por el hecho de que en una muestra del líquido 10 cefalorraquídeo (CSF) de un paciente que padece de una enfermedad de demencia o una enfermedad neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa o con respecto al que se tiene la sospecha de que hay una enfermedad de este tipo se efectúa una determinación de la inmunorreactividad de procalcitonina (inmunorreactividad de PCT), y de una inmunorreactividad de PCT medida que es superior a un valor umbral típico de las 15 personas de control sanas se sacan conclusiones con respecto a la existencia, a la evolución, al grado de severidad o al éxito de una terapia de la enfermedad de demencia o de la enfermedad neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa.

2.Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que la inmunorreactividad de PCT se determina con ayuda de un inmunoensayo altamente 20 sensible para la determinación de PCT con una sensibilidad funcional de ensayo (FAS) mejor que la de 100 ng de PCT por l (100 ng/l o 100 pg/ml), y preferiblemente mejor que la de 10 ng/l.

3.Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2, caracterizado por el hecho de que se emplea como valor umbral para el diagnóstico de “sospecha de enfermedad 25 neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa” un valor medio determinado para personas de control sanas que está situado aproximadamente al nivel de 50 pg/ml.

4.Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por el hecho de que el inmunoensayo para la determinación de PCT para la medición de la inmunorreactividad de PCT es un inmunoensayo en sándwich en el que se usan dos 30 anticuerpos que se unen a aquellos segmentos del péptido PCT completo que en el procesamiento proteolítico de PCT con formación de calcitonina quedan situados en varios de los péptidos parciales de PCT formados o quedan situados en péptidos parciales de PCT que no comprenden la secuencia de calcitonina.

5.Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado por el hecho de que uno de los 35 anticuerpos se une a un segmento de la secuencia de calcitonina y el otro de los anticuerpos se une a un segmento de la secuencia de catacalcina, y de que al menos uno de ambos anticuerpos es un anticuerpo policlonal purificado por afinidad.

6.Procedimiento según la reivindicación 1, caracterizado por el hecho de que el procedimiento se ejecuta como procedimiento de diagnosis diferencial en el que los valores de inmunorreactividad de PCT medidos se ponen en relación con gamas de valores típicas de las distintas formas de demencia y se determina una probabilidad de 5 existencia de una de las posibles formas de demencia.

7.Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado por el hecho de que es ejecutado dentro del marco de una determinación multiparamétrica en la que se determina al mismo tiempo al menos otro parámetro bioquímico o fisiológico indicativo del respectivo cuadro de enfermedad, y en la que se obtiene un resultado de medición en 10 forma de un conjunto de al menos dos magnitudes de medición que se valora para la diagnosis de precisión de la enfermedad de demencia o de la enfermedad neuroinflamatoria crónica de etiología no infecciosa.

8.Procedimiento según la reivindicación 7, caracterizado por el hecho de que dentro del marco de la determinación multiparamétrica se determina además de la 15 inmunorreactividad de PCT al menos otro mediador de inflamación que se selecciona de entre los miembros de los grupos de los componentes de complemento, las citoquinas, las quimioquinas, los coagulantes de la sangre y los factores fibrinolíticos, las proteínas de fase aguda y los compuestos radicales.

9.Procedimiento según la reivindicación 7 u 8, caracterizado por el hecho de que la 20 determinación multiparamétrica se hace como determinación simultánea mediante un dispositivo de medición con tecnología de chips o un dispositivo de medición inmunocromatográfica.

10.Procedimiento según una de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado por el hecho de que la valoración del complejo resultado de medición de la determinación multiparámetrica 25 se hace con ayuda de un programa de ordenador.

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