ANTICUERPOS SELECCIONADOS Y PÉPTIDOS DE DURAMICINA QUE SE ENLAZAN A FOSFOLÍPIDOS ANIÓNICOS Y AMINOFOSFOLÍPIDOS Y SUS USOS EN EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES VIRALES Y DEL CÁNCER.

Un compuesto caracterizado porque comprende un inmunoconjugado antiviral que comprende un anticuerpo purificado o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo,

que se enlaza a un aminofosfolípido unido funcionalmente a un agente antiviral seleccionado del grupo formado por nucleósidos, inhibidores de la transcriptasa inversa nucleósida, inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleósida, inhibidores de proteasa, Amantadina, rimantadina, zanamivir y oseltamivir

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2003/021925.

Solicitante: BOARD OF REGENTS THE UNIVERSITY OF TEXAS SYSTEM.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 201 WEST SEVENTH STREET AUSTIN, TX 78701 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: THORPE, PHILIP, E., RAN, SOPHIA, SOARES,Melina,M.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 15 de Julio de 2003.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K39/395 SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L;   composiciones a base de jabón C11D). › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61K39/395C3
  • A61K47/48R
  • A61K47/48T4
  • C07K16/28A30
  • C07K16/44 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02;   proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra material no previsto.

Clasificación PCT:

  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61K45/06 A61K […] › A61K 45/00 Preparaciones medicinales que contienen ingredientes activos no previstos en los grupos A61K 31/00 - A61K 41/00. › Mezclas de ingredientes activos sin caracterización química, p. ej. compuestos antiflojísticos y para el corazón.
  • A61K47/48 A61K […] › A61K 47/00 Preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos utilizados, p. ej. portadores, aditivos inertes. › estando el ingrediente no activo químicamente unido al ingrediente activo, p. ej. conjugados polímero-medicamento.
  • A61P31/12 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › Antivirales.
  • C07K16/00 C07K […] › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.

Clasificación antigua:

  • A61K39/395 A61K 39/00 […] › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • C07K16/00 C07K […] › Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

PDF original: ES-2358730_T3.pdf

 

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Fragmento de la descripción:

Anticuerpos seleccionados y péptidos de duramicina que se enlazan a fosfolípidos aniónicos y aminofosfolípidos y sus usos en el tratamiento de infecciones virales y del cáncer.

La presente invención se refiere a los campos de la biología de los aminofosfolípidos y de fosfolípidos aniónicos, vasos sanguíneos de tumores e infecciones virales. Sorprendentemente proporciona nuevas composiciones, métodos y combinaciones para ser dirigidas a la vasculatura de tumores y para el tratamiento de cáncer, y para inhibir la entrada y diseminación viral y para el tratamiento de infecciones virales. La invención proporciona además cierto número de composiciones preferidas basadas en anticuerpos, inmunoconjugados y duramicina, que enlazan e inhiben los aminofosfolípidos y los fosfolípidos aniónicos para el uso en el tratamiento de cáncer, infecciones virales y enfermedades relacionadas.

La resistencia de las células de tumores a los agentes quimioterapéuticos representa un problema significativo en la oncología clínica. Otro problema principal que hay que abordar en el tratamiento de tumores, es el deseo de lograr una "aniquilación total de las células", es decir matar todas las células malignas conocidas como "clonogénicas" que tienen la capacidad de crecer en una forma no controlada y reemplazar cualquier masa de tumor que pueda ser removida mediante la terapia. A pesar de ciertos avances en el campo existen dos de las principales razones por las cuales muchas formas prevalecientes de cáncer humano resisten aún la intervención quimioterapéutica efectiva.

Debido al objetivo de desarrollar tratamientos que se enfoquen a una aniquilación total de las células, ciertos tipos de tumores han sido más susceptibles a la terapia que otros. Por ejemplo, los tumores de tejidos blandos, p. ej. los linfomas, y los tumores de la sangre y órganos formadores de la sangre, por ejemplo leucemias, han sido generalmente más sensibles a la terapia quimioterapéutica que los tumores sólidos tales como los carcinomas.

Una razón para la susceptibilidad de tumores blandos y tumores basados en sangre, a la quimioterapia, es la mayor facilidad de acceso del linfoma y de las células leucémicas, a la intervención quimioterapéutica. Dicho en forma simple es mucho más difícil que la mayoría de los agentes quimioterapéuticos lleguen a todas las células de una masa de tumor sólido que a los tumores blandos y a los tumores basados en sangre, y por lo tanto es mucho más difícil lograr una aniquilación total de las células. El incremento de la dosis de los agentes quimioterapéuticos la mayoría de las veces da por resultado efectos secundarios tóxicos, lo cual limita generalmente la efectividad de los agentes antitumorales convencionales.

Otra estrategia para el tratamiento de tumores es el uso de una "inmunotoxinas", en la cual se usa un anticuerpo de células antitumorales, para suministrar una toxina a las células tumorales. Sin embargo, en forma común con los enfoques quimioterapéuticos, la terapia con inmunotoxinas sufre también de algunas desventajas significativas cuando se aplica a tumores sólidos. Por ejemplo, las células negativas al antígeno o deficientes del antígeno pueden sobrevivir y volver a poblar el tumor o conducir a metástasis adicionales. Una razón adicional para la resistencia a los tumores sólidos a las terapias a base de anticuerpos, es que la masa del tumor es generalmente impermeable a los agentes macromoleculares tales como los anticuerpos y las inmunotoxinas. Tanto las distancias para la difusión física como la presión intersticial, dentro del tumor, son limitaciones significativas a este tipo de terapia.

Una estrategia de tratamiento mejorada es dirigirse a la vasculatura de los tumores sólidos. Dirigirse a los vasos sanguíneos de los tumores, en vez de a las células tumorales mismas, tiene ciertas ventajas porque es improbable que conduzca al desarrollo de células tumorales resistentes, y porque las células alcanzadas son fácilmente accesibles. Además, la destrucción de los vasos sanguíneos conduce a una amplificación del efecto antitumoral, ya que muchas células tumorales dependen de un solo vaso para obtener su oxígeno y nutrientes. Agentes dirigidos a la vasculatura (VTAs) ejemplares se describen en las patentes US 5,855,866, 5,965,132, 6,261,535, 6,051,230 y 6,451,312, que describen el suministro dirigido de agentes anticelulares y toxinas, a marcadores de la vasculatura de tumores.

Otra versión efectiva del enfoque de direccionamiento a la vasculatura es dirigirse a un factor de coagulación en un marcador expresado o adsorbido dentro de la vasculatura del tumor o estroma (Huang et al., 1997; patentes US 6,093,399, 6,004,555, 5,877,289, y 6,036,955). El suministro de coagulantes, en vez que toxinas, a la vasculatura de los tumores, tiene las ventajas adicionales de una inmunogenicidad reducida y aún menores riesgos secundarios tóxicos. Como se describe en la patente US 5,877,289, un factor de coagulación preferido para el uso en esos "coaguligandos" específicos para el tumor, es una versión truncada de la proteína humana inductora de la coagulación, el Factor de Tejido (TF), el principal iniciador de la coagulación de la sangre.

Recientemente los aminofosfolípidos fosfatidilserina (PS) y fosfatidiletanolamina (PE) fueron identificados como marcadores específicos de la vasculatura de tumores (Ran et al., 1998). Esto condujo al desarrollo de nuevos inmunoconjugados anti-PS y anti-PE para suministrar agentes anticelulares, toxinas y factores de coagulación, a los vasos sanguíneos de tumores (patente US 6,312,694). Además se encontró que anticuerpos no conjugados para el PS y PE ejercieron un efecto anticancerígeno sin la unión a un agente terapéutico, lo cual se conoció como el enfoque de "anticuerpo desnudo" aminofosfolípido, al direccionamiento y tratamiento vascular de tumores (patente US 6,406,693).

Aunque los métodos precedentes de direccionamiento a la vasculatura, con inmunoconjugados y aminofosfolípidos, representan avances significativos en el tratamiento de tumores, ciertas células tumorales periféricas pueden sobrevivir la destrucción generalizada del tumor causada por esas terapias. Estrategias antiangiogénicas que inhiben el desarrollo de nueva vasculatura a partir de vasos sanguíneos preexistentes y/o células totipotentes endoteliales circulantes, son contempladas entonces para el uso en combinación con el VTA, métodos de direccionamiento con coaguligando y aminofosfolípidos de las patentes US 5,855,866, 6,093,399, 6,312,694 y 6,406,693.

La angiogénesis juega un papel importante en los procesos fisiológicos, tales como en la embriogénesis, cicatrización de heridas y menstruación, pero se encuentra involucrada también en ciertos eventos patológicos tales como el crecimiento de tumores, artritis, psoriasis y retinotatía diabética (Ferrara, 1995). Como son aplicadas al tratamiento de tumores, las estrategias antiangiogénicas se basan en inhibir la proliferación de vasos geminales, generalmente en la periferia de un tumor sólido. Estas terapias son aplicadas principalmente para reducir el riesgo de micrometástasis o para inhibir el crecimiento adicional de un tumor sólido después de una intervención más convencional (tal como cirugía o quimioterapia).

Las patentes US 6,342,219, 6,524,583, 6,342,221 y 6,416,758 describen anticuerpos e inmunoconjugados que se enlazan al factor-A del crecimiento endotelial vascular (VEGF, anteriormente conocido como factor de permeabilidad vascular, VPF), un estimulante primario de la angiogénesis. Estos anticuerpos tienen la ventaja importante de inhibir el enlazamiento de VEGF únicamente a uno de los dos receptores primarios del VEGF. Bloqueando el enlazamiento del VEGF al VEGFR2, pero no al VEGFR1, estos anticuerpos tienen un perfil de seguridad mejorado, manteniendo efectos benéficos mediados por el VEGFR1, p. ej. en las funciones de macrófagos, osteoclastos y condroclastos.

Aunque los métodos precedentes han avanzado la técnica del tratamiento de tumores, todavía se busca el desarrollo de terapias dirigidas a la vasculatura, adicionales o alternativas. La identificación de nuevos marcadores de la vasculatura de los tumores es necesaria para expandir el número de opciones terapéuticas. El desarrollo de nuevos anticuerpos desnudos con propiedades anticancerosas, sería un avance particularmente importante ya que esto permite usar la misma porción de direccionamiento tanto como un producto terapéutico de un solo agente y como un agente dirigido a... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Un compuesto caracterizado porque comprende un inmunoconjugado antiviral que comprende un anticuerpo purificado o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo, que se enlaza a un aminofosfolípido unido funcionalmente a un agente antiviral seleccionado del grupo formado por nucleósidos, inhibidores de la transcriptasa inversa nucleósida, inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleósida, inhibidores de proteasa, Amantadina, rimantadina, zanamivir y oseltamivir.

2. Un compuesto caracterizado porque comprende un primer anticuerpo purificado que se enlaza a un aminofosfolípido, o a un fragmento de enlazamiento al antígeno o inmunoconjugado antiviral del mismo; y al menos un segundo agente antiviral distinto agente antiviral distinto seleccionado del grupo formado por nucleósidos, inhibidores de la transcriptasa inversa nucleósida, inhibidores de la transcriptasa inversa no nucleósida, inhibidores de proteasa, Amantadina, rimantadina, zanamivir y oseltamivir.

3. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza a la fosfatidiletanolamina.

4. El compuesto de la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza a la fosfatidilserina.

5. El compuesto de la reivindicación 4, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza a la fosfatidilserina y compite efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a la fosfatidilserina.

6. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza además al ácido fosfatídico, al fosfatidilinositol, al fosfatidilglicerol y a la cardiolipina, y compite efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a cada uno del ácido fosfatídico, fosfatidilinositol, fosfatidilglicerol y cardiolipina.

7. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza además a la fosfatidiletanolamina.

8. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo tiene substancialmente el mismo perfil de enlazamiento al fosfolípido que el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) tal como se presenta en la tabla 4.

9. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo tiene una afinidad por la fosfatidilserina al menos igual a la afinidad del anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) por la fosfatidilserina, tal como se presenta en la tabla 3.

10. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo tiene substancialmente el mismo perfil de enlazamiento al fosfolípido que el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545), tal como se presenta en la tabla 4, y tiene una afinidad por la fosfatidilserina al menos igual a la afinidad del anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) por la fosfatidilserina, tal como se presenta en la tabla 3.

11. El compuesto de la reivindicación 5, caracterizado porque el anticuerpo se prepara mediante un proceso que comprende inmunizar un animal con células endoteliales activadas y seleccionar del animal inmunizado un anticuerpo que se enlace a la fosfatidilserina y que compita efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a la fosfatidilserina.

12. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza a la fosfatidilserina tal como se determina por el siguiente protocolo ELISA:

- La placa de 96 pozos se recubre con fosfatidilserina (PS) de la siguiente manera:

- diluir la solución concentrada PS en n-hexano hasta 10 μg/μl y mezclar bien

- adicionar 50 μl a cada pozo y permitir que éste se evapore durante una hora

- adicionar 200 μl de solución reguladora de bloqueo a cada pozo, donde dicha solución reguladora de bloqueo es 10% suero de bovino disuelto en PBS, cubrir y mantener a temperatura ambiente durante 2 horas o durante toda la noche a 4ºC

- lavar la placa tres veces con PBS

- adicionar 100 μl/pozos del anticuerpo secundario (cabra, antiratón IgG-HRP u otro anticuerpo secundario apropiado) e incubar durante 1 hora a 37ºC.

- lavar la placa tres veces con PBS

- desarrollar el ELISA adicionando 100 μl de solución reveladora a cada uno de los pozos, revelar durante 10 minutos, luego adicionar 100 μl de solución de paro a cada placa y leer la OD a 490 nm.

- la solución reveladora consistente en 10 ml de 0.2 M Na2PO4, 10 ml de ácido cítrico 0.1 M y una tableta de 10 mg de OPD, y 10 μl de peróxido de hidrógeno

- la solución de paro es 0.18 M H2SO4.

13. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo.

14. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo es un diacuerpo scFv, Fv, Fab', Fab, un anticuerpo lineal o un fragmento de enlazamiento al antígeno F(ab')2 de un anticuerpo o una CDR, un fragmento univalente, un anticuerpo camelizado o de dominio sencillo.

15. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo humano, humanizado, en parte humano, quimérico, biespecífico, recombinante o manipulado por ingeniería o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo.

16. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo comprende al menos una primera región variable que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 4, o una variante o forma mutagenizada de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 4, en donde esa variante o forma mutagenizada mantiene el enlazamiento a la fosfatidilserina.

17. El compuesto de la reivindicación 16, caracterizado porque el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y una región variable de cadena ligera que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4.

18. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 4 a 15, caracterizado porque el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye residuos de aminoácidos de las regiones determinantes de complementariedad (CDRs) de las posiciones de aminoácidos 31-35 (CDR H1), 50-56 (CDR H2) y 95-102 (CDR H3) de la SEQ ID NO: 2; ó una región variable de cadena ligera que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 24-34 (CDR L1), 50-56 (CDR L2) y 89-97 (CDR L3) de la SEQ ID NO: 4.

19. El compuesto de la reivindicación 18, caracterizado porque el anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 31-35 (CDR H1), 50-56 (CDR H2) y 95-102 (CDR H3) de la SEQ ID NO: 2; y una región variable de cadena ligera que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 24-34 (CDR L1), 50-56 (CDR L2) y 89-97 (CDR L3) de la SEQ ID NO: 4.

20. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 3G4 depositado como ATCC PTA 4545.

21. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el anticuerpo ó el fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo de dicho compuesto recubre un compuesto de liposoma furtivo o PEGilado.

22. El compuesto de la reivindicación 21, caracterizado porque el liposoma furtivo o PEGilado contiene uno o más agentes terapéuticos.

23. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho compuesto es un compuesto farmacéuticamente aceptable.

24. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho compuesto contiene además un agente terapéutico adicional.

25. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, caracterizado porque dicho agente antiviral es un nucleósido, un inhibidor de la transcriptasa inversa o un inhibidor de proteasa.

26. El compuesto de la reivindicación 25, caracterizado porque dicho agente antiviral es cidofovir o AZT.

27. El compuesto de la reivindicación 25, caracterizado porque dicho agente antiviral es ribavirina.

28. Uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento o prevención de una enfermedad o infección viral.

29. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27, para su uso en terapias.

30. Un anticuerpo purificado que se enlaza a un aminofosfolípido, ó a un fragmento de enlazamiento al antígeno, ó a un inmunoconjugado viral de los mismos, ó compuesto, como se reivindica en la reivindicación 29, para su uso en el tratamiento o prevención de una enfermedad o infección viral.

31. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 30, caracterizado porque dicho anticuerpo se enlaza a fosfatidiletanolamina.

32. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 30, caracterizado porque dicho anticuerpo se enlaza a fosfatidilserina.

33. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 32, caracterizado porque dicho anticuerpo se enlaza a fosfatidilserina y compite efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a la fosfatidilserina.

34. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo además se enlaza a ácido fosfatídico, fosfatidilinositol; fosfatodilglicerol y cardiolipina y compite efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a cada ácido fosfatídico, fosfatidilinositol; fosfatodilglicerol y cardiolipina.

35. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo además se enlaza a fosfatidiletanolamina.

36. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo tiene substancialmente el mismo perfil de enlazamiento al fosfolípido que el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) tal como se presenta en la tabla 4.

37. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo tiene una afinidad por la fosfatidilserina al menos igual a la afinidad del anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) por la fosfatidilserina, tal como se presenta en la tabla 3.

38. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo tiene substancialmente el mismo perfil de enlazamiento al fosfolípido que el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545),tal como se presenta en la tabla 4, y tiene una afinidad por la fosfatidilserina al menos igual a la afinidad del anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) por la fosfatidilserina, tal como se presenta en la tabla 3.

39. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 33, caracterizado porque dicho anticuerpo se prepara mediante un proceso que comprende inmunizar un animal con células endoteliales activadas y seleccionar del animal inmunizado un anticuerpo que se enlace a la fosfatidilserina y que compita efectivamente con el anticuerpo monoclonal 3G4 (depositado como ATCC PTA 4545) para el enlazamiento a la fosfatidilserina.

40. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 32 a 39, caracterizado porque dicho anticuerpo se enlaza a la fosfatidilserina tal como se determina por el siguiente protocolo ELISA:

- La placa de 96 pozos se recubre con fosfatidilserina (PS) de la siguiente manera:

- diluir la solución concentrada PS en n-hexano hasta 10 μg/μl y mezclar bien

- adicionar 50 μl a cada pozo y permitir que éste se evapore durante una hora

- adicionar 200 μl de solución reguladora de bloqueo a cada pozo, donde dicha solución reguladora de bloqueo es 10% suero de bovino disuelto en PBS, cubrir y mantener a temperatura ambiente durante 2 horas o durante toda la noche a 4ºC

- lavar la placa tres veces con PBS

- adicionar 100 μl/pozos del anticuerpo secundario (cabra, antiratón IgG-HRP u otro anticuerpo secundario apropiado) e incubar durante 1 hora a 37ºC.

- lavar la placa tres veces con PBS

- desarrollar el ELISA adicionando 100 μl de solución reveladora a cada uno de los pozos, revelar durante 10 minutos, luego adicionar 100 μl de solución de paro a cada placa y leer la OD a 490 nm.

- la solución reveladora consistente en 10 ml de 0.2 M Na2PO4, 10 ml de ácido cítrico 0.1 M y una tableta de 10 mg de OPD, y 10 μl de peróxido de hidrógeno

- la solución de paro es 0.18 M H2SO4.

41. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 40, caracterizado porque dicho anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo.

42. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 41, caracterizado porque dicho anticuerpo es un diacuerpo scFv, Fv, Fab', Fab, un anticuerpo lineal o un fragmento de enlazamiento al antígeno F(ab')2 de un anticuerpo o una CDR, un fragmento univalente, un anticuerpo camelizado o de dominio sencillo.

43. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 42, caracterizado porque dicho anticuerpo es un anticuerpo humano, humanizado, en parte humano, quimérico, biespecífico, recombinante o manipulado por ingeniería o un fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo.

44. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 43, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende al menos una primera región variable que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 4, o una variante o forma mutagenizada de la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 4, en donde esa variante o forma mutagenizada mantiene el enlazamiento a la fosfatidilserina.

45. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 44, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 2 y una región variable de cadena ligera que incluye una región de secuencias de aminoácidos que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 4.

46. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 43, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye residuos de aminoácidos de las regiones determinantes de complementariedad (CDRs) de las posiciones de aminoácidos 31-35 (CDR H1), 50-56 (CDR H2) y 95-102 (CDR H3) de la SEQ ID NO: 2; ó una región variable de cadena ligera que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 24-34 (CDR L1), 50-56 (CDR L2) y 89-97 (CDR L3) de la SEQ ID NO: 4.

47. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 46, caracterizado porque dicho anticuerpo comprende una región variable de cadena pesada que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 31-35 (CDR H1), 50-56 (CDR H2) y 95-102 (CDR H3) de la SEQ ID NO: 2; y una región variable de cadena ligera que incluye residuos de aminoácidos de las CDRs de las posiciones de aminoácidos 24-34 (CDR L1), 50-56 (CDR L2) y 89-97 (CDR L3) de la SEQ ID NO: 4.

48. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 47, caracterizado porque dicho anticuerpo es el anticuerpo monoclonal 3G4 depositado como ATCC PTA 4545.

49. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 30 a 48, caracterizado porque dicho anticuerpo ó el fragmento de enlazamiento al antígeno del mismo de dicho compuesto recubre un compuesto de liposoma furtivo o PEGilado.

50. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, para su uso como se reivindica en la reivindicación 49, caracterizado porque dicho liposoma furtivo o PEGilado contiene uno o más agentes terapéuticos.

51. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 50, para su uso en la inhibición de la replicación viral.

52. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 50, para su uso en la inhibición de la diseminación viral.

53. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 52, para su uso en el tratamiento o prevención de una infección por CMV, RSV, hepatitis, influenza, VIH, herpes, paramixovirus o arenavirus.

54. Un anticuerpo purificado, fragmento de enlazamiento al antígeno, inmunoconjugado viral, ó compuesto, como se reivindica en cualquiera de las reivindicaciones 29 a 52, para su uso en el tratamiento o prevención de la hepatitis, influenza, SIDA, neumonía viral o enfermedad respiratoria o fiebre de Lassa.


 

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