ANTICUERPOS CONTRA MADCAM.

Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, o parte de unión a antígeno del mismo, comprendiendo dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno:

(a) las regiones variables de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEC ID Nº 30, 32 ó 34, sin las secuencias señal; y (b) las regiones variables de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEC ID Nº 26 ó 28, sin las secuencias señal

La invención se refiere a un anticuerpo humano mejorado específico para la molécula de adhesión celular adresina mucosa (MAdCAM).

La molécula de adhesión celular adresina mucosa (MAdCAM) es un miembro de la superfamilia de inmunoglobulinas de receptores de adhesión celular. Es una de las moléculas de adhesión implicadas en el reclutamiento de linfocitos a los tejidos cuando sea necesario, mediante su interacción con una molécula integrina sobre la superficie de los linfocitos.

Se ha demostrado que los anticuerpos que inhiben la unión de MAdCAM a su compañero de unión integrina, α4β7, por ejemplo anticuerpos anti-MAdCAM (por ejemplo, MECA-367; documento US 5.403.919, documento US 5.538.724) o anticuerpos anti-α4β7 (por ejemplo, Act-1; documento US 6.551.593 o Act-1 humanizado, también llamado MLN02, descrito en el documento WO 01/78779), pueden inhibir la extravasación de leucocitos en intestino inflamado, y por lo tanto pueden ser beneficiosos en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino.

Los anticuerpos anti-MAdCAM tales como MECA-367, sin embargo, no son terapéuticamente útiles en pacientes humanos; MECA-367 se une a MAdCAM de ratón, y no muestra mucha afinidad por la molécula MAdCAM humana. Además, siendo un anticuerpo de rata, conducirá a una respuesta inmune en pacientes humanos y por lo tanto no será adecuado para uso terapéutico. Se han descrito anticuerpos monoclonales de ratón, dirigidos contra MAdCAM humana (documento WO 96/24673), pero estos también tienen probabilidad de ser inmunogénicos en seres humanos. Recientemente, se han desarrollado anticuerpos anti-MAdCAM humana terapéuticamente útiles, completamente humanos, con especificidad y afinidad depuradas por MAdCAM humana y de primate y se han desvelado en el documento WO2005/067620.

Se sabe que incluso anticuerpos completamente humanos aún pueden conducir a una respuesta inmune en algunos pacientes, que probablemente se debe a secuencias en la región variable del anticuerpo. Los anticuerpos de la presente invención son modificaciones de los anticuerpos humanos anti-MAdCAM desvelados en el documento WO2005/067620, que probablemente son incluso menos propensos a cualquier problema de inmunogenicidad en pacientes humanos. Aspectos de la invención

Un aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, que comprende la región variable de la cadena ligera de 7.16.6_V, 7.16.6_S, o 7.16.6_VS (SEC ID Nº 30, 32, 34).

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente

a MAdCAM, que comprende la región variable de la cadena pesada de 7.16.6_L (SEC ID Nº 28).

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, que comprende la región variable de la cadena ligera de 7.16.6_V, 7.16.6_S, o 7.16.6_VS (SEC ID Nº 30, 32, 34) y la región variable de la cadena pesada de 7.16.6_L (SEC ID Nº 28).

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, siendo el anticuerpo un anticuerpo que comprende las regiones variables codificadas por las secuencias de ácido nucleico expuestas en las SEC ID Nº 25 ó 27 y las SEC ID Nº 29, 31, ó 33.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, siendo el anticuerpo un anticuerpo que comprende las regiones variables de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEC ID Nº 26 ó 28 y las SEC ID Nº 30, 32 ó 34, sin secuencias señal.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo, comprendiendo dicho anticuerpo:

una cadena pesada de la secuencia de aminoácidos de las SEC ID Nº 26 ó 28 y la

secuencia de aminoácidos de cadena ligera de las SEC ID Nº 30, 32 ó 34, sin las

secuencias señal.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención, en el que la lisina C-terminal de cadena pesada está escindida.

Otro aspecto de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención, que es un isotipo IgG2. Un aspecto adicional de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención, que es un isotipo IgG4. Un aspecto adicional de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención que comprende una cadena ligera κ. Un aspecto adicional de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención que comprende una cadena ligera λ. Un aspecto preferido de la invención es un anticuerpo monoclonal humano de la invención que es un isotipo IgG2 con una cadena ligera κ.

En este documento se describe un vector que comprende cualquiera de las secuencias de las regiones variables de las SEC ID Nº 1, 7, 9, 11, 15, 17, 19, 21, 27, 29, 31, 33, 35, ó 37 o cualquiera de las secuencias que codifican las regiones variables de las SEC ID Nº 2, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 22, 28, 30, 32, 34, 36 ó 38. Un aspecto adicional descrito es una célula huésped que comprende cualquiera de las secuencias de las regiones variables de las SEC ID Nº 1, 7, 9, 11, 15, 17, 19, 21, 27, 29, 31, 33, 35 ó 37, o cualquiera de las secuencias que codifican las regiones variables de las SEC ID Nº 2, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 22, 28, 30, 32, 34, 36 ó 38. La célula huésped puede ser una bacteria tal como E. coli, una levadura tal como Saccharomyces cerevisiae o Pichia pastoris, una célula vegetal, una célula de insecto, o una célula de mamífero. Más preferiblemente, la célula huésped es una célula de mamífero. Más preferiblemente, la célula huésped es una célula CHO o célula NS0.

Otro aspecto descrito es un procedimiento para producir el anticuerpo de la invención, que comprende cultivar una célula huésped que comprende cualquiera de las secuencias de las regiones variables de las SEC ID Nº 1, 7, 9, 11, 15, 17, 19, 21, 27, 29, 31, 33, 35 ó 37, o cualquiera de las secuencias que codifican las regiones variables de las SEC ID Nº 2, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 22, 28, 30, 32, 34, 36 ó 38, en condiciones en las que el anticuerpo se expresa, y recuperar el anticuerpo de la célula huésped o su sobrenadante de cultivo.

Otro aspecto descrito es un animal transgénico o una planta transgénica, que comprende cualquiera de las Otro aspecto descrito es un animal transgénico o una planta transgénica, que comprende cualquiera de las secuencias de las regiones variables de las SEC ID Nº 1, 7, 9, 11, 15, 17, 19, 21, 27, 29, 31, 33, 35 ó 37, o cualquiera de las secuencias que codifican las regiones variables de las SEC ID Nº 2, 8, 10, 12, 16, 18, 20, 22, 28, 30, 32, 34, 36 ó 38.

Un aspecto de la invención es el uso de los anticuerpos de la invención o una parte de unión a antígeno de los mismos para su uso como medicamento. Otro aspecto de la invención es el uso de los anticuerpos de la invención o una parte de unión a antígeno de los mismos para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones que implican la adhesión mediada por MAdCAM de los leucocitos. Otro aspecto de la invención es el uso de los anticuerpos de la invención o una parte de unión a antígeno de los mismos para el tratamiento de afecciones inflamatorias, tales como, aunque sin limitación, enfermedades inflamatorias del tracto gastrointestinal incluyendo enfermedad inflamatoria del intestino tal como enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa; enfermedad de divertículos, gastritis, enfermedad hepática, esclerosis primaria, colangitis esclerosante. Las enfermedades inflamatorias también incluyen, aunque sin limitación, enfermedad abdominal (incluyendo peritonitis, apendicitis, enfermedad del conducto biliar), mielitis transversa aguda, dermatitis alérgica (incluyendo piel alérgica, eccema alérgico, atopia cutánea, eccema atópico, dermatitis atópica, inflamación cutánea, eccema inflamatorio, dermatitis inflamatoria, piel con pulgas, dermatitis miliar, eccema miliar, piel con ácaros del polvo del hogar), espondilitis anquilosante (síndrome de Reiter), asma, inflamación de las vías aéreas, aterosclerosis, arteriosclerosis, atresia biliar, inflamación de vejiga; cáncer de mama, inflamación cardiovascular (incluyendo vasculitis, infartos reumatoides del pliegue ungleal, úlceras en las piernas, polimiositis, inflamación vascular crónica, pericarditis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica), pancreatitis, incluyendo pancreatitis crónica, inflamación perineural, enfermedad celíaca, colitis (incluyendo colitis amébica, colitis infecciosa,...

1. Un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a MAdCAM, o parte de unión a antígeno del mismo, comprendiendo dicho anticuerpo o parte de unión a antígeno:

(a) las regiones variables de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEC ID Nº 30, 32 ó 34, sin las secuencias señal; y

(b) las regiones variables de las secuencias de aminoácidos expuestas en las SEC ID Nº 26 ó 28, sin las secuencias señal.

2. El anticuerpo o parte de unión a antígeno del mismo de acuerdo con la reivindicación 1, comprendiendo dicho anticuerpo:

(a) la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de las SEC ID Nº 30, 32 ó 34, sin las secuencias señal y

(b) una secuencia de aminoácidos de cadena pesada de las SEC ID Nº 26 ó 28, sin las secuencias señal.

3. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en el que la lisina C-terminal de cadena pesada está escindida.

4. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, para su uso como medicamento.

5. Un anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

6. Uso del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.

7. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 5 o el uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad se selecciona entre enfermedad inflamatoria del intestino, fibrosis hepática, enfermedad de injerto contra huésped, uveítis.

8. El anticuerpo monoclonal o parte de unión a antígeno del mismo de la reivindicación 5 o el uso de la reivindicación 6, en el que la enfermedad inflamatoria del intestino es la enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa.

9. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o parte de unión a antígeno de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

5 10. Un ácido nucleico que codifica la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de las SEC ID Nº30,32 ó34.

11. Un vector que comprende cualquiera de las secuencias que codifican las regiones variables de las SEC ID Nº 30, 32 ó 34.

12. Una célula huésped que expresa el anticuerpo monoclonal de acuerdo con la reivindicación 1.

13. Un procedimiento para producir un anticuerpo que comprende cultivar una célula

15 huésped de la reivindicación 12 en condiciones en las que se expresa el anticuerpo, y recuperar el anticuerpo de la célula huésped o sus sobrenadante de cultivo.