ANTICUERPOS ANTI-CD154 (LIGANDO CD40) AGLICOSILADOS Y USOS DE LOS MISMOS.

Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, caracterizado por una modificacion en el sitio ligado a N conservado de los dominios CH2 de la parte Fc de dicho anticuerpo

Campo técnico de la invención [0001] La presente invención se refiere a anticuerpos anti-CD154 aglicosilados o derivados de anticuerpos de estos, que bloquean la interacción de moléculas de CD154 y CD40. Los métodos para producir los anticuerpos anti-CD154 aglicosilados y derivados de anticuerpos se describen en la presente. Los anticuerpos y derivados de anticuerpos de la presente invención son útiles en el tratamiento y prevención de enfermedades que involucran respuestas inmunes no deseables, y que están mediadas por interacciones CD154–CD40.

Antecedentes de la invención [0002] La generación de inmunidad humoral y mediada por células está orquestada por la interacción de células T auxiliares activadas con células presentadoras de antígeno ("APC") y células T efectoras. La activación de las células T auxiliares no es solo dependiente de la interacción del receptor de las células T específicas del antígeno ("TCR") con su ligando péptido cognado-MHC, sino que también requiere la unión coordinada y la activación por numerosas moléculas de adhesión celular y coestimuladoras [Salazar-Fontana, 2001]. [0003] Una molécula coestimuladora crítica es CD154 (también conocida como ligando de CD40, CD40L, gp39, T-BAM, Molécula Activadora de las Células T, TRAP), una proteína de transmembrana de Tipo II que se expresa de manera restringida temporalmente y dependiente de la activación sobre la superficie de las células T CD4+. CD154 también se expresa, después de la activación, en un subconjunto de células T CD8+, basófilos, mastocitos, eosinófilos, células citolíticas naturales, células B, macrófagos, células dendríticas y plaquetas. [0004] El contrarreceptor de CD154, CD40, es una proteína de membrana Tipo I que se expresa en forma constitutiva y general en la superficie de muchos tipos celulares, que incluyen los APC [Foy, 1996]. [0005] La señalización a través de CD40 por CD154 inicia una cascada de eventos que producen la activación de las células portadoras de CD40 y la activación óptima de las células T CD4+. Más específicamente, la interacción cognada entre CD154 y CD4 promueve la diferenciación de las células B en células secretoras del anticuerpo y células B de memoria [Burkly, 2001]. En forma adicional, la interacción de CD154CD40 promueve la inmunidad mediada por células a través de la activación de macrófagos y células dendríticas y la generación de células citolíticas naturales y linfocitos T citotóxicos [Burkly, 2001].

El papel crítico de CD154 en la regulación de la función de la respuesta inmune humoral y mediada por células ha provocado gran interés en el uso de inhibidores de esta vía para la inmunomodulación terapéutica [patente de Estados Unidos 5.474.771]. Como tal, se ha demostrado que los anticuerpos anti-CD154 son beneficiosos en una amplia variedad de modelos de respuesta inmune con otras proteínas terapéuticas o terapia génica, alergenos, autoinmunidad y trasplante [patente de Estados Unidos 5.474.771; Burkly, 2001]. [0007] Se ha demostrado que la interacción CD40-CD154 es importante en varias enfermedades autoinmunes inducidas experimentalmente, tales como artritis inducida por colágeno, encefalomielitis alérgica experimental ("EAE"), ooforitis, colitis, y nefritis lúpica inducida por fármacos. En forma específica, se ha demostrado que la inducción de enfermedades en todos estos modelos se puede bloquear con antagonistas de CD154 en el momento de la administración del antígeno [Burkly, 2001]. [0008] El bloqueo de la enfermedad usando antagonistas anti-CD154 también se ha observado en los modelos animales de enfermedad autoinmune espontánea, que incluyen diabetes dependiente de insulina y nefritis lúpica, así como en la enfermedad del injerto versus huésped, trasplante, fibrosis pulmonar, y modelos de enfermedad de aterosclerosis [Burkly, 2001]. [0009] Si bien se ha probado que los anticuerpos anti-CD154 glicosilados son útiles para la prevención y el tratamiento de varias enfermedades relacionadas con la respuesta inmune, en algunos sujetos, las terapias que los usan algunas veces están complicadas por la actividad tromboembolítica [Biogen Press Release, 2001; IDEC Press Release, 2001]. Si bien el mecanismo de este efecto secundario es desconocido, podría involucrar el coligamiento por el anticuerpo anti-CD154, o sus agregados, de FcγRIIa y CD154 sobre las plaquetas, que llevan a una activación de plaquetas inapropiada. La unión de otros receptores Fcγ y el complemento también podría potenciar este efecto. En consecuencia, las formas de los anticuerpos anti-CD154 que no se unen a los receptores efectores pueden ser más seguras y/o más efectivas para el uso terapéutico. [0010] El mecanismo por el cual los anticuerpos anti-CD154 inhiben la función inmune puede ser más complejo que la unión simple a CD154 para bloquear las interacciones con CD40 y, en efecto, puede incluir contribuciones por vías efectoras. Por ejemplo, la unión anticuerpo-antígeno puede inducir la supresión de las células T activadas a través del dominio de Fc de unión a receptores Fcγ o componentes del complemento. Alternativamente, la unión del anticuerpo al CD154 puede aumentar por la formación de un armazón de la superficie celular del anticuerpo sobre las células portadoras del receptor Fcγ. Además, el acceso del anticuerpo a su sitio de acción se puede promover por las interacciones de la unión del receptor Fcγ. [0011] En los anticuerpos glicosilados, que incluyen anticuerpos anti-CD154, los glicanos unidos al sitio N-ligado conservado en los dominios CH2 del dímero Fc se incluyen entre los dominios CH2, con los residuos azúcar que hacen contacto con residuos de aminoácidos específicos en el dominio CH2 opuesto [Jeffries, 1998]. Estudios in vitro con varios anticuerpos glicosilados han demostrado que la eliminación de los glicanos CH2 altera la estructura de Fc de modo que la unión del anticuerpo a los receptores Fc y la proteína del complemento C1Q se reduce mucho [Nose, 1983; Leatherbarrow, 1985; Tao, 1989; Lund, 1990; Dorai, 1991; Hand, 1992; Leader, 1991; Pound, 1993; Boyd, 1995]. Los estudios in vivo han confirmado la reducción de la función efectora de los anticuerpos aglicosilados. Por ejemplo, un anticuerpo aglicosilado anti-CD8 es incapaz de reducir las células portadoras de CD8 en ratones [Isaacs, 1992] y un anticuerpo aglicosilado anti-CD3 no induce el síndrome de liberación de citoquinas en ratones o seres humanos [Boyd, 1995; Friend, 1999]. [0012] Si bien la eliminación de los glicanos del dominio CH2 parece tener un efecto significativo sobre la función efectora, otras propiedades funcionales y físicas del anticuerpo permanecen inalteradas. En forma específica, se ha demostrado que la eliminación de los glicanos tuvo poco a ningún efecto sobre la vida media sérica y la unión al antígeno [Nose, 1983; Tao, 1989; Dorai, 1991; Hand, 1992; Hobbs, 1992].

Compendio de la invención [0013] De acuerdo con la presente invención, la función efectora de Fc involucrada en el mecanismo de acción de los anticuerpos anti-CD154 se dilucida mediante el uso de un anticuerpo anti-CD154 en el que la función efectora de Fc se ha reducido por una modificación del sitio ligado a N conservado de los dominios CH2 del dímero Fc, lo que produce los anticuerpos "aglicosilados" anti-CD154. Los ejemplos de tales modificaciones incluyen la mutación del sitio ligado a N conservado en los dominios CH2 del dímero de Fc, la eliminación de los glicanos del sitio ligado a N de los dominios CH2 y el impedimento de la glicosilación. Para averiguar si el mecanismo de inhibición con el anticuerpo anti-CD154 depende de sus interacciones efectoras de Fc, el anticuerpo anti-CD154 y su contraparte aglicosilada se compararon con respecto a su capacidad de inhibir varias enfermedades por medio del bloqueo de la interacción CD154-CD40. Los resultados informados en la presente demuestran que las formas aglicosiladas de un anticuerpo CD154 son igualmente protectoras que las formas glicosiladas del anticuerpo anti-CD154. [0014] Debido a que los anticuerpos anti-CD154 aglicosilados de la presente invención se caracterizan por la función efectora disminuida, estos anticuerpos son particularmente convenientes para usar en sujetos donde existe el potencial de actividad tromboembolítica no deseable. Adicionalmente, la reducción de la función efectora de Fc de los anticuerpos anti-CD154 aglicosilados puede reducir o eliminar otros efectos secundarios potenciales de las terapias con anticuerpo anti-CD154, tales como la supresión de células T activadas y otras poblaciones de células inducidas para expresar CD154 o la activación dependiente del Fc de los monocitos/macrófagos....

1. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, caracterizado por una modificación en el sitio ligado a N conservado de los dominios CH2 de la parte Fc de dicho anticuerpo.

2. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 1, en que la modificación comprende una mutación en el sitio de glicosilación de la cadena pesada, en el que la mutación impide la glicosilación en el sitio.

3. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 2, en el que la modificación comprende una mutación de N298Q (N297 usando la numeración EU de Kabat).

4. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 1, en el que la modificación comprende la eliminación de los glicanos del dominio CH2.

5. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 1, en el que la modificación comprende impedir la glicosilación en el dominio CH2.

6. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado no se une a un receptor del efector.

7. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado no causa trombosis.

8. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo primatizado, un anticuerpo humanizado, y un anticuerpo completamente humano.

9. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo se selecciona del grupo que consiste en: un anticuerpo multimérico, un anticuerpo heterodimérico, un anticuerpo hemidimérico, un anticuerpo tetravalente, y un anticuerpo biespecífico.

10. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo es hu5c8 aglicosilado producido por la línea celular que tiene Acceso ATCC Núm. PTA-4931.

11. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo está marcado con un marcador detectable.

12. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 11, en el que el marcador detectable es un isótopo radiactivo, enzima, colorante o biotina.

13. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se conjuga a un agente terapéutico.

14. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 13, en el que dicho agente terapéutico es un radioisótopo, radionucleido, toxina, toxoide o agente quimioterapéutico.

15. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se conjuga a un agente de visualización de imagen.

16. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 15, en el que el agente de visualización de imagen es un grupo de marcaje.

17. Anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según la reivindicación 15, en el que el agente de visualización de imagen es una biotina, un grupo fluorescente, un grupo radiactivo, una etiqueta de histidina, o una etiqueta de péptido.

18. Composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

19. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, que además comprende un portador farmacéuticamente aceptable.

20. Composición farmacéutica según la reivindicación 18, que además comprende un compuesto inmunosupresor o inmunomodulador.

21. Línea celular que produce el anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

22. Línea celular según la reivindicación 21, en la que la línea celular produce el hu5c8 aglicosilado (Acceso ATCC Núm. PTA-4931).

23. Uso de un anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o un derivado de anticuerpo antiCD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, o una composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo, para la

fabricación de un medicamento para inhibir una respuesta inmune, una respuesta inflamatoria, rechazo de trasplante, enfermedad del injerto versus huésped, una respuesta alérgica, una respuesta autoinmune, fibrosis, infección viral de las células T por el virus de HTLV I, enfermedad gastrointestinal, enfermedad vascular, o proliferación de células tumorales de células T, en un sujeto.

24. Uso según la reivindicación 23, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo o composición farmacéutica inhibe la unión de CD154 a CD40.

25. Uso según la reivindicación 23, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo o composición farmacéutica es capaz de unirse específicamente a una proteína que es reconocida específicamente por hu5c8 aglicosilado, que es producido por la línea celular que tiene Acceso ATCC Núm. PTA4931.

26. Uso según la reivindicación 23, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo o composición farmacéutica se une específicamente al epítopo al cual el hu5c8 aglicosilado (Acceso ATCC Núm. PTA-4931) se une específicamente.

27. Uso según la reivindicación 23, en el que la respuesta inflamatoria se selecciona del grupo que consiste en: artritis, dermatitis por contacto, síndrome de hiper-IgE, enfermedad intestinal inflamatoria, asma alérgico y enfermedad inflamatoria idiopática.

28. Uso según la reivindicación 27, en el que la artritis se selecciona del grupo que consiste en: artritis reumatoide, artritis inflamatoria no reumatoide, artritis asociada con enfermedad de Lyme y osteoartritis inflamatoria.

29. Uso según la reivindicación 27, en el que la enfermedad inflamatoria idiopática se selecciona del grupo que consiste en: psoriasis y lupus sistémico.

30. Uso según la reivindicación 23, en el que el rechazo de trasplante implica trasplante de corazón, riñón, hígado, piel, células del islote pancreático o médula ósea.

31. Uso según la reivindicación 23, en el que la respuesta alérgica se selecciona del grupo que consiste en: fiebre del heno o una alergia a la penicilina u otros fármacos.

32. Uso según la reivindicación 23, en el que la respuesta autoinmune deriva de una enfermedad infecciosa.

33. Uso según la reivindicación 23, en el que la respuesta autoinmune deriva del síndrome de Reiter, espondiloartritis, enfermedad de Lyme, infecciones por VIH, sífilis o tuberculosis.

34. Uso según la reivindicación 23, en el que la respuesta autoinmune se selecciona del grupo que consiste en: artritis reumatoide, miastenia grave, lupus eritematoso

sistémico, enfermedad de Graves, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia hemolítica, diabetes mellitus, enfermedad intestinal inflamatoria, enfermedad de Crohn, esclerosis múltiple, psoriasis, enfermedades autoinmunes inducidas por fármacos, y lupus inducido por fármaco.

35. Uso según la reivindicación 23, en el que la fibrosis se selecciona del grupo que consiste en: fibrosis pulmonar y enfermedad fibrótica.

36. Uso según la reivindicación 35, en el que la fibrosis pulmonar se selecciona del grupo que consiste en: fibrosis pulmonar consecuencia del síndrome de distrés respiratorio del adulto, fibrosis pulmonar inducida por fármacos, fibrosis pulmonar idiopática y neumonitis por hipersensibilidad.

37. Uso según la reivindicación 35, en el que la enfermedad fibrótica se selecciona del grupo que consiste en: Hepatitis C; Hepatitis B; cirrosis; cirrosis hepática consecuencia de un ataque tóxico; cirrosis hepática consecuencia de fármacos, cirrosis hepática consecuencia de una infección viral y cirrosis hepática consecuencia de una enfermedad autoinmune.

38. Uso según la reivindicación 23, en el que la enfermedad gastrointestinal se selecciona del grupo que consiste en: dismotilidad esofágica, enfermedad intestinal inflamatoria y escleroderma.

39. Uso según la reivindicación 23, en el que la enfermedad vascular se selecciona del grupo que consiste en: aterosclerosis o lesión de reperfusión.

40. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado o derivado del anticuerpo anti-CD154 aglicosilado se seleccionan del grupo que consiste en: un anticuerpo monoclonal, un anticuerpo policlonal, un anticuerpo murino, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo primatizado, un anticuerpo humanizado, y un anticuerpo completamente humano.

41. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado o derivado del anticuerpo anti-CD154 aglicosilado se selecciona del grupo que consiste en: un anticuerpo multimérico, un anticuerpo heterodimérico, un anticuerpo hemidimérico, un anticuerpo tetravalente, y un anticuerpo biespecífico.

42. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto por inyección intravenosa, subcutánea, intraperitoneal, intramuscular, intramedular, intraventricular, intraepidural, intraarterial, intravascular, intra-articular, intra-sinovial, intraesternal, intratecal, intrahepática, intraespinal, intratumoral,

intracraneal; por una vía de administración entérica, intrapulmonar, transmucosa, intrauterina, o sublingual; o en forma local en los sitios de inflamación o crecimiento tumoral.

43. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto por una vía seleccionada del grupo que consiste en: vías oral, nasal, oftálmica, rectal y tópica.

44. Uso según la reivindicación 43, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto por vía oral en la forma de cápsulas, comprimidos, suspensiones o soluciones acuosas.

45. Uso según la reivindicación 43, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto en forma tópica por la aplicación de una crema, ungüento o similares.

46. Uso según la reivindicación 43, en el que el anticuerpo anti-CD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto por inhalación mediante el uso de un nebulizador, un inhalador del polvo seco o un inhalador de dosis medida.

47. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto por administración por liberación sostenida.

48. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto junto con un agente terapéutico.

49. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto en múltiples dosis por día.

50. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición

farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto de forma repetida en intervalos que varían desde cada día a cada dos meses.

51. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende dicho anticuerpo o derivado de anticuerpo se administra a dicho sujeto en intervalos durante el tiempo que sea indicado médicamente, que varía de días o semanas a toda la la vida del sujeto.

52. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 23 a 39, en el que el anticuerpo antiCD154 aglicosilado, derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado o composición farmacéutica que comprende el anticuerpo o derivado de anticuerpo es administrado al sujeto con un compuesto inmunomodulador o inmunosupresor.

53. Uso según la reivindicación 52, en el que el compuesto inmunomodulador o inmunosupresor se selecciona del grupo que consiste en:

(a) un agente que interrumpe la señalización coestimuladora de las células T por medio del CD28;

(b) un agente que interrumpe la señalización de calcineurina,

(c) un corticosteroide,

(d) un agente antiproliferativo; y

(e) un anticuerpo que se une específicamente a una proteína expresada en la superficie de las células inmunes, que incluyen pero sin limitación CD45, CD2, IL2R, CD4, CD8 y RANK FcR, B7, CTLA4, TNF, LTP, y VLA-4.

54. Uso según la reivindicación 52, en el que el compuesto inmunosupresor o inmunomodulador se selecciona del grupo que consiste en: tacrolimus, sirolimus, micofenolato de mofetilo, mizorribina, desoxiespergualina, brequinar sódico, leflunomida, rapamicina y azaspirano.

55. Uso del anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la fabricación de una composición para usar en un método para examinar por imagen células tumorales o células neoplásicas en un sujeto que expresa una proteína que es reconocida específicamente por el hu5c8 aglicosilado producido por la línea celular que tiene Acceso ATCC Núm. PTA-4931, comprendiendo dicho método las etapas de:

(a) administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición en condiciones que permiten la formación de un complejo entre el anticuerpo o el derivado de anticuerpo y una proteína en la superficie de las células tumorales o células neoplásicas; y

(b) visualizar por imagen cualquier complejo de anticuerpo/proteína o derivado de anticuerpo/complejo formado, visualizando de este modo cualquiera de las células tumorales o células neoplásicas en el sujeto.

56. Uso del anticuerpo o derivado de anticuerpo anti-CD154 aglicosilado según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, para la fabricación de una composición para usar en un método para detectar la presencia de células tumorales o células neoplásicas en un sujeto que expresa una proteína que es reconocida específicamente por el hu5c8 aglicosilado producido por la línea celular que tiene Acceso ATCC Núm. PTA-4931, comprendiendo dicho método las etapas de: (a) administrar al sujeto una cantidad efectiva de la composición en condiciones que permiten la formación de un complejo entre el anticuerpo o el derivado de anticuerpo y la proteína;

(b) eliminar cualquier agente de imagen no unido del sujeto; y

(c) detectar la presencia de cualquier complejo anticuerpo/ proteína o derivado de

15 anticuerpo/complejo formado, indicando la presencia de tal complejo la presencia de las células tumorales o células neoplásicas en el sujeto.