Péptidos de neublastina para su uso en el aumento de la vascularización en tejido con flujo sanguíneo deteriorado.

Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 % idéntica a los aminoácidos 15-113 de SEC ID Nº:

1, y en el que el polipéptido, cuando se dimeriza, se une con un complejo que contiene GFRalfa3 y RET, para su uso en el aumento de la vascularización en un tejido en un mamífero que muestra flujo sanguíneo deteriorado o inadecuado en el tejido, en el que:

a) el mamífero tiene una enfermedad isquémica;

b) el mamífero tiene una enfermedad cardiovascular;

c) el mamífero ha recibido un órgano trasplantado;

d) el tejido se localiza en una extremidad del mamífero y el mamífero tiene diabetes; o

e) el tejido comprende una lesión cutánea asociada con una úlcera diabética.

Pïptidos de neublastina para su uso en el aumento de la vascularizaciïn en tejido con flujo sanguïneo deteriorado Campo tïcnico La invenciïn se refiere a quïmica proteica, biologïa molecular y biologïa vascular.

Antecedentes La neublastina, tambiïn conocida como artemina y enovina, es una proteïna secretada, homodimïrica de 24 kDa que promueve la extensiïn y supervivencia de neuronas en el sistema nervioso central y perifïrico (Baudet et al., 2000, Development, 127: 4335; Masure et al., 1999, Eur. J. Biochem., 266: 892; Rosenblad et al., 2000, Mol. Cell Neurosci., 15 (2) : 199) . El ARNm de neublastina se expresa predominantemente en riïïn y pulmïn embrionario, y en adultos se expresa mïs en la glïndula hipïfisis, trïquea y placenta (Baudet et al., 2000, Development, 127: 4335) .

La neublastina es un miembro de la familia de ligandos del factor neurotrïfico derivado de lïnea celular glial (GDNF) . Los ligandos GDNF activan tanto Ras como las vïas de transducciïn de seïal de fosfatidilinositol-3-quinasa interaccionando con la tirosina quinasa receptora c-RET unida a membrana. Esta seïalizaciïn mediada por c-RET requiere un co-receptor adicional, una proteïna de receptor alfa de la familia GDNF (GFR!) anclado a glicosilfosfatidilinositol (GPI) , que confiere especificidad al ligando a c-RET. Se han identificado cuatro proteïnas de co-receptores GFR! (GFR!1-4) . La neublastina muestra la mayor afinidad por GFR!3 in vitro, sin embargo en estudios que usan fibroblastos humanos, la neublastina puede estimular la seïalizaciïn dependiente de c-RET mediante GFR!3 o GRF!1 (Baudet et al., 2000, Development, 127: 4335; Masure et al., 1999, Eur. J. Biochem. 266: 892; Rosenblad et al., 2000, Mol. Cell Neurosci., 15 (2) : 199) .

La neublastina y los otros miembros de la familia GDNF son miembros de la sïper familia del factor de crecimiento transformante beta (TGF beta) y por lo tanto se caracterizan por la presencia de siete restos de cisteïna conservados con separaciïn similar que forman la estructura de un nudo de cisteïna (Saarma, 1999, Microsc. Res. Tech., 45: 292) . Cada monïmero contiene dos enlaces disulfuro que forman una estructura en bucle cerrado que rodea el tercer disulfuro para formar una estructura de nudo estrecho. La sïptima cisteïna contenida dentro de cada monïmero forma un enlace disulfuro intermolecular, que une covalentemente los monïmeros para formar el producto dimïrico final (Rattenholl et al 2000, J. Mol. Biol., 305: 523) .

Sumario La presente invenciïn, se basa, al menos en parte, en el descubrimiento de que la administraciïn de neublastina a un mamïfero promueve la neovascularizaciïn y aumento de flujo sanguïneo a tejido muscular isquïmico despuïs de oclusiïn arterial.

En un aspecto, la invenciïn presenta un mïtodo para aumentar la vascularizaciïn en un tejido, incluyendo dicho mïtodo las siguientes etapas: seleccionar un mamïfero que muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado en un tejido (por ejemplo, un tejido isquïmico tal como un tejido muscular isquïmico) ; y administrar al mamïfero una cantidad de un polipïptido eficaz para aumentar la vascularizaciïn en el tejido, en el que el polipïptido contiene una secuencia de aminoïcidos que es el al menos el 80 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1, y en el que el polipïptido, cuando se dimeriza, se une con un complejo que contiene GFRalfa3 y RET. Tambiïn se desvela el uso de un polipïptido que contiene una secuencia de aminoïcidos que es al menos el 80 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1, en el que el polipïptido, cuando se dimeriza, se une con un complejo que contiene GFRalfa3 y RET para la preparaciïn de una composiciïn farmacïutica para aumentar la vascularizaciïn en un tejido de un mamïfero que muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado.

La secuencia de aminoïcidos contenida en el polipïptido de los mïtodos y usos descritos en el presente documento puede ser opcionalmente al menos 90 % idïntica (por ejemplo, al menos 95 % o 98% idïntica) a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1. El polipïptido contiene o consiste en los aminoïcidos 10-113 de SEC ID Nï: 1, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 2, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 3, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 4, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 5, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 8 o los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 9. Por ejemplo, el polipïptido puede contener o consistir en la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 1, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 2, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 3, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 4, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 5, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 8 o la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 9.

El polipïptido puede administrarse al mamïfero, por ejemplo, mediante administraciïn sistïmica (por ejemplo, administraciïn subcutïnea o intravenosa) o administraciïn local.

El tejido que tiene flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado puede localizarse opcionalmente en una extremidad (por ejemplo, manos o pies) del mamïfero. El tejido que tiene flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado contiene una

lesiïn cutïnea (por ejemplo, una lesiïn cutïnea asociada con una ïlcera diabïtica, tal como una ïlcera diabïtica del pie) .

El mamïfero tratado de acuerdo con los mïtodos y usos descritos en el presente documento puede ser, por ejemplo, un ser humano, un ratïn, una rata, una vaca, un cerdo, un perro, un gato o un mono.

En algunos aspectos de los mïtodos y usos descritos en el presente documento, el corazïn del mamïfero muestra flujo sanguïneo deteriorado y la administraciïn del polipïptido aumenta la vascularizaciïn del corazïn, el mamïfero ha padecido un ictus y muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado en el tejido como resultado del ictus, el mamïfero ha padecido un infarto de miocardio y muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado en el tejido como resultado del infarto de miocardio, el mamïfero tiene una enfermedad de las arterias coronarias y muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado en el tejido como resultado de la enfermedad de las arterias coronarias, y/o el mamïfero ha recibido un ïrgano trasplantado (por ejemplo, un corazïn o dermis) y la administraciïn del polipïptido aumenta la vascularizaciïn en el ïrgano trasplantado.

Un mamïfero tratado de acuerdo con los mïtodos y usos descritos en el presente documento puede tener una enfermedad o trastorno tal como una enfermedad isquïmica, una enfermedad cardiovascular y/o diabetes.

Los mïtodos y usos descritos en el presente documento pueden incluir ademïs administrar al mamïfero uno o mïs de un agente antitrombïtico, un factor distinto de neublastina que aumenta la vascularizaciïn, un agente reductor del colesterol, un beta bloqueador, un agente anti-hipertensor o un agente inmunosupresor.

Los mïtodos y usos descritos en el presente documento pueden incluir ademïs determinar si se ha producido vascularizaciïn aumentada despuïs de la administraciïn del polipïptido.

En algunos aspectos de los mïtodos y usos descritos en el presente documento, no se ha diagnosticado al mamïfero un trastorno neurolïgico y/o no se le ha diagnosticado un trastorno ocular.

A no ser que se defina de otro modo, todos los tïrminos tïcnicos y cientïficos usados en el presente documento tienen el mismo significado que se entiende habitualmente por un experto habitual en la materia. Aunque pueden usarse mïtodos y materiales similares o equivalentes a los descritos en el presente documento en la prïctica o ensayo, los mïtodos y materiales ejemplares se describen posteriormente.

Otras caracterïsticas y ventajas resultarïn evidentes a partir de la siguiente descripciïn detallada y de las reivindicaciones.

Breve descripciïn de los dibujos La Figura 1 es un alineamiento de polipïptidos de pre pro neublastina de tipo silvestre humana (SEC ID Nï: 10) , de ratïn (SEC ID Nï: 11) y de rata (SEC ID Nï: 12) . Las lïneas verticales izquierda y derecha indican, respectivamente, el inicio de las formas maduras de 113 aminoïcidos y 104 aminoïcidos. El motivo de uniïn a heparina RRXR estï encuadrado. La Figura 2 es una grïfica de barras que representa el efecto de la administraciïn de neublastina en vascularizaciïn post-isquïmica en las extremidades posteriores del ratïn. El eje Y corresponde a la densidad capilar, que se mide como la relaciïn del nïmero de capilares en la pierna isquïmica en comparaciïn con una pierna no isquïmica normal. “SEM” se refiere al error tïpico de la media. Los P valores menores de 0, 05 (en comparaciïn... [Seguir leyendo]

1. Un polipïptido que comprende una secuencia de aminoïcidos que es al menos 80 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1, y en el que el polipïptido, cuando se dimeriza, se une con un complejo que contiene GFRalfa3 y RET, para su uso en el aumento de la vascularizaciïn en un tejido en un mamïfero que muestra flujo sanguïneo deteriorado o inadecuado en el tejido, en el que:

a) el mamïfero tiene una enfermedad isquïmica; b) el mamïfero tiene una enfermedad cardiovascular; c) el mamïfero ha recibido un ïrgano trasplantado; d) el tejido se localiza en una extremidad del mamïfero y el mamïfero tiene diabetes; o e) el tejido comprende una lesiïn cutïnea asociada con una ïlcera diabïtica.

2. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el tejido es un tejido isquïmico.

3. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 2, en el que el tejido isquïmico es un tejido muscular isquïmico.

4. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero ha padecido un ictus.

5. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero tiene una enfermedad cardiaca isquïmica.

6. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero tiene isquemia resultante de venas varicosas.

7. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero tiene complicaciones isquïmicas de diabetes.

8. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero ha padecido un infarto de miocardio.

9. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1, en el que el mamïfero tiene una enfermedad de las arterias coronarias.

10. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1 (c) , en el que el ïrgano trasplantado es un corazïn o dermis.

11. El polipïptido para uso como en la reivindicaciïn 1 (e) , en el que la ïlcera diabïtica es una ïlcera de pie diabïtico.

12. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en el que uno o mïs de un agente antitrombïtico, un agente reductor del colesterol, un beta bloqueador, un agente antihipertensor o un agente inmunosupresor van a administrarse al mamïfero.

13. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-12, en el que despuïs de la administraciïn del polipïptido, se determina si se ha producido vascularizaciïn aumentada.

14. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-13, en el polipïptido va a administrarse al mamïfero mediante administraciïn sistïmica, subcutïnea o local.

15. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que

a) la secuencia de aminoïcidos es al menos 90 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1; b) la secuencia de aminoïcidos es al menos 95 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1; c) la secuencia de aminoïcidos es al menos 98 % idïntica a los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1; d) el polipïptido comprende los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 1, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 2, los aminoïcidos de 15-113 de SEC ID Nï: 3, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 4, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 5, los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 8 o los aminoïcidos 15-113 de SEC ID Nï: 9; o e) el polipïptido comprende la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 1, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 2, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 3, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 4, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 5, la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 8 o la secuencia de aminoïcidos de SEC ID Nï: 9.

16. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-14, en el que el polipïptido comprende los aminoïcidos 10-113 de SEC ID Nï: 1.

17. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en el que no se ha diagnostico al mamïfero un trastorno neurolïgico.

18. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-17, en el que no se ha diagnosticado al mamïfero un trastorno ocular.

19. El polipïptido para uso como en una cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en el que el mamïfero es un ser humano.