Anticuerpos de unión a TWEAK.

Proteína aislada que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina y una secuencia de dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina que pueden formar un sitio de unión a antígeno que se une a TWEAK humano (inductor débil de la apoptosis de tipo TNF),

en la que:

(a) la secuencia del domino variable de cadena pesada de la proteína comprende las siguientes regiones determinantes de complementariedad (CDR):

CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos: GFTFSRYAMS (SEQ ID NO: 1);

CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos: EISSGGSYPYYPDTVTG (SEQ ID NO: 2); y

CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos: VLYYDYDGDRIEVMDY (SEQ ID NO: 3); y

(b) la secuencia de dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende las siguientes CDR:

CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos: RSSQSLVSSKGNTYLH (SEQ ID NO: 8);

CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos: KVSNRFS (SEQ ID NO: 9); y

CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos: SQSTHFPRT (SEQ ID NO: 10).

Anticuerpos de unión a TWEAK ANTECEDENTES

[1] Las citoquinas relacionadas con el factor de necrosis tumoral (TNF) son una superfamilia de proteínas que tienen una variedad de funciones, incluyendo las implicadas en la regulación del sistema inmunitario y la regulación de la apoptosis. TWEAK (inductor débil de la apoptosis del tipo TNF) es un miembro de esta superfamilia.

DESCRIPCIÓN RESUMIDA

[2] Los anticuerpos anti-TWEAK se pueden utilizar para tratar una variedad de afecciones y trastornos, por ejemplo, un trastorno inflamatorio, un trastorno neuronal u otro desorden descrito en el presente documento. Cuando se usan para tratar a un sujeto humano, el anticuerpo es preferiblemente un anticuerpo humano, humanizado o, en cualquier caso, un anticuerpo con eficacia humana.

[3] En base a la descripción contenida en el presente documento, la presente invención proporciona una proteína aislada que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina y una secuencia de dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina que pueden formar un sitio de unión a antígeno que se une a TWEAK humano (inductor débil de la apoptosis del tipo TNF), en la que:

(a) la secuencia de dominio variable de cadena pesada de la proteína comprende las siguientes regiones determinantes de complementariedad (CDR):

CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos: GFTFSRYAMS (SEQ ID NO: 1);

CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos: EISSGGSYPYYPDTVTG (SEQ ID NO: 2); y CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos: VLYYDYDGDRIEVMDY (SEQ ID NO: 3);

(b) la secuencia de dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende las siguientes CDR:

CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos: RSSQSLVSSKGNTYLFI (SEQ ID NO: 8);

CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos: KVSNRFS (SEQ ID NO: 9); y

CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos: SQSTFIFPRT (SEQ ID NO: 1)

[4] La presente invención y las realizaciones de la misma se establecen en las reivindicaciones adjuntas.

[5] La proteína también se denomina en el presente documento como un "anticuerpo anti-TWEAK".

[6] En una realización, el anticuerpo es un fragmento de unión al antígeno de un anticuerpo de longitud completa, por ejemplo, un fragmento Fab, F(ab')2, Fv o un fragmento Fv de cadena única. Flabitualmente, el anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa. El anticuerpo puede ser un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo monoespecífico. Por ejemplo, el anticuerpo está en una composición que incluye menos de otras 2 especies de anticuerpos anti-TWEAK, por ejemplo, en una composición que no incluye otra especie de anticuerpo anti-TWEAK.

[7] El anticuerpo puede ser efectivamente humano. Un anticuerpo "efectivamente humano" es un anticuerpo que

incluye un número suficiente de posiciones de aminoácidos humanos, de manera que el anticuerpo no provoca una respuesta ¡nmunogénica en un ser humano normal. Preferiblemente, la proteína no evoca una respuesta de anticuerpos neutralizantes, por ejemplo, la respuesta de anticuerpos anti-murinos humanos (FIAMA). Los FIAMA pueden ser problemáticos en un conjunto de circunstancias, por ejemplo, si se desea administrar repetidamente los

anticuerpos, por ejemplo, en el tratamiento de un estado de enfermedad crónica o recurrente. Una respuesta de

FIAMA puede hacer que la administración repetida de anticuerpos sea potencialmente ineficaz debido a un aumento de la depuración de anticuerpos del suero (véase, por ejemplo, Saleh et al., Cáncer Immunol. Immunother, 32: 18- 19 (199)) y también debido a posibles reacciones alérgicas (véase, por ejemplo, LoBuglio et al (1986) Flybridoma, 5: 5.117-5.123).

[8] Por ejemplo, el anticuerpo puede ser un anticuerpo humano, humanizado, injertado con CDR, quimérico, mutado, de afinidad madurada, desinmunizado, sintético o, en otro caso, generado in vitro, y combinaciones de los mismos. En una realización, el anticuerpo anti-TWEAK es un anticuerpo humanizado.

[9] Las cadenas pesada y ligera del anticuerpo anti-TWEAK pueden ser sustancialmente de longitud completa. La proteína puede incluir al menos uno, y preferiblemente dos, cadenas pesadas completas, y al menos uno, y preferiblemente dos, cadenas ligeras completas) o puede incluir un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, un fragmento Fab, F(ab')2, Fv o un fragmento Fv de cadena única). En aún otras realizaciones, el anticuerpo tiene una región constante de cadena pesada elegida entre, por ejemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4, IgM, lgA1, lgA2, IgD, e IgE; en particular, elegida entre, por ejemplo, lgG1, lgG2, lgG3, lgG4 y, más particularmente, lgG1 (por ejemplo, lgG1 humano). Flabitualmente, la región constante de cadena pesada es humana o es una forma modificada de una región constante humana. En otra realización, el anticuerpo tiene una región constante de cadena ligera elegida entre, por ejemplo, kappa o lambda, en particular, kappa (por ejemplo, kappa humana).

[1] La proteína puede incluir una de las siguientes secuencias:

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL KISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 17)

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL KISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 18)

DWMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFT LKISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 19)

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWFQQRPGQSPRRLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDF TLKISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 2)

QLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCSQSTHDIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSL VSSKGNTYLHWYLQKPGQSPFPRT (SEQ ID NO: 21)

DIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQPPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL KISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 22)

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL KISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 23)

DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWYLQKPGQSPQLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTL KISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 24)

DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSQSLVSSKGNTYLHWLQQRPGQPPLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGAGTDFTLK ISRVEAEDVGVYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 25)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRSSQSLVSSKGNTYLHWYQQKPGKAPKLLIYKVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFT LTISSLQPEDFATYYCSQSTH FPRT (SEQ ID NO: 26)

o una secuencia que tiene menos de ocho, siete, seis, cinco, cuatro, tres o dos alteraciones (por ejemplo, sustituciones, inserciones o deleciones, por ejemplo, sustituciones conservadoras o una sustitución por un residuo de aminoácido en una posición correspondiente en P2D1, huP2D 1-L1, o huP2D1-L2). Las sustituciones de ejemplo están en una de las siguientes posiciones de Kabat: 2, 4, 6, 35, 36, 38, 44, 47, 49, 62, 64-69, 85, 87, 98, 99, 11, y 12. Las sustituciones pueden, por ejemplo, sustituir uno o más aminoácidos de P2D1 en las posiciones correspondientes en una región de armazón ("framework"), por ejemplo, una región armazón humana, por ejemplo, en FR2 (por ejemplo, en la posición 46 a Phe de acuerdo con la numeración consecutiva) y en FR3 (por ejemplo, en la posición 87 a Phe).

[11] La proteína puede incluir una de las siguientes secuencias en el dominio variable de cadena pesada:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRDTS ISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 27)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQRLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDTS ASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 28)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQATGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRNTS ISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 29)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTTDTS TSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 3)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTEDTS TDTAYMELSSLRSEDTAVYYCAT VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 31)

QMQLVQSGAEVKKTGSSVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQALEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDRS MSTAYMELSSLRSEDTAMYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 32)

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQAPGQGLEWMGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTMTRDTS TSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 33)

QMQLVQSGPEVKKPGTSVKVSCKASGFTFSRYAMSWVRQARGQRLEWIGEISSGGSYPYYPDTVTGRVTITRDMST STAYMELSSLRSEDTAVYYCAA VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 34)

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVAEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 35)

EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTALYYCAK DVLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 36)

QVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWIRQAPGKGLEWVSEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDNAK NSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR VLYYDYDGDRIE (SEQ ID NO: 37)

EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSRYAMSWVRQAPGKGLEWVGEISSGGSYPYYPDTVTGRFTISRDDSK... [Seguir leyendo]

1. Proteína aislada que comprende una secuencia de dominio variable de cadena pesada de inmunoglobulina y una secuencia de dominio variable de cadena ligera de inmunoglobulina que pueden formar un sitio de unión a antígeno que se une a TWEAK humano (inductor débil de la apoptosis de tipo TNF), en la que:

(a) la secuencia del domino variable de cadena pesada de la proteína comprende las siguientes regiones determinantes de complementariedad (CDR):

CDRH1 que comprende la secuencia de aminoácidos: GFTFSRYAMS (SEQ ID NO: 1);

CDRH2 que comprende la secuencia de aminoácidos: EISSGGSYPYYPDTVTG (SEQ ID NO: 2); y CDRH3 que comprende la secuencia de aminoácidos: VLYYDYDGDRIEVMDY (SEQ ID NO: 3); y

(b) la secuencia de dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende las siguientes CDR:

CDRL1 que comprende la secuencia de aminoácidos: RSSQSLVSSKGNTYLH (SEQ ID NO: 8);

CDRL2 que comprende la secuencia de aminoácidos: KVSNRFS (SEQ ID NO: 9); y

CDRL3 que comprende la secuencia de aminoácidos: SQSTHFPRT (SEQ ID NO: 1).

2. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína es una IgG recombinante de longitud completa.

3. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína comprende una región Fe humana.

4. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína comprende una región Fe humana con una o más sustituciones de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de tipo salvaje de la región Fe.

5. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína es un Fab o scFv.

6. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 9%

idénticas con las regiones armazón de la línea germinal humana.

7. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con una secuencia de la línea germinal del subgrupo Vk1.

8. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con la secuencia DPK9.

9. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con una secuencia seleccionada entre las secuencias establecidas en SEQ ID NOs: 17, 19, 22, 23, 25, 26, 51, 61 y 63.

1. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena ligera de la proteína comprende regiones armazón que son idénticas con una secuencia seleccionada entre las secuencias establecidas en SEQ ID NOs: 17, 19, 22, 23, 25, 26, 51,61 y 63.

11. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena pesada de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con una secuencia de la línea germinal del subgrupo VH I.

12. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena pesada de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con la secuencia de la línea germinal DP-54.

13. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena pesada de la proteína comprende regiones armazón que son al menos un 95% idénticas con una secuencia seleccionada entre las secuencias establecidas en SEQ ID NOs: 27-43, 46-5 y 59.

14. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia del dominio variable de cadena pesada de la proteína comprende regiones armazón que son idénticas con una secuencia seleccionada entre las secuencias establecidas en SEQ ID Nos 27-43, 46-5 y 59.

15. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la secuencia de cadena pesada de la proteína comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 64 y la secuencia de cadena ligera de la proteína comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 66 o SEQ ID NO: 68.

16. Proteína, según la reivindicación 15, en la que secuencia de cadena ligera de la proteína comprende la secuencia establecida en la SEQ ID NO: 68.

17. Proteína, según la reivindicación 1, en la que la proteína está funclonalmente unida a una o más de otras entidades moleculares.

18. Proteína, según la reivindicación 17, en la que dicha una o más entidades moleculares son anticuerpos o fragmentos de unión a antígeno de los mismos.

19. Composición farmacéutica que comprende una proteína, según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, y un portador farmacéuticamente aceptable.

2. Método de disposición de la proteína, según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, en el que dicho método comprende:

(i) proporcionar una célula huésped que contiene secuencias de ácido nucleico recombinante para expresar la proteína; y

(ii) mantener la célula en condiciones en las que se expresa la proteína.

21. Método, según la reivindicación 2, que comprende además aislar la proteína y formular la proteína con un portador farmacéuticamente aceptable

22. Proteína, según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, o composición farmacéutica, según la reivindicación 19, para utilizar en el tratamiento de un trastorno autoinmune.

23. Proteína, según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, o composición farmacéutica, según la reivindicación 19, para utilizar en el tratamiento de la artritis reumatoide.

24. Proteína, según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, o composición farmacéutica, según la reivindicación 19, para utilizar en el tratamiento de la esclerosis múltiple.

25. Proteína, según cualquiera de las reivindicaciones 1-18, o composición farmacéutica, según la reivindicación 19, para utilizar en el tratamiento de la apoplejía.