Polinucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:

(a)una secuencia de ácido nucleico que codifica para el polipéptido de longitud completa de análogo de cadena gamma común de receptor de citocina que comprende los residuos de aminoácido +1 a +371 tal como se expone en SEQ ID NO:2; (b)una secuencia de ácido nucleico que codifica para el polipéptido maduro de análogo de cadena gamma común de receptor de citocina que comprende los residuos de aminoácido +23 a +371 tal como se expone en SEQ ID NO:2; (c)una variante alélica de la secuencia de ácido nucleico definida en (a) o (b); y (d)el polinucleótido complementario a la secuencia de ácido nucleico de una cualquiera de (a) a (c)

Análogo de cadena gamma común de receptor de citocina.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un gen humano novedoso que codifica para un polipéptido que es un miembro de la familia de receptores de citocinas. Más específicamente, la presente invención se refiere a un polinucleótido que codifica para un polipéptido humano novedoso denominado análogo de cadena gamma común de receptor de citocina, o "CRCGCL". Esta invención también se refiere a polipéptidos de CRCGCL, así como a vectores, células huésped, anticuerpos dirigidos contra polipéptidos de CRCGCL y a los métodos recombinantes para producir los mismos.

Antecedentes de la invención

A menudo resultan efectos bioquímicos y fisiológicos de la unión de una citocina a una molécula receptora específica. Entonces, la unión al receptor estimula determinadas rutas de transducción de señales, y a menudo independientes (Kishimoto, T., et al., Cell 76:253-262 (1994). La interacción entre una citocina y un receptor es un regulador primario de una variedad de procesos celulares, incluyendo activación, proliferación y diferenciación (Arai, K. -I, et al., Ann. Rev. Biochem. 59:783-836 (1990); Paul, W. E. y Seder, R. A., Cell 76:241-251 (1994)).

Takeshita, T., et al., Science 257:379-382 (1992) describieron la clonación de la cadena gamma del receptor de IL-2 humano. Las citocinas que se unen a la cadena gamma común (gamma c) de receptor de interleucina-2 (IL-2), incluyendo IL-2, IL-4, IL-7, IL-9 e IL-15, son importantes para el crecimiento y la diferenciación de células inmunitarias, tales como linfocitos T y B, células citolíticas naturales, macrófagos y monocitos. Estas citocinas tienen efectos biológicos solapantes que en parte resultan del uso de la subunidad de receptor compartida gamma c. Recientemente, se ha demostrado que estas citocinas activan varias moléculas de señalización intracelular importantes, mediante la unión a la cadena gamma común (gamma c) de receptor de interleucina-2 (IL-2), incluyendo las cinasas Janus JAK1 y JAK3 y miembros de la familia de factores de transcripción de transductores de señales y activadores de la transcripción (STAT).

El descubrimiento de estas rutas de señalización ha conducido a importantes conocimientos nuevos sobre su papel en la maduración de linfocitos, ya que se desprende que las mutaciones en los genes que codifican tanto para gamma c como JAK3 dan como resultado formas similares de inmunodeficiencia combinada grave (SCID). Por ejemplo, mutaciones en el receptor gamma de interleucina-2 (IL-2) humana, mapeado en el cromosoma X, están asociadas con inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (Human Molecular Genetics, 2(8): 1099 (1993)).

Por tanto, existe una necesidad de polipéptidos que regulen la diferenciación y proliferación de células, puesto que alteraciones de tal regulación pueden estar implicadas en trastornos relacionados con el sistema inmunitario. Por tanto, existe una necesidad de identificación y caracterización de tales polipéptidos humanos que puedan desempeñar un papel en la detección, prevención, mejora o corrección de tales trastornos.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un polinucleótido novedoso y al polipéptido de CRCGCL codificado. Además, la presente invención se refiere a vectores, células huésped, anticuerpos y métodos recombinantes para producir los polipéptidos y polinucleótidos.

Breve descripción de los dibujos

Las figuras 1A-1B muestran la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:1) y la secuencia de aminoácidos deducida (SEQ ID NO: 2) de CRCGCL. La secuencia líder pronosticada se ubica en aproximadamente los aminoácidos 1-22.

La figura 2 muestra las regiones de identidad entre la secuencia de aminoácidos de la proteína de CRCGCL y el producto de traducción del homólogo más cercano, el receptor gamma de interleucina-2 de Bos taurus (n.^os de registro 1532088) (SEQ ID NO:3), determinado mediante análisis BLAST. Los aminoácidos idénticos entre los dos polipéptidos están sombreados en negro, mientras que los aminoácidos conservados están en el recuadro. Examinando las regiones de aminoácidos sombreados y/o en el recuadro, el experto puede identificar fácilmente los dominios conservados entre los dos polipéptidos. Estos dominios conservados son realizaciones preferidas de la presente invención.

La figura 3 muestra un análisis de la secuencia de aminoácidos de CRCGCL. Se muestran regiones alfa, beta, de giro y hélice; hidrofilicidad e hidrofobicidad; regiones anfipáticas; regiones flexibles; índice antigénico y probabilidad de superficie, y todas se generaron usando los parámetros por defecto. En el gráfico de "índice antigénico o Jameson-Wolf", los picos positivos indican ubicaciones de las regiones altamente antigénicas de la proteína de CRCGCL, es decir, regiones a partir de las que pueden obtenerse péptidos que llevan epítopos de la invención. En la presente invención se contemplan los dominios definidos por estos gráficos. En la tabla 1 puede encontrarse la representación en forma de tabla de los datos resumidos gráficamente en la figura 3.

Descripción detallada

Definiciones

Las siguientes definiciones se proporcionan para facilitar la comprensión de determinados términos usados en toda esta memoria descriptiva.

En la presente invención, "aislado" se refiere al material extraído de su entorno original (por ejemplo, el entorno natural si se produce de manera natural), y por tanto está alterado "por la mano del hombre" respecto a su estado natural. Por ejemplo, un polinucleótido aislado podría ser parte de un vector o una composición de materia, o podría estar contenido dentro de una célula, y todavía estar "aislado" porque ese vector, composición de materia, o célula particular no es el entorno original del polinucleótido.

En la presente invención, una proteína de CRCGCL "secretada" se refiere a una proteína que puede dirigirse al RE, las vesículas secretoras o el espacio extracelular como resultado de una secuencia señal, así como una proteína de CRCGCL liberada en el espacio extracelular sin contener necesariamente una secuencia señal. Si se libera la proteína de CRCGCL secretada en el espacio extracelular, la proteína de CRCGCL secretada puede experimentar procesamiento extracelular para producir una proteína de CRCGCL "madura". La liberación en el espacio extracelular puede producirse mediante muchos mecanismos, incluyendo exocitosis y escisión proteolítica.

Tal como se usa en el presente documento, un "polinucleótido" de CRCGCL se refiere a una molécula que tiene una secuencia de ácido nucleico contenida en SEQ ID NO:1 o el ADNc contenido dentro del clon depositado en la ATCC. Por ejemplo, el polinucleótido de CRCGCL puede contener la secuencia de nucleótidos de la secuencia de ADNc de longitud completa, incluyendo las secuencias no traducidas en 5' y 3', la región codificante, con o sin la secuencia señal, la región que codifica para la proteína secretada, así como fragmentos, epítopos, dominios y variantes de la secuencia de ácido nucleico. Además, tal como se usa en el presente documento, un "polipéptido" de CRCGCL se refiere a una molécula que tiene la secuencia de aminoácidos traducida generada a partir del polinucleótido tal como se define ampliamente. Sin embargo, una realización de la presente invención no incluye la secuencia de polinucleótido de n.º de registro de Genbank X91553.

En realizaciones específicas, los polinucleótidos de la invención tienen menos de 300 kb, 200 kb, 100 kb, 50 kb, 15 kb, 10 kb ó 7,5 kb de longitud. En una realización adicional, los polinucleótidos de la invención comprenden al menos 15 nucleótidos contiguos de la secuencia que codifica para CRCGCL, pero no comprenden todo o una parte de ningún intrón de CRCGCL. En otra realización, el ácido nucleico que comprende la secuencia que codifica para CRCGCL no contiene las secuencias codificantes de un gen flanqueante genómico (es decir, en 5' o 3' con respecto al gen de CRCGCL en el genoma).

En la presente invención, se generó la secuencia de CRCGCL de longitud completa identificada como SEQ ID NO:1 solapando secuencias del clon depositado (análisis de cóntigos). Un clon representativo que contiene toda o la mayor parte de la secuencia para SEQ ID NO:1 se depositó en la Colección Americana de Cultivos Tipo ("ATCC") el 23 de marzo de... [Seguir leyendo]

1. Polinucleótido que comprende una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:

2. Polinucleótido según la reivindicación 1, en el que la secuencia de aminoácidos de dicho polipéptido de análogo de cadena gamma común de receptor de citocina es la codificada por el ADNc contenido en el depósito de la ATCC n.º 209641 ó 209691.

3. Polinucleótido según la reivindicación 1 ó 2, siendo dicho polinucleótido ADN, ARN, ADNc o ADN genómico.

4. Polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, siendo dicho polinucleótido bicatenario o monocatenario.

5. Polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 fusionado a un polinucleótido heterólogo.

6. Polinucleótido según la reivindicación 5, en donde el polinucleótido heterólogo codifica para un polipéptido heterólogo.

7. Polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, estando dicho polinucleótido inmovilizado.

8. Polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, estando dicho polinucleótido marcado.

9. Vector que comprende el polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Vector según la reivindicación 9, en el que el polinucleótido está operativamente unido a una secuencia de control reguladora.

11. Método de producción de una célula huésped que comprende modificar por ingeniería genética células con el polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 o el vector según la reivindicación 9 ó 10.

12. Célula huésped seleccionada del grupo que consiste en:

13. Célula huésped según la reivindicación 12, siendo dicha célula huésped una célula procariota, célula eucariota, célula de vertebrados, célula COS, célula CHO, o célula de E. coli.

14. Método de producción de un polipéptido que comprende cultivar la célula huésped según la reivindicación 12 ó 13 en condiciones tales que se expresa el polipéptido codificado por dicho polinucleótido; y recuperar dicho polipéptido.

15. Polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos codificada por un polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

16. Polipéptido según la reivindicación 15, estando dicho polipéptido sintetizado químicamente, o pudiéndose obtener a partir de la célula huésped según la reivindicación 12 ó 13 o que puede obtenerse mediante el método según la reivindicación 14.

17. Polipéptido según la reivindicación 15 ó 16, estando el polipéptido marcado o pegilado.

18. Polipéptido según la reivindicación 17, en el que el marcador es una toxina, un radioisótopo o un marcador fluorescente.

19. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 18 fusionado a un polipéptido heterólogo.

20. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, careciendo dicho polipéptido de una metionina N-terminal.

21. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, teniendo dicho polipéptido una metionina N-terminal.

22. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 21, estando dicho polipéptido inmovilizado.

23. Anticuerpo que reconoce específicamente el polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22.

24. Anticuerpo según la reivindicación 23 que es policlonal, monoclonal, quimérico, un anticuerpo de cadena sencilla, Fv de cadena sencilla, anticuerpo humano, anticuerpo humanizado o fragmento Fab.

25. Anticuerpo según las reivindicaciones 23 ó 24, estando dicho anticuerpo marcado.

26. Anticuerpo según la reivindicación 25, en el que dicho marcador es una toxina, radioisótopo o un marcador fluorescente.

27. Anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 23 a 26, estando dicho anticuerpo inmovilizado.

28. Anticuerpo que es un anticuerpo anti-idiotípico contra el anticuerpo según la reivindicación 23.

29. Polinucleótido que hibrida específicamente en condiciones de hibridación rigurosas con la secuencia de nucleótidos de SEQ ID NO: 1 que codifica para los residuos de aminoácido +1 a +371 de SEQ ID NO: 2 y que no consiste en la siguiente secuencia de nucleótidos:

30. Ácido nucleico antisentido o ribozima que puede unirse al polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 e inhibir de ese modo la producción del polipéptido según la reivindicación 15.

31. Composición que comprende el polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 29, el polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22, el anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones 23 a 27 o el ácido nucleico antisentido o la ribozima según la reivindicación 30.

32. Composición farmacéutica que comprende el polinucleótido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y 29, el polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 15 a 22 o el ácido nucleico antisentido o la ribozima según la reivindicación 30.