Un polinucleótido inmunomodulador que tiene menos de 50 bases o pa- res de bases y que comprende una secuencia seleccionada entre SEQ ID NO:

1, SEQ ID NO: 19 y SEQ ID NO: 132

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a polinucleótidos inmunomoduladores que comprenden una secuencia inmunoestimuladora de oligonucleótidos (ISS). También se refiere a la administración de los polinucleótidos para modular una respuesta inmune.

TÉCNICA ANTERIOR

El tipo de respuesta inmune generada frente a la infección u otro estímulo antigénico se puede distinguir generalmente por el subgrupo de linfocitos T cooperadores (Th) implicados en la respuesta. El subgrupo Th1 es responsable de las funciones clásicas mediadas por células, tales como la hipersensibilidad de tipo retardado y la activación de los linfocitos T citotóxicos (CTLs), mientras que las funciones del subgrupo Th2 son más eficaces como ayudantes para la activación de los linfocitos B. El tipo de respuesta inmune frente a un antígeno está influido generalmente por las citocinas producidas por las células que responden al antígeno. Las diferencias en las citocinas secretadas por los linfocitos Th1 y Th2 se cree que reflejan diferentes funciones biológicas de estos dos subgrupos. Véase, por ejemplo, Romagnani (2000) Ann. Allergy Asthma Immunol. 85:9-18.

El subgrupo Th1 puede ser particularmente adecuado para responder a las infecciones víricas, a los agentes patógenos intracelulares y a las células tumorales porque secreta IL-2 e IFN-º, los cuales activan los CTLs. El subgrupo Th2 puede ser más adecuado para responder a las bacterias que viven de forma libre y a los parásitos helmínticos y puede mediar en reacciones alérgicas, ya que la IL-4 y la IL-5 son conocidas por inducir la producción de IgE y la activación de eosinófilos, respectivamente. En general los linfocitos Th1 y Th2 secretan patrones característicos de citocinas y de este modo, un tipo de respuesta puede moderar la actividad del otro tipo de respuesta. Un desplazamiento en el equilibrio de Th1/Th2 puede dar como resultado, por ejemplo, una respuesta alérgica o, alternativamente, una respuesta incrementada de los CTL.

En numerosas enfermedades infecciosas, tales como la tuberculosis y la malaria, las respuestas de tipo Th2 tienen poco valor protector contra la infección. Las vacunas propuestas que emplean pequeños péptidos obtenidos a partir del antígeno diana y de otros agentes antigénicos utilizados generalmente que evitan el uso de partículas víricas intactas, potencialmente infecciosas, no provocan siempre la respuesta inmune necesaria para conseguir un efecto terapéutico. La falta de una vacuna terapéuticamente eficaz contra el virus de la inmunodeficiencia adquirida humana (VIH), es un ejemplo desafortunado de este fracaso. Las vacunas basadas en proteínas inducen típicamente respuestas inmunes de tipo Th2, caracterizadas por títulos elevados de anticuerpos neutralizantes, pero sin una inmunidad significativa mediada por células.

Por otra parte, algunos tipos de respuestas de anticuerpos son inadecuadas en determinadas indicaciones, más particularmente en la alergia, en donde una respuesta de los anticuerpos IgE puede dar como resultado un choque anafiláctico. Generalmente, las respuestas alérgicas también implican respuestas inmunes de tipo Th2. Las respuestas alérgicas, que incluyen las del asma alérgica, se caracterizan por una respuesta de fase temprana, que tiene lugar unos segundos o minutos después de la exposición al alérgeno y se caracterizan por una desgranulación celular, y una respuesta de fase tardía que tiene lugar de 4 a 24 horas después y se caracteriza por la infiltración de eosinófilos en el sitio de exposición al alérgeno. Específicamente, durante la fase temprana de la respuesta alérgica, el alérgeno se reticula con los anticuerpos IgE sobre células basófilas y mastocitos, que a su vez desencadenan la desgranulación y la liberación posterior de histamina y de otros mediadores de la inflamación, desde los mastocitos y las células basófilas. Durante la respuesta de fase tardía, los eosinófilos se infiltran en el sitio de exposición al alérgeno (en donde se produce una lesión del tejido y como resultado una disfunción).

La inmunoterapia con antígenos para los trastornos alérgicos implica la inyección subcutánea de pequeñas cantidades, pero gradualmente crecientes, de antígeno. Tales tratamientos de inmunización presentan el riesgo de inducir anafilaxis mediada con IgE y no dirigir con eficacia los eventos mediados con citocina de la respuesta alérgica de fase tardía. Hasta el momento, este enfoque solamente ha obtenido un éxito limitado.

La administración de determinadas secuencias de ADN, conocidas generalmente como secuencias inmunoestimuladoras o “ISS”, induce una respuesta inmune con una preferencia para el tipo Th1, tal y como se indica por la secreción de citocinas asociadas con Th1. La administración de un polinucleótido inmunoestimulador con un antígeno, da como resultado una respuesta inmune de tipo Th1 frente al antígeno administrado. Roman y col. (1997) Nature Med. 3:849-854. Por ejemplo, ratones inyectados intradérmicamente con º-galactosidasa (º-Gal) de Escherichia coli (E. coli) en solución salina o en alumbre complementario, respondieron produciendo anticuerpos específicos IgG1 e IgE, y células CD4+ que secretaban IL-4 e IL-5, pero no IFN-º, mostrando que los linfocitos T eran predominante del subgrupo Th2. Sin embargo, ratones inyectados intradérmicamente (o con un aplicador para hacer un rasguño en la piel con una púa) con ADN del plasmídico (en solución salina) que codificaba º-Gal y que contenía una ISS, respondían produciendo anticuerpos IgG2a y linfocitos CD4+ que secretaban IFN-º, pero no IL-4 ni IL-5, mostrando que los linfocitos T eran predominantemente del subgrupo Th1. Por otra parte, la producción específica de IgE en los ratones inyectados con ADN plasmídico, se redujo un 66-75%. Raz y col. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5141-5145. En general, la respuesta a la inmunización con ADN desnudo se caracteriza por la producción de IL-2, de TNFº y de IFN-º por linfocitos T CD4+ estimulados con el antígeno, lo que es indicativo de una respuesta de tipo Th1. Esto es particularmente importante en el tratamiento de la alergia y del asma, tal y como se muestra por una disminución de la producción de IgE. La capacidad de los polinucleótidos inmunoestimuladores de estimular una respuesta inmune de tipo Th1, se ha mostrado con antígenos bacterianos, antígenos víricos y con alérgenos (véase, por ejemplo, el documento WO 98/55495).

Otras referencias que describen ISS incluyen: Krieg y col. (1989) J. Immunol. 143:2448-2451; Tokunaga y col. (1992) Microbiol. Immunol. 36:55-66; Kataoka y col. (1992) Jpn. J. Cancer Res. 83:244-247; Yamamoto y col. (1992) J Immunol. 148:40724076; Mojcik y col. (1993) Clin. Immuno. and Immunopathol. 67:130-136; Branda y col. (1993) Biochem. Pharmacol. 45:2037-2043; Pisetsky y col. (1994) Life Sci. 54(2):101107; Yamamoto y col. (1994a) Antisense Research and Development. 4:119-122; Yamamoto y col. (1994b) Jpn. J Cancer Res. 85:775-779; Raz y col. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9519-9523; Kimura y col. (1994) J. Biochem. (Tokio) 116:991-994; Krieg y col. (1995) Nature 374:546549; Pisetsky y col. (1995) Ann. N. Y. Acad. Sci. 772:152-163; Pisetsky (1996a) J. Immunol. 156:421-423; Pisetsky (1996b) Immunity 5:303-310; Zhao y col. (1996) Biochem. Pharmacol. 51:173-182; Yi y col. (1996) J. Immunol. 156:558-564; Krieg (1996) Trends Microbiol. 4(2):73-76; Krieg y col. (1996) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 6:133-139; Klinrnan y col. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93:2879-2883; Raz y col. (1996); Sato y col. (1996) Science 273:352-354; Stacey y col. (1996) J Immunol. 157:2116-2122; Ballas y col. (1996) J. Immunol. 157:1840-1845; Branda y col. (1996) J. Lab. Clin. Med. 128:329-338; Sonehara y col. (1996) J. Interferon and Cytokine Res. 16:799-803; Klinman y col. (1997) J. Immunol. 158:3635-3639; Sparwasser y col. (1997) Eur. J. Immunol. 27:1671-1679; Roman y col. (1997); Carson y col. (1997) J. Exp. Med. 186:1621-1622; Chace y col. (1997) Clin. Immunol. and Immunopathol. 84:185-193; Chu y col. (1997) J. Exp. Med. 186:16231631; Lipford y col. (1997a) Eur. J. Immunol. 27:2340-2344; Lipford y col. (1997b) Eur.

J. Immunol. 27:3420-3426; Weiner y col. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:1083310837; Macfarlane y col. (1997) Immunology 91:586-593; Schwartz y col. (1997) J. Clin. Invest. 100:68-73; Stein y col. (1997) Antisense Technology, capítulo 11, págs. 241-264, C. Lichtenstein y W. Nellen, compiladores, IRL Press; Wooldridge y col. (1997) Blood 89:2994-2998; Leclerc y col. (1997) Cell. Immunol. 179:97-106; Kline y col. (1997) J. Invest. Med. 45(3):282A; Yi y col. (1998a) J. Immunol. 160:1240-1245;...

1. Un polinucleótido inmunomodulador que tiene menos de 50 bases o pares de bases y que comprende una secuencia seleccionada entre SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 19 y SEQ ID NO: 132.

2. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la secuencia SEQ ID NO: 132.

3. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el polinucleótido inmunomodulador es monocatenario.

4. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el polinucleótido inmunomodulador es bicatenario.

5. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el polinucleótido inmunomodulador está estabilizado.

6. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el polinucleótido comprende un enlace fosforotioato.

7. Una composición inmunomoduladora que comprende un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores y un excipiente farmacéuticamente aceptable.

8. Una composición inmunomoduladora que comprende un antígeno y un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

9. Una composición inmunomoduladora de acuerdo con la reivindicación 8, que comprende adicionalmente un excipiente farmacéuticamente aceptable.

10. Un complejo de polinucleótido inmunomodulador/microsoporte

(IMP/MC), que comprende:

un polinucleótido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, ligado a un microsoporte (MC) biodegradable, en donde dicho MC tiene un tamaño inferior a 10 ºm.

11. Uso de un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la preparación de un medicamento para modular una respuesta inmune.

12. El uso según la reivindicación 11, en donde dicho individuo padece un trastorno asociado con una respuesta inmune de tipo Th2, tal como alergia o asma, o en donde dicho individuo tiene una enfermedad infecciosa.

13. Uso de un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la preparación de un medicamento para tratar una fibrosis pulmonar idiopática o una infección vírica.

14. Uso de un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en la preparación de un medicamento para emplear en un método para mejorar un síntoma de una enfermedad infecciosa o un trastorno relacionado con IgE.

15. El uso según la reivindicación 14, en donde dicha enfermedad infecciosa está causada por un agente patógeno celular.

16. El uso según la reivindicación 15, en donde dicha enfermedad infecciosa causada por un agente patógeno celular se selecciona entre una enfermedad micobacteriana, malaria, leishmaniosis, toxoplasmosis, esquistosomiasis y clonorquiasis.

17. El uso según la reivindicación 14, en donde dicho trastorno relacionado con IgE es alergia, un trastorno relacionado con la alergia o asma.

18. Un equipo de reactivos que comprende un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, e instrucciones para el uso del polinucleótido inmunomodulador para la inmunomodulación de un individuo.