Un oligonucleótido para uso en la inhibición de una respuesta inmune dependiente de TLR7/8 en un individuo,

enque el oligonucleótido tiene menos de aproximadamente 200 bases o pares de bases y el oligonucleótido comprendeuna secuencia inmunorreguladora, en que la secuencia inmunorreguladora comprende al menos una secuenciatrinucleotídica TGC en el extremo 5' del oligonucleótido.

Métodos y composiciones para la inhibición de respuestas inmunes innatas y autoinmunidad.

Referencia cruzada a solicitudes relacionadas

Esta solicitud reivindica el beneficio de la Solicitud de Patente Provisional de EE.UU., Nº de Serie 60/606.833, presentada el 1 de septiembre de 2004.

Campo técnico

El presente invento se refiere a un oligonucleótido para uso en la inhibición de una respuesta inmune dependiente de TLR7/8 en un individuo, en que el oligonucleótido tiene menos de aproximadamente 200 bases o pares de bases y el oligonucleótido comprende una secuencia inmunorreguladora, en que la secuencia inmunorreguladora comprende al menos una secuencia trinucleotídica TGC en el extremo 5' del oligonucleótido.

Antecedentes del invento

En general, la inmunidad puede ser clasificada como inmunidad innata e inmunidad adaptativa. Típicamente, las respuestas inmunes innatas se producen inmediatamente después de una infección para proporcionar una barrera precoz a una enfermedad infecciosa, mientras que las respuestas inmunes adaptativas se producen más tarde con la generación de células efectoras antigénicamente específicas y, a menudo, una inmunidad protectora a largo plazo. Las respuestas inmunes innatas no generan una inmunidad protectora duradera, pero parece que desempeñan un papel en la generación de la respuesta inmune adaptativa que surge más adelante.

En la inmunidad innata se utilizan receptores codificados por la línea germinal para reconocer rasgos que son comunes a muchos patógenos y para activar procesos de señalización que dan lugar a la expresión de moléculas efectoras. Algunas de estas moléculas efectoras pueden provocar finalmente una respuesta inmune adaptativa. Se ha asociado la familia de receptores de tipo Toll (TLRs; del inglés, Toll-like receptors) con la señalización de la respuesta inmune innata y se han identificado ligandos microbianos para diversos TLRs de mamífero. Por ejemplo, el TLR2 interacciona con peptidoglicano, lipopéptidos bacterianos y ciertos tipos de lipopolisacárido (LPS) , el TLR3 interacciona con RNA de doble cadena, el TLR4 interacciona con LPS y el TLR5 interacciona con flagelina bacteriana. Véanse, por ejemplo, Poltorak et al. (1998) , Science 282: 2085-2088; Akira et al. (2003) , Immunol. Lett. 85: 85-95; Alexopoulou et al. (2001) , Nature 413:732-738; Hayashi et al. (2001) , Nature 410: 1099-1103. El TLR-7 es activado por compuestos análogos de guanosina, por pequeños compuestos antivirales tales como imidazoquinoleínas, imiquimod y R-848, y por RNA vírico de cadena sencilla, y el TLR-8 es también activado por R-848 y RNA vírico de cadena sencilla. Véanse, por ejemplo, Lee et al. (2003) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 6646-6651; Hemmi et al. (2002) , Nat. Immunol. 3: 196-200; Jurk et al. (2002) , Nat. Immunol. 3: 499; Heil et al. (2004) , Science 303: 15261529; y Diebold et al. (2004) , Science 303: 1529-1531. Se ha mostrado que el TLR-9 reconoce moléculas de ácido nucleico inmunoestimulante tales como DNA bacteriano y DNA inmunoestimulante que contiene una secuencia 5'CG-3'. Véanse, por ejemplo, Hemmi et al. (2000) Nature, 408: 740-745; Bauer et al. (2001) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 9237-9242; y Takeshita et al. (2001) , J. Immunol. 167: 3555-3558. Además, ciertos TLRs (por ejemplo, TLR-1, TLR-2 y TLR-6) pueden heterodimerizarse, interaccionar con sus ligandos microbianos y conducir a activación celular, ampliándose así el repertorio de ligandos de la familia de TLRs [Ozinsky et al. (2000) , J. Endotoxin Res.

6: 393-396; Ozinsky et al. (2000) , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 13.766-13.771].

Las moléculas de ácido nucleico inmunoestimulante (ISNA; del inglés, immunostimulator y nucleic acid) , tales como DNA bacteriano y un polinucleótido que contiene secuencias 5'-CG-3' no metiladas, pueden estimular respuestas inmunes innatas, tales como la producción de citocinas y la activación de células dendríticas y macrófagos, y conducir luego a una respuesta inmune de tipo Th1. Las moléculas de ácido nucleico inmunoestimulante estimulan la respuesta inmune por medio de la interacción con, y la señalización a través de, el receptor TLR9 de mamífero [Hemmi et al. (2000) , supra]. El DNA de mamífero no posee generalmente actividad inmunoestimulante debido aparentemente a una baja frecuencia de secuencias CG y a que la mayoría de las secuencias CG tienen una citosina metilada. Parece que de este modo las células del sistema inmune de mamífero distinguen el DNA bacteriano del propio DNA a través del receptor TLR9.

Las moléculas de ácido nucleico inmunoestimulante han sido implicadas en la patogénesis de la artritis. Se ha mostrado que el ácido nucleico inmunoestimulante desempeña un papel en la activación de células B autorreactivas tales como aquéllas que producen una clase de autoanticuerpos conocidos como factor reumatoide (RF; del inglés, rheumatoid factor) . Por lo tanto, parece que dichos ácidos nucleicos inmunoestimulantes desempeñan un papel en la autoinmunidad sistémica. Además, el ácido nucleico inmunoestimulante puede potenciar la toxicidad del LPS y contribuir a los efectos negativos de la administración de vectores para terapia génica. Véanse, por ejemplo, Deng et al. (1999) , Nature Med. 5: 702-705; Leadbetter et al. (2002) , Nature 416: 603-607; Cowder y et al. (1996) , J. Immunol.

156: 4570-4575; y la Patente de EE.UU. nº 6.225.292.

Queda la necesidad de identificar estrategias para controlar una activación inmune indeseada, incluyendo una activación indeseada de la respuesta inmune innata.

Descripción del invento

El invento se refiere a un oligonucleótido para uso en la inhibición de una respuesta inmune dependiente de TLR7/8 en un individuo, en que el oligonucleótido tiene menos de aproximadamente 200 bases o pares de bases y el oligonucleótido comprende una secuencia inmunorreguladora, en que la secuencia inmunorreguladora comprende al menos una secuencia trinucleotídica TGC en el extremo 5' del oligonucleótido.

En un aspecto, la respuesta inmune se asocia con una enfermedad autoinmune. En otro aspecto, la inhibición de la respuesta inmune mejora uno o más síntomas de una enfermedad autoinmune. La administración de un oligonucleótido de acuerdo con el invento mejora uno o más síntomas de la enfermedad autoinmune, incluyendo el lupus eritematoso sistémico (SLE; del inglés, systemic lupus erithematosus) y la artritis reumatoide. En ciertas realizaciones, el oligonucleótido es para uso en la supresión de un síntoma del SLE.

En otro aspecto, la inhibición de la respuesta inmune evita o retrasa el desarrollo de la enfermedad autoinmune. La administración de un oligonucleótido de acuerdo con el invento evita o retrasa el desarrollo de la enfermedad autoinmune.

En otro aspecto, la respuesta inmune se asocia con una enfermedad inflamatoria. La administración de un oligonucleótido de acuerdo con el invento mejora uno o más síntomas de la enfermedad o trastorno inflamatorio. En ciertas realizaciones, el oligonucleótido es para uso en la mejoría de un síntoma de una enfermedad o trastorno inflamatorio crónico.

En otro aspecto, la respuesta inmune se asocia con una estimulación crónica por patógenos. La administración de un oligonucleótido de acuerdo con el invento suprime la estimulación crónica por patógenos en el individuo, incluyendo la asociada con la malaria y con infecciones víricas crónicas.

En ciertas realizaciones, los oligonucleótidos para uso de acuerdo con el invento inhiben una respuesta de una célula B o una célula dendrítica plasmocitoide. En ciertas realizaciones, las respuestas inmunes inhibidas por los oligonucleótidos para uso de acuerdo con el invento incluyen la inhibición de la producción de citocinas, tales como IL-6, IL-12, IFN-a y/o TNF-a, por la célula, la inhibición de la maduración celular y/o la inhibición de la proliferación celular. Se describen aquí composiciones que inhiben una respuesta celular dependiente de TLR9, una respuesta celular dependiente de TLR7/8 y/o una respuesta celular dependiente de TLR7/8/9.

También se describen aquí kits, preferiblemente para llevar el invento a cabo. Los kits comprenden generalmente un oligonucleótido para uso de acuerdo con el invento (generalmente en un recipiente adecuado) y pueden incluir además instrucciones para el uso del oligonucleótido en la inmunorregulación de un individuo.

Se proporcionan aquí oligonucleótidos para uso de acuerdo con el invento que comprenden... [Seguir leyendo]

1. Un oligonucleótido para uso en la inhibición de una respuesta inmune dependiente de TLR7/8 en un individuo, en que el oligonucleótido tiene menos de aproximadamente 200 bases o pares de bases y el oligonucleótido comprende una secuencia inmunorreguladora, en que la secuencia inmunorreguladora comprende al menos una secuencia trinucleotídica TGC en el extremo 5' del oligonucleótido.

2. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en que la respuesta inmune está asociada con una enfermedad autoinmune.

3. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 2, en que la inhibición de la respuesta inmune mejora uno o más síntomas de la enfermedad autoinmune.

4. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 2, en que la inhibición de la respuesta inmune previene o retrasa el desarrollo de la enfermedad autoinmune.

5. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 2 a 4, en que la enfermedad autoinmune es seleccionada del grupo que consiste el lupus eritematoso sistémico (SLE) , artritis reumatoide y enfermedades cutáneas autoinmunes.

6. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en que la respuesta inmune está asociada con una estimulación crónica por patógenos.

7. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 1, en que la respuesta inmune está asociada con una enfermedad inflamatoria.

8. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, en que el oligonucleótido tiene una longitud de 50 bases o pares de bases o menos.

9. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, en que el oligonucleótido consiste en la secuencia nucleotídic.

5. TGCNm-3',

en que cada N es un nucleótido, m es un número entero de 5 a aproximadamente 50, y la secuencia N1-Nm comprende al menos un dinucleótido GC.

10. El oligonucleótido para uso de acuerdo con la Reivindicación 9, en que el oligonucleótido consiste en la secuencia nucleotídica seleccionada del grupo que consiste e.

5. TGCNmA-3'.

5. TGCNmCA-3', .

5. TGCNmGCA-3'.

11. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, en que el oligonucleótido comprende la secuenci.

5. TGCTTGCAAGCTTGCAAGCA-3' o un fragmento de esta secuencia que incluye al menos una porción palindrómica de la misma de 10 bases.

12. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 8, en que el oligonucleótido es seleccionado del grupo que consiste en:

5'-TGCTTGCAAGCTTGCAAGCA-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCAAG-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCA-3'.

5. TGCTTGCAAGCTAGCAAGCA-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCTAGCA-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGACAGCA-3'.

5. TGCTTAGCAGCTATGCAGCA-3'.

5. TGCAAGCAAGCTAGCAAGCA-3'.

5. TGCAAGCTTGCAAGCTTGCAAGCTT-3'.

5. TGCTGCAAGCTTGCAGATGAT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCAAGC-3'.

5. TGCAAGCTTGCAAGCTTGCAAT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTG-3'.

5. TGCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACATCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGACAGTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGATCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGCTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGCTTGTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGACAGCATCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGACAGCATCCTGGAGGGGT-3'.

5. TGCTTGACAGCTTGACAGCATCCTGGAGGGG-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCTCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTCCTGGAGGGGTTGT-3', 5'-TGCTTGCAAGCTTGCAAGCATCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCAAGCA-HEG-TCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTAGCAAGCA-HEG-TCCTGGAGGGGTTGT-3'.

5. TGCTTGCAAGCTTGCTAGCA-HEG-TCCTGGAGGGGTTGT-3', 5'-TGCTTGCAAGCTTGCTAGCA-HEG-TCCTGGAGZGGTTGT-3'.

5. TGCTGCTGGAGZ'GGTTGT-3', .

5. TGCTGGAGZ'GGTTGT-3', en que HEG es hexa- (etilenglicol) y Z' es 7-desaza-dG.

13. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el oligonucleótido contiene polinucleótidos modificados en el fosfato.

14. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el oligonucleótido comprende enlaces fosforotioato.

15. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en que el individuo es un ser humano.

16. El oligonucleótido para uso de acuerdo con cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 7, en que el oligonucleótido 15 tiene una longitud de 200 bases o menos.