Un polinucleótido inmunomodulador que comprende la secuencia mostrada en SEQ ID NO.

:171, donde la secuencia mostrada en SEQ ID NO.:171 está en el extremo 5' del polinucleótido.

Secuencia de oligonucleótidos inmunoestimuladores y métodos para usar los mismos.

CAMPO TÉCNICO

La presente invención se refiere a polinucleótidos inmunomoduladores. También se refiere a la administración de polinucleótidos que modulan una respuesta inmune.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El tipo de respuesta inmune generada frente a una infección u otras exposiciones antigénicas puede distinguirse generalmente por el subgrupo de linfocitos T coadyuvantes (Th) implicados en la respuesta. El subgrupo Th1 es responsable de las funciones mediadas por células clásicas tales como la hipersensibilidad tipo retrasada y la activación de linfocitos T citotóxicos (CTL) , mientras que el subgrupo Th2 funciona de forma más efectiva como un coadyuvante para la activación de células B. El tipo de respuesta inmune frente a un antígeno está influida generalmente por las citoquinas producidas por las células que responden al antígeno. Se piensa que las diferencias entre las citoquinas secretadas por células Th1 y Th2 reflejan las diferentes funciones biológicas de estos dos subgrupos. Véase, por ejemplo, Romagnani (2000) Ann. Allergy Asthma Immunol. 85:9-18.

El subgrupo Th1 puede ser particularmente adecuado para responder a infecciones virales, patógenos intracelulares y células tumorales porque secreta IL-2 y IFN-y, que activa a las CTL. El subgrupo Th2 puede ser más adecuado para responder a bacterias naturales y parásitos helmínticos y puede mediar reacciones alérgicas, ya que se sabe que IL-4 y IL-5 inducen la producción de IgE y la activación de eosinófilos, respectivamente. En general, las células Th1 y Th2 secretan distintos modelos de citoquinas y así un tipo de respuesta puede moderar la actividad del otro tipo de respuesta. Un desplazamiento en el equilibrio Th1/Th2 puede dar como resultado una respuesta alérgica, por ejemplo, o, de forma alternativa, una mayor respuesta de CTL.

Para muchas de la enfermedades infecciosas, tales como la tuberculosis y la malaria, las respuestas del tipo Th2 tienen un pobre valor protector frente a la infección. Las vacunas propuestas que usan péptidos pequeños derivados del antígeno diana y otros agentes antigénicos usados en la actualidad que evitan el uso de partículas virales intactas potencialmente infectivas, no siempre generan la respuesta inmune necesaria para alcanzar un efecto terapéutico. Las vacunas proteicas inducen típicamente respuestas inmunes del tipo Th2, caracterizadas por altos títulos de anticuerpos neutralizantes pero sin significativa inmunidad mediada por células.

Además, algunos tipos de respuestas de anticuerpos son inapropiadas en ciertas indicaciones, más patentemente en alergias en las que una respuesta con anticuerpos de IgE puede causar un choque anafiláctico. Generalmente, las respuestas alérgicas también implican respuestas inmunes del tipo Th2. Las respuestas alérgicas, incluyendo aquellas de asma alérgica, se caracterizan por una respuesta en fase precoz, que ocurre en unos segundos o minutos desde la exposición alérgena y se caracterizas por desgranulación celular, y una respuesta en fase tardía, que ocurres de las 4 a las 24 horas después y se caracteriza por la infiltración de eosinófilos en el sitio de exposición alérgena. Específicamente, durante la fase tardía de la respuesta alérgica, el alérgeno se reticula con anticuerpos de IgE en basófilos y mastocitos, que a su vez disparan la desgranulación y la subsiguiente liberación de histamina y otros mediadores de la inflamación por mastocitos y basófilos. Durante la respuesta en fase tardía, los eosinófilos se infiltran en el sitio de la exposición alérgena (donde causa el daño al tejido y la disfunción) .

La inmunoterapia con antígenos para los trastornos alérgicos implica la inyección subcutánea de pequeñas, aunque gradualmente crecientes, cantidades de antígeno. Tales tratamientos de inmunización presentan el riesgo de inducir anafilaxias mediadas por IgE y no interfieren de forma eficiente los acontecimientos mediados por citoquinas de la respuesta alérgica en fase tardía. Hasta el momento, este enfoque ha proporcionado solo éxitos limitados.

La administración de ciertas secuencias de ADN, generalmente conocidas como secuencias inmunoestimuladoras, induce una respuesta inmune con un sesgo del tipo Th1 como se indica por la secreción de citoquinas asociadas a Th1. La administración de un polinucleótido inmunoestimulador con un antígeno da como resultado una respuesta inmune del tipo Th1 frente al antígeno administrado. Roman et al. (1997) Nature Med. 3:849-854 . Por ejemplo, los ratones a los que se le inyecta intradérmicamente I-galactosidasa (I-Gal) de Escherichia coli (E. coli) en solución salina o en el adyuvante alumbre respondieron con la producción de anticuerpos específicos de IgG1 y IgE, y células CD4+ que secretaban IL-4 y IL-5, pero no IFN-y, demostrando que las células T eran predominantemente del Th2 subgrupo. Sin embargo, los ratones a los que se les inyectó intradérmicamente (o con un aplicador para el rascado de la piel de lanceta) con ADN de plásmido (en solución salina) que codificaba I-Gal y que contenía una secuencia inmunoestimuladora respondieron produciendo anticuerpos IgG2a y células CD4+ que secretaban IFN-y, pero no IL-4 y IL-5, demostrando que las células T pertenecían predominantemente al subgrupo Th1. Además, la producción de IgE específica por los ratones a los que se les había inyectado ADN de plásmido se redujo en un 66-75%. Raz et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5141-5145. En general, la respuesta frente a la inmunización de ADN desnudo se caracteriza por la producción de IL-2, TNF-a y IFN-y por células T CD4+ estimuladas con antígenos, lo que es indicativo de una respuesta del tipo Th1. Esto es particularmente importante en el tratamiento de la alergia y del asma como se muestra por la menor producción de IgE. La capacidad de los polinucleótidos inmunoestimuladores de estimular una respuesta inmune del tipo Th1 se ha demostrado con antígenos bacterianos, antígenos virales y con alérgenos (véase, por ejemplo, el documento WO 98/55495) .

Las referencias que describen la actividad inmunoestimuladora de polinucleótidos incluyen: Krug et al. (2001) Eur. J. Immunol. 31:3026; Bauer et al. (2001) J. Immunol. 166:5000; Klinman et al. (1999) Vaccine 17:19; Jahn-Schmid et al. (1999) J. Allergy Clin. Immunol. 104:1015; Tighe et al. (2000) Eur. J. Immunol. 30:1939; Shirota et al. (2000) J. Immunol. 164:5575; Klinman et al. (1999) Infect. Immun. 67:5658; Sur et al. (1999) J. Immunol. 162:6284; Magone et al. (2000) Eur. J. Immunol. 30:1841; Kawarada et al. (2001) J. Immunol. 167:5247; Kranzer et al. (2000) Immunology 99:170; Krug et al. (2001) Eur. J. Immunol. 31:2154; Hartmann et al. (2000) J. Immunol. 164:944; Bauer et al. (1999) Immunology 97:699; Fujieda et al. (2000) Am. J. Respir. Crit. Care Med. 162:232; Krieg (2002) Annu. Rev. Immunol. 20:709; Verthelyi et al. (2002) J. Immunol. 168:1659; Hornung et al. (2002) J. Immunol. 168:4531; Yamamoto et al. (2000) Springer Semin. Immunopathol. 22:35; Lee et al. (2000) J. Immunol. 165:3631; Gursel et al. (2002) J. Leukoc. Biol. 71:813; Gursel et al. (2002) Eur. J. Immunol. 32:2617; Broide et al. (2001) J. Clin. Immunol. 21:175; Zhu et al. (2001) Immunology 103:226; Klinman et al. (2002) Microbes Infect. 4:897; Hartmann et al. (2000) J. Immunol. 164:1617; Krieg (1999) Biochim. Biophys. Acta 1489:107; Dalpke et al. (2002) Immunology 106:102; Yu et al. (2002) Biochem. Biophys. Res. Commun. 297:83; Hafner et al. (2001) Cancer Res. 61:5523; Zwaveling et al. (2002) J. Immunol, 169:350; Davis et al. (2000) Vaccine 18:1920; Gier y nska et al. (2002) J. Virol. 76:6568; Lipford et al. (2000)

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Otras referencias que describen secuencias inmunoestimuladoras incluyen: Krieg et al. (1989) J. Immunol. 143:2448-2451; Tokunaga et al. (1992) Microbiol. Immunol. 36:55-66; Kataoka et al. (1992) Jpn. J. Cancer Res. 83:244-247; Yamamoto et al. (1992) J. Immunol. 148:4072-4076; Mojcik et al. (1993) Clin. Immuno. and Immunopathol. 67:130-136; Branda et al. (1993) Biochem. Pharmacol. 45:2037-2043; Pisetsky et al. (1994) Life Sci. 54 (2) :101-107; Yamamoto et al. (1994a) Antisense Research and Development. 4:119-122; Yamamoto et al. (1994b) Jpn. J. Cancer Res. 85:775-779; Raz et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9519-9523; Kimura et al. (1994) J. Biochem. (Tokyo) 116:991-994; Krieg et al. (1995) Nature 374:546-549; Pisetsky et al. (1995) Ann. N.Y.... [Seguir leyendo]

1. Un polinucleótido inmunomodulador que comprende la secuencia mostrada en SEQ ID NO.:171, donde la secuencia mostrada en SEQ ID NO.:171 está en el extremo 5' del polinucleótido.

2. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 1, donde el polinucleótido consiste en la 5 secuencia mostrada en SEQ ID NO.:171.

3. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que los nucleósidos se unen a través de ésteres de fosforotioato.

4. Una composición inmunomoduladora que comprende un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en la modulación de una respuesta inmune en un individuo.

6. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el aumento de interferón-gamma (IFN-y) en un individuo.

7. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el 15 aumento de interferón-alfa (IFN-a) en un individuo.

8. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en la mejora de un síntoma de una enfermedad infecciosa en un individuo.

9. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en la mejora de un síntoma de un trastorno relacionado con IgE en un individuo.

10. Uso de un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para la fabricación de un medicamento para tratar el asma.

11. Un polinucleótido inmunomodulador de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 para uso en el tratamiento del asma.