Modificación de una enfermedad a largo plazo mediante el uso de oligonucleótidos inmunoestimuladores.

Una composición que comprende una cantidad eficaz de una secuencia inmunoestimuladora (ISS) en la que la ISS es una ISS que contiene CpG para el uso en la modificación de la enfermedad a largo plazo del asma mediante la administración múltiple de dicha composición,

en la que la ISS se administra al menos 5 veces.

Modificación de una enfermedad a largo plazo mediante el uso de oligonucleótidos inmunoestimuladores Campo de la invención La invención se refiere a métodos para tratar el asma mediante el uso de administraciones múltiples de una o más secuencias inmunoestimuladoras ("ISS") que confieren la modificación de una enfermedad a largo plazo.

Antecedentes de la invención El tipo de respuesta inmunitaria generada por una infección u otra exposición antigénica se puede distinguir en general por el subgrupo de células T cooperadoras (Th) implicadas en la respuesta. El subgrupo Th1 es responsable de las funciones clásicas mediadas por células, tales como la hipersensibilidad de tipo retardado y la activación de los linfocitos T citotóxicos (CTLs) , mientras que las funciones del subgrupo Th2 son más eficaces como auxiliares para la activación de las células B. El tipo de respuesta inmunitaria hacia un antígeno está influido en general por las citocinas producidas por las células que responden al antígeno. Se cree que las diferencias en las citocinas secretadas por las células Th1 y Th2 reflejan diferentes funciones biológicas de estos dos subgrupos. Véase, por ejemplo, Romagnani (2000) Ann. Allergy Asthma Immunol., 85:9-18.

El subgrupo Th1 puede ser particularmente adecuado para responder a las infecciones virales, a los patógenos intracelulares y a las células tumorales, porque secreta IL-2 e IFN-γ, que activan los CTLs. El subgrupo Th2 puede ser más adecuado para responder a las bacterias que viven libremente y a los parásitos helmínticos, y puede mediar en reacciones alérgicas, ya que se sabe que IL-4 e IL-5 inducen la producción de IgE y la activación de eosinófilos, respectivamente. En general, las células Th1 y Th2 secretan patrones diferentes de citocinas, y así, un tipo de respuesta puede moderar la actividad del otro tipo de respuesta. Un desplazamiento en el equilibrio de Th1/Th2 puede dar como resultado una respuesta alérgica, por ejemplo, o, de manera alternativa, una respuesta incrementada de CTLs.

Se ha reconocido durante cierto tiempo que se puede inducir una respuesta inmunitaria de tipo Th1 en mamíferos mediante la administración de ciertas ISSs. Las ISSs incluyen secuencias denominadas secuencias inmunoestimuladoras ("ISS") , que a menudo incluyen un CG. Véanse, p.ej., las publicaciones PCT WO 98/55495, WO 97/28259, las pat. de EE.UU. Nºs 6.194.388; 6.207.646, y 6.498.148; y Krieg et al. (1995) Nature, 374:546-49. Para numerosas enfermedades infecciosas, tales como la tuberculosis y la malaria, las respuestas de tipo Th2 tienen poco valor protector contra la infección. Las vacunas basadas en proteínas inducen en general respuestas inmunitarias de tipo Th2, caracterizadas por títulos elevados de anticuerpos neutralizantes, pero sin una inmunidad significativa mediada por células. Además, algunos tipos de respuestas de anticuerpos son inadecuadas en ciertas indicaciones, muy notablemente en la alergia, en la que una respuesta de anticuerpos IgE puede dar como resultado un choque anafiláctico.

En los vertebrados, la adhesión a las células endoteliales por los granulocitos (eosinófilos, basófilos, neutrófilos y mastocitos) va seguida por la liberación de mediadores inflamatorios, tales como leucotrienos, proteína básica principal e histamina. En los individuos susceptibles, la inflamación resultante puede dañar los tejidos del individuo afectado.

La afección inflamatoria patológica más habitual es el asma, que se caracteriza por una infiltración notable de eosinófilos en las vías respiratorias, seguida por la lesión del tejido inducida por la inflamación. El tratamiento rutinario de tales afecciones se dirige en general a inhibir la actividad de los mediadores inflamatorios liberados tras la adhesión de los granulocitos a los endotelios (p.ej., administrando una composición de corticoides a los tejidos afectados) . Cuando se conoce la identidad de un antígeno que induce la inflamación, se puede proporcionar cierta protección inmunitaria contra la exposición posterior al antígeno por medio de la inmunización. Sin embargo, aunque es eficaz para estimular la producción de anticuerpos neutralizantes, la inmunización tradicional no estimula de manera eficaz la inmunidad celular a más largo plazo. Además, la inmunización con antígenos estimula la producción individual de IL-4 e IL-5. IL-5 fomenta la adhesión de los granulocitos a los endotelios, mientras IL-4 induce el cambio de inmunoglobulinas al isotipo IgE con el riesgo de anafilaxia.

Con respecto al asma alérgica, se ha demostrado que el pretratamiento con ISS inhibe la eosinofilia en las vías respiratorias inducida por el alérgeno y la hipersensibilidad de las vías respiratorias en un modelo de ratón de asma alérgica. Broide et al. (1998) J. Immunol. 161:7054. También se ha demostrado que esta inhibición se correlaciona también con la inhibición inducida por ISS de los niveles de citocinas de tipo Th2 en las vías respiratorias. Hessel et al., (2005) J. Exp. Med., 202 (11) :1563. Véase también Gauvrean et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med. vol. 174, 15-20, 2006. Estos efectos, sin embargo, se centraron en el efecto directo del tratamiento con ISS, ya que el tratamiento con ISS se administró poco antes de la exposición al alérgeno. Tulic et al, J. Allergy Clin. Immunol., 2004, 235-241, y Mealy et al, Drugs of the Future, vol. 30, nº 1, 2005, 51-107 describen ISS conjugadas a Amb a 1 de proteínas cortas de ambrosía para el uso en la terapia inmunitaria de corta duración de los pacientes sensibles a ambrosía. Sin embargo, el efecto del tratamiento a largo plazo con ISS sigue siendo desconocido en gran medida. Además, tampoco se ha caracterizado bien un tratamiento para el asma que pudiera conferir beneficios a largo plazo. La invención descrita en la presente memoria proporciona enseñanzas útiles para abordar lo anterior.

Compendio breve de la invención La invención proporciona una composición que comprende una cantidad eficaz de una secuencia inmunoestimuladora (ISS) , en la que la ISS es una ISS que contiene CpG para el uso en la modificación de la enfermedad a largo plazo del asma mediante la administración múltiple de dicha composición, en la que la ISS se administra al menos 5 veces. En una realización, las administraciones múltiples se dan semanalmente. En otra realización, la modificación de la enfermedad a largo plazo es una disminución de la respuesta de tipo Th2 en el individuo. En otra realización, la disminución de la respuesta de tipo Th2 en el individuo es una disminución de cualquiera de las citocinas seleccionadas del grupo que consiste en IL-4, IL-5, IL-10, e IL-13. En otra realización, la modificación de la enfermedad a largo plazo dura al menos 13 semanas después de la última administración de la ISS. En otra realización, el método da como resultado la modificación de la enfermedad a largo plazo del asma, en la que el asma es asma alérgica. En otra realización, la ISS se selecciona del grupo que consiste en 1018 ISS, y una ISS que contiene CpG. En otra realización, la ISS es 1018 ISS. En otra realización, la ISS se administra en presencia de un alérgeno adventicio. En otra realización, el alérgeno adventicio es ambrosía.

Descripción breve de los dibujos La Figura 1 es un gráfico que representa los resultados para seis genes de ISS importantes para el desarrollo de una respuesta inflamatoria de las vías respiratorias de tipo Th2 cuando los ratones sensibilizados se exponen de manera intranasal a ambrosía. Los datos se expresan en forma de proporción gen/ubiquitina.

La Figura 2 es un gráfico que representa la inhibición de la inducción de genes de tipo Th2 para GOB-5 y C2 mediante el pretratamiento con 1018 ISS. Los datos se expresan en forma de proporción gen/ubiquitina.

La Figura 3 es un gráfico que representa los niveles de las citocinas de tipo Th2 IL-4 e IL-13 detectadas en líquido LBA. Los asteriscos dobles indican una significación estadística de p < 0, 01. El asterisco simple indica una significación estadística de p < 0, 05.

La Figura 4 es un gráfico que representa los niveles de la citocina de tipo Th2 IL-10 y la citocina de tipo Th1 INF-γ detectados en líquido LBA. Los asteriscos dobles indican una significación estadística de p < 0, 01.

La Figura 5 es un gráfico que representa el número absoluto de eosinófilos detectados en líquido LBA. Los asteriscos dobles indican una significación estadística de p < 0, 01.

La Figura 6 es un gráfico que representa los niveles de las citocinas de tipo Th2 IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 medidos en líquido de lavado (líquido LBA) en ratones que se han tratado con administraciones múltiples de 1018 ISS.

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1. Una composición que comprende una cantidad eficaz de una secuencia inmunoestimuladora (ISS) en la que la ISS es una ISS que contiene CpG para el uso en la modificación de la enfermedad a largo plazo del asma mediante la administración múltiple de dicha composición, en la que la ISS se administra al menos 5 veces.

2. La composición para el uso según la reivindicación 1, en la que la ISS se administra al menos 8 veces.

3. La composición para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que las administraciones múltiples se dan de manera semanal.

4. La composición para el uso según la reivindicación 1 ó 2, en la que las administraciones múltiples se dan cada dos semanas.

5. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la modificación de la enfermedad a largo plazo es una disminución de una respuesta de tipo Th2 en el individuo.

6. La composición para el uso según la reivindicación 5, en la que la disminución de la respuesta de tipo Th2 en el individuo es una disminución de cualquiera de las citocinas seleccionadas de IL-4, IL-5, IL-10, e IL-13.

7. La composición para el uso según la reivindicación 5, en la que la disminución de la respuesta de tipo Th2 en un individuo es una disminución de la infiltración de eosinófilos en las vías respiratorias.

8. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la modificación dura al menos 8 semanas tras la última administración de la ISS.

9. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la modificación de la enfermedad a largo plazo dura al menos 13 semanas tras la última administración de la ISS.

10. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que el tratamiento da como resultado la modificación de la enfermedad a largo plazo del asma, en la que el asma es asma alérgica.

11. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la ISS es 1018 ISS.

12. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en la que la ISS es 5'Nx (TCG (Nq) ) yNw (X1X2CGX2'X1' (CG) p) z en la que N son nucleósidos con x = 0-3, y = 1-4, w = -2, -1, 0, 1 ó 2, p= 0 ó 1, q = 0, 1 ó 2, y z = 1-20, en la que X1 y X1', X2 y X2' son auto-complementarios, y en la que la T de 5' de la secuencia (TCG (Nq) ) y está a 0-3 bases del extremo 5' del polinucleótido.

13. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la ISS es ISS sin conjugar.

14. La composición para el uso según cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la que la ISS comprende uniones fosforotioato.

Figura 1

Inhibición de la inducción de genes de tipo Th2 mediante pretratamiento con 1018 ISS

Día 0 Día 0 Día 0

Día -1 Día -1 Día -1

Día -3 Día -3 Día -3

Día -5 Día -5 Día -5

Día -7 Día -7 Día -7

Proporción gen/Ubiquitina Proporción gen/Ubiquitina Proporción gen/Ubiquitina Día 0 Día 0

Día 0 Día -1 Día -1

Día -1 Día -3 Día -3

Día -3 Día -5 Día -5

Día -5 Día -7 Día -7

Día -7

Proporción gen/Ubiquitina Proporción gen/Ubiquitina Proporción gen/Ubiquitina RW/RW/Sol. salina RW/Sol. salina/Sol. salina 41

Figura 2

Inhibición de la inducción de genes de tipo Th2 mediante pretratamiento con 1018 ISS

Día 0 Día 0

Día -1 Día -1

Día -3 Día -3

Día -5 Día -5

Día -7 Día -7

Proporción gen/Ubiquitina Proporción gen/Ubiquitina

RW/RW/Sol. salina RW/Sol. salina/Sol. salina

Figura 3

IL-4 en líquido LBA

Barras claras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a solución salina y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a solución salina Barras rayadas: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Barras negras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con 1018 ISS, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Figura 4

IL-10 en líquido LBA

Barras claras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a solución salina y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a solución salina Barras rayadas: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Barras negras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con 1018 ISS, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Figura 5

Eosinófilos en LBA

Barras claras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a solución salina y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a solución salina Barras rayadas: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con solución salina, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Barras negras: sensibilizados con ambrosía, exposición semanal a ambrosía y tratamiento con 1018 ISS, después de dos semanas de descanso reexposición a ambrosía Figura 6

Citocinas en líquido LBA después de 1-25 rondas de tratamiento con 1018 ISS

Sensibilizados con ambrosía y expuestos a ambrosía Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía y tratados con 1018 ISS

Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía durante un total de 25 rondas y tratados con 1018 ISS durante 12 rondas que después se pararon Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía y tratados con 1018 ISS durante 12 rondas y después se pararon ambos Figura 7

El tratamiento a largo plazo con TOLAMBA o 1018 ISS conduce a la ausencia de sensibilidad al alérgeno en las vías respiratorias

Citocinas en líquido LBA después de 1-25 rondas de tratamiento con 1018 ISS o TOLAMBA

Sensibilizados con ambrosía y

expuestos a ambrosía Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía y tratados con 1018 ISS Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía y tratados con TOLAMBA

Figura 8

Parada Parada

Parada Rondas de tratamiento Rondas de tratamiento Rondas de tratamiento Sensibilizados con ambrosía y expuestos a solución salina 17x

Sensibilizados con ambrosía y

expuestos a ambrosía 17x Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía 17x, y tratados con 1018 ISS 17x Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía 17x, y tratados con 1018 ISS 13x Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía 13x, y tratados con 1018 ISS 13x Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía 7x, y tratados con 1018 ISS 13x, y se administró isotipo GL113 de la sem. 13 a la 17

Sensibilizados con ambrosía, expuestos a ambrosía 7x, y tratados con 1018 ISS 13x, y se administraron anticuerpos hacia IFN-γ de la sem. 13 a la 17