Un método para explorar un agente para tratar diabetes, que comprende

[1] una etapa de permitir que (1) un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos representada por la SEC ID Nº:

2, (2) un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos representada por la SEC ID Nº: 2 o una secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº: 2 en la que de 1 a 10 aminoácidos de la misma están delecionados, sustituidos y/o insertados y que también se une a biguanida y/o inhibe la activación de AMPK por biguanida, debido a sobre-expresión, (3) un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene una identidad del 90% o más con la secuencia de aminoácidos representada por la SEC ID Nº: 2 y que también se une a biguanida y/o inhibe la activación de AMPK por biguanida debido a sobre-expresión o (4) una célula transformada con un vector que comprende un polinucleótido que codifica el polipéptido descrito en (1) a (3) esté en contacto con una sustancia a ensayar en coexistencia de biguanida y

[2] una etapa de analizar la unión de dicho polipéptido con la sustancia a ensayar

Método para identificar la proteína diana de un agente y método para explorar un agente terapéutico para diabetes usando la proteína diana.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un método para explorar un agente terapéutico para diabetes usando una proteína diana encontrada por el método de identificación de la presente invención.

Antecedentes de la invención

Un gran número de compuestos de bajo peso molecular usados como agentes farmacéuticos todavía permanecen poco claros con respecto a sus mecanismos de acción, a pesar de sus distintas acciones farmacológicas. En general, la mayoría de los agentes farmacéuticos actúan sobre proteínas específicas in vivo y alteran las funciones de las proteínas e inducen acciones farmacológicas como resultado. En los agentes cuyos mecanismos de acción están poco claros, las proteínas como sus dianas no se han identificado. En años recientes, como resultado del avance en la aclaración del sistema de transducción de señal in vivo a nivel molecular, se ha identificado un gran número de moléculas de proteínas específicas necesarias para inducir acciones farmacológicas específicas. Como resultado, el desarrollo de los agentes denominados agentes de dirección de molécula que se dirigen a tales moléculas de proteína específicas últimamente está avanzando, y su proporción está aumentando rápidamente. En el caso de un compuesto cuya proteína diana es evidente, su mecanismo funcional in vivo está claro y la estructura del compuesto se puede modificar con el uso de su potencia para unirse a dicha proteína o un cambio en la actividad enzimática poseída por la proteína como el índice. Por tanto, es fácil realizar estudios con el objetivo de mejorar la farmacocinética, que incluye absorción y degradación, así como actividad farmacológica, de tal forma que es notablemente ventajosa en agentes en desarrollo. En el caso de un compuesto cuya proteína diana no está clara, por el contrario, no es sencillo intentar la mejora de su estructura química con el propósito de mejorar la actividad, incluso cuando se encuentra una acción farmacológica distinta (compárese con Referencia No de patente 1). Además, aunque existen diferencias en grado, los agentes farmacéuticos generalmente tienen tanto acciones farmacológicas deseables (efectos principales) como acciones farmacológicas indeseables (efectos secundarios adversos). Incluso en el caso de agentes de dirección de molécula cuyas proteínas diana llevan los principales efectos y ya están en el mercado, existen muchos casos en los que la información con respecto a las proteínas diana concerniente a los efectos secundarios adversos es escasa, y esto provoca el problema de necesitar tiempo y costes para estudiar la mejora para evitar los efectos secundarios adversos (compárese con Referencia No de Patente 1). De hecho, existe un gran número de agentes farmacéuticos cuyas acciones farmacológicas significativas se conocen, pero sus proteínas diana son poco claras. Como ejemplos representativos, se pueden citar la biguanida, que se ha usado durante mucho tiempo como un agente para tratar la diabetes (compárese con Referencia No de Patente 2) y la talidomida, en la que su presencia se ha reconsiderado en vista de su efecto terapéutico espectacular sobre mieloma múltiple (compárese con Referencia No de Patente 3). Aunque la biguanida tiene una acción hipoglucemiante significativa y la talidomida una acción inhibidora de la angiogénesis significativa, la proteína diana directa para cada uno de estos agentes in vivo no se ha identificado. Por tanto, a pesar de las acciones farmacológicas útiles que poseen estos agentes, fue difícil realizar estudios de mejora para potenciar los efectos. Además de esto, se conocen efectos secundarios adversos graves, tales como acidosis láctica, por biguanida (compárese con Referencia No de Patente 4) y teratogenia por talidomida (compárese con Referencia No de Patente 3), pero los estudios para evitar estos problemas no han avanzado, debido a que sus dianas son poco claras. Por tanto, se demanda la identificación de las proteínas diana de estos agentes.

De forma convencional, era general un método en el que se detecta una proteína que se une directamente a un compuesto de bajo peso molecular y se separa por medios físicos y/o químicos como un medio para identificar una proteína diana sobre la que actúa dicho compuesto. Por ejemplo, se conoce un método en el que se modifica una parte de la estructura de un compuesto y se une a perlas de afinidad de alto peso molecular y una proteína diana unida al compuesto se separa y se purifica por gravedad o fuerza física similar. Además, se realiza un método en el que una etiqueta a usar como un marcador se une a una parte de la estructura de un compuesto y la proteína diana unida a dicho compuesto se detecta químicamente (compárese con Referencia No de Patente 5). En años recientes, también se han realizado intentos para explorar e identificar, a partir de una genoteca de ADNc, un fragmento génico que codifica una proteína que se une al compuesto de interés, mediante un método de dos híbridos en levadura (compárese con Referencia No de Patente 6), un método de presentación en fagos (compárese con Referencia No de Patente 7) y técnicas de biología molecular similares. Sin embargo, a pesar de los intentos que se han mencionado anteriormente por diversos métodos, no es frecuente un caso en el que una proteína diana de un agente se identificó realmente a partir de los estudios realizados en este campo hasta ahora. Los motivos de la baja frecuencia de éxito incluyen que es necesario modificar una parte de la estructura de un compuesto debido a que perlas o una etiqueta se unen al compuesto a usar como la sonda en cada caso de los métodos que se han mencionado anteriormente, de tal forma que es inevitable explorar con respecto a una proteína que se une a una estructura artificial diferente del compuesto original (compárese con Referencias No de Patente 1 y 5). Es decir, esto se convierte en un motivo de identificar erróneamente, como la proteína diana, una proteína no específica que se une a una etiqueta, perla, un complejo de los mismos con un compuesto o sustancia artificial similar que es diferente del agente que tiene la actividad farmacológica original. Además, aunque es esencial para el propósito de encontrar la verdadera proteína diana aplicar la modificación de la estructura de un compuesto a una región que no ejerza influencia sobre la acción farmacológica de dicho compuesto, los agentes y compuestos que tienen dianas poco claras son generalmente pobres en información con respecto a la correlación entre sus estructuras y actividades farmacológicas, de tal forma que existen muchos casos en los que se tienen que usar compuestos modificados en regiones opcionales. Debido a esto, existe una alta frecuencia de seleccionar un compuesto que ha perdido su actividad farmacológica original como la sonda. Esencialmente, es deseable verificar en primer lugar que dicho compuesto al que se ha añadido una etiqueta o perla por modificación todavía mantiene su actividad farmacológica original y después usar el mismo como la sonda, pero ya que la permeabilidad de membrana celular, estabilidad y diversos parámetros similares ejercen influencias, no es sencillo determinar la presencia o ausencia de la actividad farmacológica. Además, ya que la modificación de la estructura de los compuestos requiere tiempo, costes y técnicas especiales, esto es la causa de que los métodos que se han mencionado anteriormente difícilmente se conviertan en un medio de estudio de propósito general. Por otro lado, es posible verificar la unión de una proteína especificada a un compuesto marcado sustituyendo un elemento en la molécula de un compuesto con un radioisótopo (su estructura es igual que antes del marcado), pero ya que no es una modificación que se pueda fijar, no es sencillo explorar la proteína diana a partir de un gran número de proteínas. Además, este método tiene la desventaja de que el compuesto se convierte en inestable por el marcado y los costes aumentan. Como otro motivo de la baja proporción de éxito de exploración de diana de compuesto por los métodos convencionales se puede ejemplificar un punto que ya que cada uno de los métodos que se han mencionado anteriormente realiza la detección y separación de una diana usando la unión directa de un compuesto con una proteína como el índice, es difícil conseguir el hallazgo de diana cuando la afinidad de unión entre el compuesto y la proteína diana es baja. De hecho, en cada uno de los pocos casos de éxito al encontrar una diana por los métodos que se han mencionado anteriormente,...

1. Un método para explorar un agente para tratar diabetes, que comprende

2. Un método de exploración de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además una etapa de confirmar que la sustancia activa la actividad de AMPK y/o tiene una actividad terapéutica para diabetes.