Método para el diagnóstico de accidente cerebrovascular en un sujeto que se sospecha que padece el mismo,

que comprende detectar glutatión-S-transferasa P (GSTP-1), o una variante, un mutante o una isoforma de la misma, en una muestra de sangre, plasma o suero extraída de un sujeto, en el que un nivel elevado de GSTP-1, en comparación con un control, es indicativo de accidente cerebrovascular

Método de diagnóstico para trastornos relacionados con daño cerebral.

Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere a un método de diagnóstico para accidente cerebrovascular.

No está disponible actualmente ningún marcador biológico para el diagnóstico de rutina de trastornos relacionados con daño cerebral incluyendo enfermedades cerebrovasculares, demencia y enfermedades neurodegenerativas. Esta invención se refiere al uso de líquido cefalorraquídeo de pacientes fallecidos como un modelo para el descubrimiento de marcadores de trastornos relacionados con daño cerebral, y al uso de tales marcadores en el diagnóstico de trastornos relacionados con daño cerebral en seres humanos y animales.

A lo largo de las últimas dos décadas, se han estudiado varios marcadores biológicos (biomarcadores) en el líquido cefalorraquídeo (LCR) y suero de pacientes con trastornos relacionados con daño cerebral, incluyendo creatina cinasa-BB [1], lactato deshidrogenasa [2], proteína básica de la mielina [3], proteína S100 [4], enolasa específica de neuronas (NSE) [5], proteína ácida fibrilar de la glía [6] y tau [7]. La mayoría de ellas no han demostrado ser indicadores útiles de la extensión del daño cerebral ni factores pronóstico precisos del estado clínico y el desenlace funcional. De hecho, el valor de diagnóstico de los biomarcadores para trastornos relacionados con daño cerebral se ha visto dificultado por su aparición tardía y un máximo retrasado tras el acontecimiento del daño, su escasa sensibilidad y especificidad, y el entendimiento limitado de los mecanismos que gobiernan la liberación de estas moléculas en el LCR y, en última instancia, en la sangre. Como resultado de estas limitaciones, el uso de biomarcadores de trastornos relacionados con daño cerebral actualmente está limitado al entorno de investigación y no se ha recomendado ninguno para la evaluación de rutina [8].

El documento WO 01/42793 se refiere a un ensayo de diagnóstico para accidente cerebrovascular en el que la concentración de proteína de unión a ácidos grasos cardiaca o cerebral (H-FABP o B-FABP) se determina en una muestra de líquido corporal.

Sumario de la invención

De manera ideal, un biomarcador para el diagnóstico, la monitorización y el pronóstico de trastornos relacionados con daño cerebral debe incluir al menos las siguientes características: (1) debe ser específico de cerebro; (2) debido a las dificultades obvias de obtener muestras de LCR en pacientes, la detección en líquidos corporales más fácilmente disponibles tales como sangre, suero, plasma, orina, saliva o lágrimas es sumamente deseable; (3) debe aparecer muy temprano; (4) su nivel máximo, alternativamente el área bajo la curva de concentraciones secuenciales, deben reflejar la extensión del daño cerebral; finalmente (5) debe ser indicativo del desenlace funcional. Se muestran en el presente documento nuevos biomarcadores de trastornos relacionados con daño cerebral.

Se describe cómo se han identificado proteínas como nuevos biomarcadores de diagnóstico para trastornos relacionados con daño cerebral usando un análisis basado en proteómica del LCR de pacientes fallecidos como un modelo de daño cerebral masivo. Se han descrito ensayos de diagnóstico para accidente cerebrovascular basados en tales marcadores que usan FABP en el documento WO 01/42793 y se han descrito ensayos que usan RNA-BP, UFD1 y NDKA en el documento WO2005/029088. Se han descrito ensayos de diagnóstico para la enfermedad de Huntington que usan clusterina en el documento WO 2006/061610. Se han descrito ensayos de diagnóstico para la enfermedad de Alzheimer que usan apolipoproteína A-IV, factor H del complemento, factor 3a del complemento y alfa-2-macroglobulina en el documento WO 2006/035237. Se han descrito ensayos de diagnóstico para la enfermedad de Creutzfeld-Jakob (ECJ) y su forma variante vECJ que usan FABP en el documento WO 01/67108, y se han descrito ensayos similares basados en isoformas de hemoglobina y cistatina C en el documento WO 2004/040316. Se ha descrito un ensayo de diagnóstico adicional para ECJ y vECJ basado en hemoglobina beta en el documento WO 2006/061609. Se dan a conocer métodos y composiciones referentes a la enfermedad de Alzheimer en el documento WO 2006/021810. El uso de los polipéptidos según la presente invención puede validarse de una manera similar.

La presente invención proporciona lo siguiente:

Los polipéptidos (también denominados proteínas) útiles en la presente invención son aquéllos para los cuales se encontró el nivel o bien aumentado o bien disminuido en el líquido cefalorraquídeo de pacientes fallecidos en comparación con el líquido cefalorraquídeo de donantes sanos. En este contexto, el término "aumentado" significa que el polipéptido se produce exclusivamente en LCR de paciente fallecido en oposición a LCR de paciente sano, o que se produce en LCR de paciente fallecido a un nivel superior que en LCR de paciente sano, tal como al menos 1,2 veces superior, preferiblemente al menos 1,5 veces superior, o incluso al menos 8-10 veces superior. El término "disminuido" significa que el polipéptido está ausente en LCR de paciente fallecido en oposición a LCR de paciente sano, o que se produce en LCR de paciente fallecido a un nivel inferior que en LCR de paciente sano, tal como inferior en un factor de 0,8 o menos, preferiblemente de 0,7 o menos.

Es una predicción razonable que todos estos polipéptidos serán útiles como marcadores para trastornos relacionados con daño cerebral. Esto se ha validado para ciertos polipéptidos, tal como se describe en los ejemplos a continuación. El uso de otros polipéptidos se ha validado mediante los datos en los documentos WO 01/42793; WO 01/67108; WO2004/040316; WO 2005/029088; WO 2006/035237; WO 2006/061609 y WO 2006/061610; todos los cuales se incorporan al presente documento como referencia.

Los polipéptidos (también denominados proteínas) útiles en la presente invención no se limitan a las secuencias correspondientes a los números de registro en las tablas 1, 2, 3 y 4, e incluyen variantes, mutantes e isoformas de las mismas. Una variante se define como una variación que se produce de manera natural en la secuencia de un polipéptido que tiene un alto grado de homología con la secuencia dada, y que tiene sustancialmente las mismas propiedades funcionales e inmunológicas. Un mutante se define como una variante creada artificialmente....

1. Método para el diagnóstico de accidente cerebrovascular en un sujeto que se sospecha que padece el mismo, que comprende detectar glutatión-S-transferasa P (GSTP-1), o una variante, un mutante o una isoforma de la misma, en una muestra de sangre, plasma o suero extraída de un sujeto, en el que un nivel elevado de GSTP-1, en comparación con un control, es indicativo de accidente cerebrovascular.

2. Método de seguimiento de la progresión de un accidente cerebrovascular en un sujeto al que se le diagnosticó previamente que padecía el mismo, que comprende medir los niveles de GSTP-1, o una variante, un mutante o una isoforma de la misma, en múltiples muestras de sangre, plasma o suero extraídas de un sujeto en momentos diferentes y determinar el cambio en los niveles de la GSTP-1 en la muestra sometida a prueba más recientemente en comparación con los niveles en muestras sometidas a prueba previamente y correlacionar tal cambio con la progresión, regresión o estabilización de dicho accidente cerebrovascular.

3. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que se usa un anticuerpo frente a GSTP-1 en la detección o la determinación de la concentración.

4. Método según la reivindicación 1 ó 2, en el que la GSTP-1 se detecta mediante la determinación de al menos un autoanticuerpo frente a la misma.

5. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que se usan dos o más marcadores seleccionados de anticuerpos frente a GSTP-1 en un pocillo individual de una placa de microtitulación de ELISA.

6. Método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que GSTP-1 y al menos otro polipéptido se someten a ensayo por separado, y se usa un algoritmo de predicción para el diagnóstico, en el que dicho al menos otro polipéptido es uno para el cual el nivel está o bien aumentado o bien disminuido en el líquido cefalorraquídeo de pacientes fallecidos en comparación con el líquido cefalorraquídeo de donantes sanos.