INHIBIDORES PEPTIDICOS DE FUSION DE LARGA VIDA CONTRA INFECCIONES VIRALES.

Conjugado antifusogénico que comprende albúmina sérica y un péptido antiviral modificado,

comprendiendo el péptido antiviral modificado un péptido que muestra actividad antiviral y antifusógenia así como un grupo maleimido acoplado al mismo, bien sin utilizar un grupo de enlace o bien a través de un grupo de enlace que es ácido (2-amino)etoxiacético (AEA) o ácido [2-(2-amino)etoxi]etoxiacético (AEEA), estando unido de forma covalente el péptido antiviral modificado a través del grupo maleimido a un grupo tiol de la albúmina sérica

Inhibidores peptídicos de fusión de larga vida contra infecciones virales.

Campo de la invención

Esta invención se refiere a péptidos modificados que son inhibidores de la actividad viral y presentan propiedades antifusogénicas. En particular, esta invención se refiere a inhibidores peptídicos modificados del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus respiratorio sincitial (VRS), el virus de la parainfluenza humana (VPH), el virus del sarampión (VS) y el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS), con una larga vida de acción, para el tratamiento de las respectivas infecciones virales, péptidos modificados que se conjugan a vehículos endógenos. En particular, la invención se refiere a conjugados de los péptidos modificados y albúmina sérica.

Antecedentes de la invención

Los eventos de fusión de membranas, si bien son comunes en los procesos biológicos celulares normales, también están implicados en diversos estados patogénicos, incluyendo, por ejemplo, la entrada de virus con envoltura en las células. Son conocidos péptidos que inhiben o alteran de otras formas los eventos asociados a la fusión de membrana, incluyendo, por ejemplo, la inhibición de la transmisión retroviral a células no infectadas. Por ejemplo, los péptidos sintéticos DP-107 y DP-178, derivados de dominios separados dentro de la glicoproteína de transmembrana ("TM") gp41 del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 ("VIH-1"), son potentes inhibidores de la infección por VIH-1 y la fusión célula-célula inducida por VIH.

Lambert y col., "Peptides from Conserved Regions of Paramyxovirus Fusion (F) Proteins are Potent Inhibitors of Viral Fusion", Proc. Natl. Acad. Science U.S.A., 5 de Marzo de 1996, Vol. 93 (5), pp. 2186-91, describen que los péptidos sintéticos DP-107 y DP-178 (T-20), derivados de dominios separados dentro de la proteína de transmembrana (TM) gp41 del virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 ("VIH-1"), son potentes inhibidores de la infección y fusión por VIH-1. Utilizando una estrategia de búsqueda asistida por ordenador (computerized antiviral searching technology, C.A.S.T.) basada en la estructura secundaria prevista para DP-107 y DP-178 (T-20), Lamber y col. identificaron dominios de héptadas repetidas conservadas análogos a las regiones DP-107 y DP-178 de gp41 de VIH-1 dentro de las glicoproteínas de otros virus fusogénicos. Péptidos antivirales derivados de tres paramixovirus representativos, el virus respiratorio sinticial (VRS), el virus de la parainfluenza humana de tipo 3 (VPIH-3) y el virus del sarampión (VS), bloquearon la formación de sincitios mediada por virus homólogos y mostraron valores EC₅₀ en el rango entre 0,015 y 0,250 µM. Además, dichos péptidos eran muy selectivos con respecto al virus de origen.

De forma similar, los documentos US 6.013.263, 6.017.536 y 6.020.459, incorporados aquí en su totalidad, revelan que tanto el péptido DP178 de 36 aminoácidos, que corresponde a los aminoácidos 638 a 673 de gp41 del aislado LAI de VIH-1 (VIH-1_LAI), como el péptido DP107 de 38 aminoácidos, que corresponde a los aminoácidos 558-595 de gp41 de VIH-1_LAI, muestran una potente actividad anti-VIH-1.

Si bien muchos de los péptidos antivirales o antifusogénicos descritos en la técnica muestran una potente actividad antiviral y/o antifusogénica, estos péptidos adolecen de una breve vida media plasmática in vivo, fundamentalmente debido a la rápida eliminación del suero y a la actividad peptidasa y proteasa. Esto reduce a su vez la actividad antiviral efectiva de los péptidos. Por consiguiente, se requiere un método para prolongar la vida media de los péptidos antivirales y/o antifusogénicos existentes y proporcionar una mayor duración de la acción de estos péptidos in vivo.

Sumario de la invención

La presente invención satisface éstas y otras necesidades y se refiere a un conjugado que comprende un péptido modificado que tiene actividad antiviral y actividad antifusogénica. Estos péptidos modificados proporcionan una mayor estabilidad in vivo y una menor susceptibilidad a la degradación por peptidasa o proteasa. De este modo, dichos péptidos modificados reducen al mínimo, por ejemplo, la necesidad de una administración más frecuente, o incluso continua, de los péptidos. Los productos de diversas realizaciones de la presente invención se pueden utilizar, por ejemplo, como medicamentos profilácticos y/o como tratamiento para infecciones por una serie de virus, incluyendo el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus respiratorio sinticial humano (VRS), el virus de la parainfluenza humana (VPH), el virus del sarampión (VS) y el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS). La modificación de otros péptidos implicados en la transfección viral (por ejemplo virus de la hepatitis, el virus de Epstein-Barr y otros virus relacionados) también entra dentro del alcance de la invención.

Esta invención se refiere a modificaciones químicamente reactivas de péptidos que muestran actividad antiviral y antifusogénica, de tal modo que los péptidos modificados pueden reaccionar con las funcionalidades disponibles en los componentes sanguíneos formando enlaces covalentes estables. El grupo reactivo es una maleimida que es reactiva frente a un grupo tiol en una proteína sanguínea móvil tal como es la albúmina. En consecuencia, la invención proporciona un conjugado antifusógeno que comprende albúmina sérica y un péptido antiviral modificado, comprendiendo el péptido antiviral modificado un péptido que presenta actividad antiviral y antifusógenica así como un grupo maleimida acoplado al mismo, bien sea sin utilizar un grupo enlazante o a través de un grupo enlazante que es ácido (2-amino)etoxiacético (AEA) o ácido [2-(2-amino)etoxi]etoxiacético (AEEA), estando unido covalentemente el péptido antiviral modificado a través del grupo maleimida a un grupo tiol en la albúmina sérica.

En particular, la invención se refiere a modificaciones químicamente reactivas de este tipo en las que el péptido es DP107 o DP178 o análogos de los mismos, incluyendo péptidos consistentes en secuencias de aminoácidos de otros virus (no VIH) que se corresponden con la región gp41 del VIH de la que se derivan el DP107 y el DP178 y que muestran actividad antiviral o antifusogénica. Más en particular, estos péptidos muestran preferentemente actividad antiviral contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), el virus respiratorio sinticial humano (VRS), el virus de la parainfluenza humana (VPH), el virus del sarampión (VS) y el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS). La invención también se refiere a modificaciones químicamente reactivas de los péptidos de SEQ ID NO:1 a SEQ ID NO:86. En particular, los péptidos se seleccionan de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:1 a SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 a SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31 a SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63 a SEQ ID NO: 73 o SEQ ID NO: 74 a SEQ ID NO: 86.

La invención también se refiere a composiciones para la prevención y/o el tratamiento de infecciones virales que comprenden un conjugado de un péptido tal como se describe anteriormente. Más en particular, la invención se refiere a composiciones de este tipo para la prevención y/o el tratamiento del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), el virus respiratorio sinticial humano (VRS), el virus de la parainfluenza humana (VPH), el virus del sarampión (VS) y el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS).

Breve descripción de las tablas

La invención se comprenderá mejor con referencia a las Tablas, en las que:

- La Tabla 1 muestra una lista de los aminoácidos comunes junto con sus abreviaturas de una letra y de tres letras, y grupos protectores comunes.

- La Tabla 2 muestra truncamientos carboxilo de DP178.

- La Tabla 3 muestra truncamientos amino de DP178.

- La Tabla 4 muestra truncamientos carboxilo de DP107.

- La Tabla 5 muestra truncamientos amino de DP107.

- La Tabla 6 muestra truncamientos carboxilo de análogos de DP178 de VIH-2_NIHZ.

- La Tabla 7 muestra truncamientos amino de análogos de DP178 del VIH-2_NIHZ.

- La Tabla 8 muestra truncamientos carboxilo de análogos de DP107 de región F2 del VRS.

- La Tabla 9 muestra truncamientos amino de análogos de DP107 de región F2 del VRS.

- La Tabla 10 muestra truncamientos carboxilo de análogos de DP178 de región F1 del VRS.

- La Tabla 11 muestra truncamientos...

1. Conjugado antifusogénico que comprende albúmina sérica y un péptido antiviral modificado, comprendiendo el péptido antiviral modificado un péptido que muestra actividad antiviral y antifusógenia así como un grupo maleimido acoplado al mismo, bien sin utilizar un grupo de enlace o bien a través de un grupo de enlace que es ácido (2-amino)etoxiacético (AEA) o ácido [2-(2-amino)etoxi]etoxiacético (AEEA), estando unido de forma covalente el péptido antiviral modificado a través del grupo maleimido a un grupo tiol de la albúmina sérica.

2. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque el péptido es DP178 o DP107 o análogos de los mismos.

3. Conjugado según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el conjugado muestra actividad antiviral y antifusógenia contra el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

4. Conjugado según la reivindicación 3, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:1 a SEQ ID NO:9.

5. Conjugado según la reivindicación 3, caracterizado porque el péptido es DP178 o DP107.

6. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque el conjugado muestra actividad antiviral y antifusogénica contra el virus respiratorio sincitial humano (VRS).

7. Conjugado según la reivindicación 6, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:10 a SEQ ID NO:30.

8. Conjugado según la reivindicación 7, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:14 a SEQ ID NO:17 y SEQ ID NO:29.

9. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque el conjugado muestra actividad antiviral y antifusogénica contra el virus de la parainfluenza humana (VPIH).

10. Conjugado según la reivindicación 9, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:31 a SEQ ID NO:62.

11. Conjugado según la reivindicación 10, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:38 a SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:52 y SEQ ID NO:58.

12. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque el conjugado muestra actividad antiviral y antifusogénica contra el virus del sarampión (VS).

13. Conjugado según la reivindicación 12, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:74 a SEQ ID NO:86.

14. Conjugado según la reivindicación 13, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:81 y SEQ ID NO:84.

15. Conjugado según la reivindicación 1, caracterizado porque el péptido muestra actividad antiviral y antifusogénica contra el virus de la inmunodeficiencia del simio (VIS).

16. Conjugado según la reivindicación 15, caracterizado porque el péptido se selecciona de entre el grupo consistente en SEQ ID NO:63 a SEQ ID NO:73.

17. Conjugado según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado porque el grupo maleimida está acoplado al péptido a través de un grupo de enlace.

18. Conjugado antifusogénico según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para su uso en la prevención o el tratamiento de infecciones virales.