VACUNA QUE COMPRENDE GP120 Y NEF Y/O TAT PARA LA INMUNIZACIÓN CONTRA EL VIH.

Uso de a) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH; o b) una proteína o polinucleótido de Nef del VIH;

o c) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH unido a una proteína o polinucleótido de Nef del VIH; y una proteína o polinucleótido de gp120 del VIH en la fabricación de una vacuna adecuada para una administración de sensibilización-refuerzo para la inmunización profiláctica o terapéutica de seres humanos contra el VIH, en la que la dosis de sensibilización es la proteína gp120 del VIH y la proteína Tat del VIH y/o la proteína Nef del VIH, y la dosis de refuerzo es el polinucleótido de gp120 del VIH y el polinucleótido de Tat del VIH y/o el polinucleótido de Nef del VIH, y en la que el polinucleótido se libera a través de un enfoque de bombardeo

La presente invención se refiere a nuevos usos de proteínas del VIH en medicina y composiciones de vacuna que contienen dichas proteínas de VIH. En particular, la invención se refiere al uso de las proteínas Tat del VIH y gp120 del VIH en combinación. Además, la invención se refiere al uso de las proteínas Nef y gp120 del VIH en combinación. La invención también se refiere a ADN que codifica Tat y/o Nef del VIH (en lo sucesivo en el presente documento ADN de Tat y/o ADN de Nef) y ADN que codifica la proteína gp120 del VIH (en lo sucesivo en el presente documento ADN de gp120) y a vectores que comprenden dichos ADN. La invención se refiere, en particular, a administrar las proteínas y/o ADN en un programa de sensibilización-refuerzo a través de un enfoque de bombardeo de partículas.

El VIH-1 es la causa principal del síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), que se considera uno de los mayores problemas de salud en todo el mundo. Aunque se han realizado exhaustivas y extensas investigaciones en todo el mundo para producir una vacuna, hasta ahora dichos esfuerzos no han tenido éxito.

La glicoproteína de la cubierta del VIH gp120 es la proteína viral que se usa para la fijación a la célula huésped. Esta fijación está mediada por la unión a dos moléculas de superficie de los linfocitos T colaboradores y de los macrófagos, conocidos como CD4, y a uno de los dos receptores de quimicotas CCR-4 o CXCR-5. La proteína gp120 se expresa primero como una molécula precursora más grande (gp120), que después se escinde postraduccionalmente para dar gp120 y gp41. La proteína gp120 se conserva sobre la superficie del virión mediante unión a la molécula gp41, que se inserta en la membrana del virus.

La proteína gp120 es la diana principal de los anticuerpos neutralizantes, pero, por desgracia, las regiones más inmunogénicas de las proteínas (bucle V3) son también las partes más variables de la proteína. Por tanto, se piensa que el uso de gp120 (o de su precursora, gp160) como antígeno de vacuna para producir anticuerpos neutralizantes es de uso limitado para una vacuna ampliamente protectora. La proteína gp120 también contiene epítopos que son reconocidos por linfocitos T citotóxicos (LTC). Estas células efectoras son capaces de eliminar las células infectadas por virus y, por tanto, constituyen un segundo mecanismo inmunitario antiviral fundamental. En contraste con las regiones diana de los anticuerpos neutralizantes. Algunos epítopos de los LTC parecen estar relativamente conservados entre diferentes cepas de VIH, Por este motivo, gp120 y gp160 se consideran útiles componentes antigénicos en las vacunas que están dirigidas a producir respuestas inmunitarias celulares (particularmente de LTC).

Se han descrito proteínas que no pertenecen a la cubierta del VIH-1 e incluyen, por ejemplo, proteínas de la estructura interna, tales como los productos de los genes gag y pol y otras proteínas estructurales tales como Rev, Nef, Vif y Tat (Greene y col., New England J. Med, 324, 5, 308 et seq (1991) y Bryant y col. (Ed. Pizzo), Pediatr. Infect. Dis. J., 11, 5, 390 y sig.(1992).

Las proteínas Tat y Nef del VIH son proteínas tempranas, es decir, se expresan en estadios tempranos de la infección y en ausencia de proteínas estructurales.

En una presentación en una conferencia (C. David Pauza, Immunization with Tat toxoid attenuates SHIV89.6PD infection in rhesus macaques, 12th Cent Gardes meeting, Mames-La-Coquette, 26.10.1999), se describieron experimentos en los se inmunizó a macacos rhesus con el toxoide Tat solo o en combinación con una vacuna de combinación con la glicoproteína de la cubierta gp160 (una dosis del virus variolovacunal recombinante y una dosis de la proteína recombinante). No obstante, los resultados observados mostraron que la presencia de la glicoproteína de la cubierta no proporcionaba ventajas sobre los experimentos realizados con Tat sola.

No obstante, los autores han descubierto que el inmunógeno que contiene Tat y/o Nef (especialmente una proteína de fusión Nef-Tat) actúa de forma sinérgica con gp120 en la protección de monos rhesus de una exposición a patógenos con el virus quimérico de la inmunodeficiencia humana-simio (VIHS). Hasta la fecha, la infección por SHIV de macacos rhesus se considera el modelo animal más relevante para el SIDA humano. Por tanto, los autores han usado este modelo preclínico para evaluar la eficacia protectora de vacunas que contienen un antígeno de gp120 y un antígeno que contiene Nef y Tat bien solo o en combinación. El análisis de dos marcadores de infección viral y patogenicidad, el porcentaje de células positivas para CD4 en la sangre periférica y la concentración de genomas de ARN de SHIV libres en el plasma de monos indicó que los dos antígenos actuaban en sinergia. La inmunización con gp120 o NefTat + Nef de SIV solos no dio como resultado ninguna diferencia en comparación con la inmunización con un adyuvante solo. En contraste, la administración de la combinación de los antígenos gp120 y NefTat + Nef de SIV dio como resultado una marcada mejora de los dos parámetros mencionados con anterioridad en todos los animales de dichos grupos experimentales concretos.

Como se ha descrito con anterioridad, la proteína NEfTat, la proteína Nef y la proteína gp120 del SIV dan una respuesta potenciada sobre la que se observa cuando se usan NefTat + Nef del SIV o la gp120 por separado. Esta respuesta potenciada, o sinergia, se puede observar en una disminución de la carga viral como resultado de la vacunación con estas proteínas combinadas. Como alternativa, o de forma adicional, la respuesta potenciada se manifiesta con un mantenimiento de los niveles de CD4+ sobre los niveles observados en ausencia de vacunación con NefTat del VIH, Nef del SIV y gp120 del VIH. El efecto sinérgico se atribuye a la combinación de gp120 y Tat o de gp120 y Nef, o gp120 y Nef y Tat.

Se ha descubierto que no solo las proteínas Nef, Tat o NefTat se combinan o se administran de forma ventajosa con la proteína gp120. Las mismas ventajas se observan cuando se administra ADN que codifica Nef, tat o NefTat con gp120 (proteína o el ADN correspondiente).

Se ha descubierto que las proteínas anteriores, o el ADN que codifica las proteínas, pueden administrarse de forma ventajosa a través de una estrategia de sensibilización-refuerzo. En un aspecto, la presente invención se refiere a dicha administración a través de un enfoque de bombardeo. De acuerdo con esto, la invención proporciona el uso de:

a) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH; o

b) una proteína o polinucleótido de Nef del VIH; o

c) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH unido a una proteína o polinucleótido de Nef del VIH;

U una proteína o polinucleótido de gp120 del VIH en la fabricación de una vacuna adecuada para una administración de sensibilización-refuerzo para la inmunización profiláctica o terapéutica de seres humanos contra el VIH, en la que la dosis de sensibilización es la proteína gp120 del VIH y la proteína Tat del VIH y/o la proteína Nef del VIH, y la dosis de refuerzo es el polinucleótido de gp120 del VIH y el polinucleótido de Tat del VIH y/o el polinucleótido de Nef del VIH, y en la que el polinucleótido se libera a través de un enfoque de bombardeo.

Se conocen numerosos procedimientos de llevar a cabo un enfoque de bombardeo de partículas. Véase, por ejemplo, el documento WO 91/07487. En un ejemplo ilustrativo, se puede alcanzar aceleración de partículas dirigida por gas con dispositivos tales como los fabricados por Powderject Phanmaceuticals PLC (Oxford, UK) y Powderject Vaccines Inc. (Madison, WI), algunos ejemplos de los cuales se describen en las patentes de EE.UU. nº 5.846.796; 6.010.478; 5.865.796; 5.584.807; y la patente EP nº 0500 799. Esto ofrece un abordaje de liberación sin aguja en el que una formulación en polvo seco de partículas microscópicas, revestidas con una sustancia como un polinucleótido, se acelera a alta velocidad en un chorro de gas helio generado por un dispositivo manual, que propulsa las partículas hacia un tejido diana de interés, habitualmente la piel. Preferentemente, las partículas son perlas de oro de un diámetro de 0,4-4,0 m, más preferentemente de 0,6-2,0 m, y, el polinucleótido, preferentemente ADN, recubre dichas perlas y, después, se introducen en un cartucho para su colocación en la “pistola génica”.

La adición de otras proteínas del VIH o del ADN que las codifica puede además potenciar... [Seguir leyendo]

1. Uso de

a) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH; o

b) una proteína o polinucleótido de Nef del VIH; o

c) una proteína o polinucleótido de Tat del VIH unido a una proteína o polinucleótido de Nef del VIH; y una proteína o polinucleótido de gp120 del VIH en la fabricación de una vacuna adecuada para una administración de sensibilización-refuerzo para la inmunización profiláctica o terapéutica de seres humanos contra el VIH, en la que la dosis de sensibilización es la proteína gp120 del VIH y la proteína Tat del VIH y/o la proteína Nef del VIH, y la dosis de refuerzo es el polinucleótido de gp120 del VIH y el polinucleótido de Tat del VIH y/o el polinucleótido de Nef del VIH, y en la que el polinucleótido se libera a través de un enfoque de bombardeo.

2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el enfoque de bombardeo comprende propulsar partículas a un

tejido diana de interés, normalmente la piel. 3. Uso de acuerdo con la reivindicación 2, en el que las partículas son perlas de oro sobre las que se ha depositado la proteína o el polinucleótido.

4. Uso de acuerdo con la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en el que las partículas se aceleran a velocidad alta

con un chorro de gas helio. 5. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en el que las perlas de oro tiene un diámetro de 0,4-4,0 m.

6. Uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que las perlas de oro tiene un diámetro de 0-6 m, a 2,0 mm

7. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el polinucleótido que codifica nef, tat o gp120 es ADN con optimización de codones. 8. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el polinucleótido que codifica nef,

tat o gp120 está presente en un único vector.

9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el vector comprende los polinucleótidos de nef, tat y gp120 insertados en 3' de un promotor IE1 de HCMV potenciado. 10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9, en el que el vector es p7313 como se muestra en la Figura 22. 11. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que en la formulación de vacuna se

incluyen proteínas reguladoras o estructurales adicionales del VIH, tales como Rev, Vif, Vpu y Vpr, o proteínas derivadas de los genes gag o pol del VIH (y/o polinucleótidos que codifican dichas proteínas reguladoras o estructurales).

12. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, en el que la proteína está adyuvada.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 12, en el que el adyuvante es una combinación de Qs21 y 3D-MPL.