Un lentivirus recombinante que tiene un péptido señal de glucoproteína gp120,

en el que dicho péptido señal de glucoproteína 120 se selecciona del grupo constituido por las secuencias polipeptídicas enumeradas como SEC ID Nº 3-6

Vacuna de VIH.

Campo de la invención

La invención se refiere a una vacuna novedosa para uso en la prevención y/o el tratamiento del SIDA. Más particularmente, la invención se refiere a la producción del virus del SIDA en grandes cantidades para la formulación de una vacuna de VIH/SIDA que es no citolítica y avirulenta.

Antecedentes de la invención

A pesar de los recientes avances en la terapia antivírica, no hay una cura permanente para el SIDA o la infección por VIH. La terapia farmacológica es un escenario prometedor de investigación en términos de proporcionar una terapia eficaz, sin embargo, debido a los efectos secundarios, cumplimiento y gastos, la progresión no ha sido rápida. Agravando estas dificultades está el hecho de que la disponibilidad de dichos fármacos es limitada en los países en desarrollo, donde se estima que ocurrirán la gran mayoría de infecciones por VIH.

Debido al éxito que han tenido las vacunas de enfermedades infecciosas, siendo el más notable contra la viruela y la polio, continúa la búsqueda de una vacuna eficaz contra el SIDA. Se han intentado una variedad de enfoques. Es más, la mayoría del desarrollo de vacuna de VIH-1 se ha concentrado en vacunas de subunidades. La dificultad con el enfoque de vacuna de subunidades ha sido la capacidad de producir una inmunidad óptima. Actualmente, no es conocido exactamente cuáles componentes del antígeno o antígenos de VIH y del sistema inmunitario son necesarios para protección de la infección natural.

La vía preferida para el desarrollo de vacunas en general es usar virus enteros, inactivados o atenuados, tales como la vacuna del virus de la polio inactivado, o vacunas de virus vivos atenuados, tales como la vacuna oral de la polio. Desgraciadamente, este enfoque puede ser problemático como se muestra por el "incidente Cutter", en el que una inactivación inadecuada de la vacuna de la polio dio como resultado la transmisión de polio clínica mediada por vacuna.

Los ensayos de vacuna anteriores han buscado inmunógenos basados en proteína de subunidades recombinante, tales como la glucoproteína 120 (gp120) de cubierta de VIH-1. La mayoría de resultados de este enfoque han sido decepcionantes, aunque pautas de inmunización que emplean tanto virus recombinantes vivos como proteína de subunidades han desencadenado en ciertos individuos tanto CTL CD8+ específicos de cubierta como neutralizantes de cubierta de VIH-1 (Cooney, E. L. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 1882-86 (1993); McElrath, M. J. et al. J. Infect. Dis. 69: 41-47 (1994); Graham, B. S. et al. J. Infect. Dis. 166: 244-52 (1992) y Graham, B. S. et al. J. Infect. Dis. 167: 533-37 (1993)).

De forma interesante, se ha encontrado que la secuencia señal de gp120 de VIH-1, que se designa como NSS (secuencia señal natural), que está asociada con la extensión de la secreción de gp120. Se ha mostrado que la sustitución de NSS por secuencia señal de melitina de abeja melífera o de interleucina 3 de murina (IL-3), produce un alto nivel de producción y una secreción eficaz de gp120 (Li, Y. et al. Virology 204: 266-278 (1994) y Li, Y. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 9606-9611 (1996)). Sin embargo, no es conocido si la secuencia señal de gp120 de VIH-1 tiene un papel en la patogenicidad del virus. El documento WO 00/09703 da a conocer un retrovirus recombinante en el que la secuencia señal natural de la glucoproteína gp120 de cubierta de VIH-1 se ha reemplazado por la secuencia señal de melitina.

Con respecto a las vacunas de VIH, se ha mostrado que la deleción del gen nef de VIH atenúa el virus. Desrosiers y sus asociados han demostrado que la vacunación de macacos Rhesus con VIS con deleción de nef protegía de la exposición a VIS de tipo silvestre (Daniels, M. D. et al. Science 258:1938 (1992); Desrosiers, R. C. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:6353 (1989)) y otros han demostrado que el gen nef es indispensable para la replicación de VIS y VIH (Daniels, M. D. et al. Science 258: 1938 (1992); Gibbs, J. S., et al. AIDS Res. and Human Retroviruses 10:343 (1994); Igarashi, T. et al. J. Gen. Virol. 78:985 (1997); Kestler III, H. W. et al. Cell 65:651 (1991)). Además, se ha encontrado que la deleción del gen nef vuelve al virus no patógeno en un hospedador normalmente susceptible (Daniels, M. D. et al. Science 258:1938 (1992)). Sin embargo, no se ha encontrado que esta deleción proporcione una forma del virus que pueda producirse en grandes cantidades.

En consecuencia, es necesaria una vacuna que sea avirulenta y que pueda producirse en grandes cantidades.

Sumario de la invención

Un primer aspecto de la presente invención se refiere a un lentivirus recombinante que tiene un péptido señal de glucoproteína gp120, en el que dicho péptido señal de glucoproteína 120 se selecciona del grupo constituido por las secuencias polipeptídicas enumeradas en las SEC ID Nº 3-6.

El virus puede volverse avirulento mediante la deleción de una cantidad suficiente del gen nef. El lentivirus recombinante puede un virus de inmunodeficiencia humana recombinante, tal como VIH-1.

Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una vacuna que comprende un lentivirus recombinante del primer aspecto. En ciertas realizaciones, la vacuna comprende adicionalmente un coadyuvante. La invención caracteriza también una vacuna del segundo aspecto para uso en la prevención o el tratamiento de una infección lentivírica en un paciente necesitado de ello.

Resultarán evidentes rasgos y ventajas adicionales de la presente invención a partir de la siguiente descripción detallada y reivindicaciones.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 contiene fotografías de exámenes microscópicos con contraste de fase de células del insecto S. frugiperda (SF21) infectadas con baculovirus de tipo silvestre y recombinante. El panel A exhibe células infectadas con el virus de la poliedrosis nuclear de Autographica californica (AcNPV) de tipo silvestre, en el que se observan células intactas; el panel B exhibe células infectadas con AcNPV recombinante que expresa la glucoproteína 120 de cubierta de virus de inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) con su secuencia señal natural (vAc-gp120-NS), en el que se observa lisis celular; el panel C exhibe células infectadas con AcNPV recombinante que expresa gp120 de cubierta de VIH-1 sin su secuencia señal natural (vAc-gp120-ΔS), en el que se observan células intactas; el panel D exhibe células infectadas con AcNPV recombinante que expresa gp120 de cubierta de VIH-1 en el que la secuencia señal natural está reemplazada por una secuencia señal de melitina (vAc-gp120-MS), en el que se observan células intactas; el panel E exhibe células infectadas con AcNPV recombinante que expresa glucoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (vAc-VSV-G), en el que se observan células intactas; el panel F exhibe células infectadas con AcNPV recombinante que expresa glucoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G) con la secuencia señal natural de la glucoproteína gp120 de VIH-1 adjunta (vAcVSV-G-NS), en el que se observa lisis celular.

La Figura 2 proporciona gráficas que ilustran los efectos de la secuencia señal de glucoproteína 120 (gp120) de cubierta de VIH-1 sobre la muerte celular. La Figura 2A exhibe el porcentaje de células permeabilizadas con azul de tripano (células muertas) después de expresar una glucoproteína recombinante (rgp120) o la proteína glucoproteína G del virus de la estomatitis vesicular (VSV-G) con diferentes secuencias señal. La Figura 2B exhibe los resultados de un ensayo de liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) (kit de detección de citotoxicidad de Boehringer Mannheim). Se midieron las cantidades de LDH liberadas de células SF21 infectadas con virus recombinantes que expresan rgp120 o VSV-G con secuencias señal diferentes cuantificando el tinte de formazano formado en placas ELISA leídas a 490 nm.

La Figura 3 exhibe resultados de electroforesis en gel que proporcionan un análisis de la fragmentación del ADN de células del insecto S. frugiperda (SF21) infectadas con un virus de la poliedrosis nuclear de Autographica californica (AcNPV) que expresa glucoproteína...

1. Un lentivirus recombinante que tiene un péptido señal de glucoproteína gp120, en el que dicho péptido señal de glucoproteína 120 se selecciona del grupo constituido por las secuencias polipeptídicas enumeradas como SEC ID Nº 3-6.

2. El lentivirus recombinante de la reivindicación 1, lentivirus recombinante que se vuelve avirulento mediante la deleción de una cantidad suficiente del gen nef.

3. El lentivirus recombinante de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, que es un virus de la inmunodeficiencia humana recombinante.

4. El lentivirus recombinante de la reivindicación 3, siendo dicho virus de la inmunodeficiencia humana recombinante es VIH-1.

5. El lentivirus recombinante de la reivindicación 3, lentivirus recombinante que es VIH-1 vuelto avirulento mediante la deleción de una cantidad suficiente del gen nef.

6. Una vacuna que comprende un lentivirus recombinante según cualquiera de las reivindicaciones precedentes.

7. La vacuna de la reivindicación 6, comprendiendo dicha vacuna adicionalmente un coadyuvante.

8. La vacuna de la reivindicación 6 o la reivindicación 7 para uso en la prevención o el tratamiento de una infección lentivírica en un paciente necesitado de ello.