COMPOSICIONES Y CEPAS DEL VIRUS DEL SINDROME REPRODUCTIVO Y RESPIRATORIO.

Una composición inmunógena para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra la enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino,

dicha composición comprendiendo una cantidad eficaz de un virus del PRRS atenuado seleccionado del grupo que consiste en el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6231, el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6282 y combinaciones de los mismos; y un vehículo o disolvente farmacéuticamente aceptable

Campo de la Invención

La presente invención se refiere a dos cepas atenuadas del virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) y las composiciones inmunógenas que comprenden una o más cepas del virus atenuado del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV). Antecedentes de la Invención

El PRRS se reconoció por primera vez en los Estados Unidos en 1987. Se extendió rápidamente a través de todas las áreas principales de producción porcina de Norte América. Después apareció en Europa y hoy el PRRSV tiene una distribución casi mundial. Muchos productores porcinos, oficiales del gobierno y veterinarios creen que el PRRS es actualmente una de las amenazas económicas más serias afrontadas por las industrias porcinas en todo el mundo.

Como su nombre implica, el PRRS se caracteriza clínicamente por su capacidad para provocar fallo reproductivo en hembras preñadas, especialmente cuando inicialmente se infecta tarde en la gestación y enfermedad del tracto respiratorio en cerdos de todas las edades, pero más común y severo en cerdos jóvenes. La infección del PRRSV se piensa que también potencia los efectos de otros patógenos porcinos. En la base de estudios serológicos retrospectivos, también se ha hecho evidente que muchas infecciones con el PRRSV de porcinos son subclínicas o producen signos clínicos menos obvios. Por lo tanto, el PRRSV a menudo logra el acceso a una piara y se extiende extensivamente antes de que su presencia se detecte por primera vez.

El virus puede persistir en un hospedador infectado durante al menos varios meses. Dichos "vehículos" perpetúan la infección y hacen el control de la enfermedad sumamente difícil. Como una consecuencia, los medios más eficaces para reducir el impacto económico del PRRSV son vacunar (inmunizar) cerdos potencialmente susceptibles antes de que se expongan al virus de campo virulento.

Las vacunas atenuadas, (fabricadas por Boehingher Ingelheim) preparadas por cepas únicas del PRRSV, están disponibles en el mercado. Una está autorizada para usarse en cerdos entre 3 y 18 semanas de edad para la prevención de enfermedades del tracto respiratorio (Gorcyca et al., 1995). Una está autorizada para la pre-reproducción.

Se ha descrito otra vacuna atenuada para la prevención del fallo reproductivo (Hesse et al., 1996). Se prepara a partir de una cepa única del PRRSV y sólo se ha ensayado contra una única cepa del PRRSV. La cepa de desafío se describe como heteróloga en la base de la respuesta anamnésica de hembras de primera cría vacunadas siguiendo el desafío; no obstante, no se ha presentado otra evidencia para establecer que las dos cepas, es decir, la usada para la vacuna y la usada para el desafío de inmunidad, son genéticamente o antigénicamente distintas. El documento WO 00/65032 describe un método de atenuación, así como una cepa del PRRSV atenuada derivada de la cepa particularmente virulenta JA-142 (Ejemplo 1, p. 7, I. 5 -p. 10, I. 27).

Existen dos serotipos principales conocidos del PRRSV (Done et al., 1996). Uno (prototipo Lelystad) es representativo de al menos la mayoría de las cepas que se han aislado en Europa del Este. El otro (prototipo de ATCC 2332) es representativo de al menos la mayoría de las cepas aisladas en América del Norte y Asia. Existen también variantes antigénicas en los prototipos (Meng et al., 1995) y las diferencias de base de secuencia entre cepas aisladas en América del Norte han permitido su diferenciación (Wesley et al., 1996). SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Un objeto de la presente invención es proporcionar una composición inmunógena que protege un cerdo contra la enfermedad clínica provocada por el PRRSV. Las composiciones inmunógenas derivaron de dos cepas del PRRSV que se aislaron de cerdos afectados con el PRRSV en los Estados Unidos.

Otro objeto de la invención es proporcionar dos cepas atenuadas del PRRSV que serían útiles en una vacuna polivalente contra el PRRS. De esa manera, la invención proporciona:

1. Una composición inmunógena para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra una enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino, dicha composición comprende una cantidad eficaz de un virus del PRRS atenuado

seleccionado de un grupo que consiste en el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6281, el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6282 y combinaciones de los mismos; y un vehículo o un disolvente farmacéuticamente aceptable.

2. La composición inmunógena como se menciona anteriormente, en la que dicho virus es el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6281.

3. La composición inmunógena de lo que se menciona anteriormente, en la que dicho virus es el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6282.

4. Una composición inmunógena polivalente para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra una enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino, dicha composición comprende una cantidad eficaz de dos o más virus atenuados, que comprenden al virus del PRRS de ATCC PTA-6281 y al virus del PRRS de ATCC PTA-6282.

5. La composición inmunógena de lo que se menciona anteriormente, comprende adicionalmente un adyuvante.

6. El inmunógeno polivalente como se menciona anteriormente, comprende adicionalmente un adyuvante.

7. Un virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino atenuado PP5 como se representa por el depósito de ATCC Nº PTA-6282.

8. Un virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino atenuado LC13 como se representa por el depósito de ATCC Nº PTA-6281.

9. El uso de una composición inmunógena de acuerdo con cualquiera anteriormente mencionada o una composición inmunógena polivalente de acuerdo con 6. en la fabricación de un medicamento para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra una enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino.

DEPÓSITO DE MATERIAL BIOLÓGICO

Las cepas atenuadas PP5 y LC13 se depositaron el 4 de noviembre del 2004 bajo los términos del Tratado de Budapest en la American Type Culture Collection en Manassas, Virginia y se han asignado los Nº de Acceso de ATCC PTA-6282 y de ATCC PTA-6281, respectivamente. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

En el presente documento "composición inmunógena" se define en su amplio sentido para referirse a cualquier tipo de agente biológico en una forma administrable capaz de estimular una respuesta inmune en un animal. Una composición inmunógena puede componerse por el agente viral o el virus mismo o un componente inmunógeno (antigénico) del virus.

La composición inmunógena de la invención se preparó de cualquiera o más de las dos cepas atenuadas del PRRSV: PP5 y LC13. Cada cepa se ensayó individualmente por seguridad y por la capacidad de inducir una respuesta inmune y se contempla que una vacuna polivalente comprendida por las dos cepas sería al menos igual de segura y eficaz que cada composición monovalente y puede proporcionar incluso una inmunidad más amplia para cepas de campo virulentas del PRRSV.

Se seleccionaron dos cepas del PRRSV (cepas PP5 y LC13) para el desarrollo como composiciones inmunógenas. Cepa del PRRSV PP5

Un aislado virulento del virus del PRRS se obtuvo de muestras tisulares de un cerdo enfermo. Se inoculó un homogeneizado tisular del cerdo enfermo en macrófagos alveolares primarios y se detectó la presencia del virus por efectos citopáticos en cultivos inoculados pero no controlados. Posteriormente se demostró el virus aislado por reactividad con anticuerpos monoclonales específicos para el virus del PRRS por inmunofluorescencia indirecta. Las placas de 96 pocillos de células Marc145 confluentes se fijaron con acetona al 80% durante 10 minutos 2 días después de la infección con el virus. Después se incubaron las monocapas con anticuerpos monoclonales SDOW17 o VO17. Después del lavado, se detectó la reactividad del anticuerpo monoclonal con cada virus por incubación con IgG antiratón conjugada con isotiocianato de fluoresceína seguido por un lavado y el examen para fluorescencia por microscopía. Se observó una fluorescencia positiva con ambos anticuerpos monoclonales para el virus PP5. El virus PP5 se atenuó por pases sucesivos en cultivo tisular. El virus se pasó inicialmente por inoculación de cultivos primarios de macrófagos alveolares porcinos (SAM) (para el primer pase) y después por pases sucesivos en células Marc145 para un total de 81 pases. Durante este proceso, los clones del...

1. Una composición inmunógena para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra la enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino, dicha composición comprendiendo una cantidad eficaz de un virus del PRRS atenuado seleccionado del grupo que consiste en el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6231, el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6282 y combinaciones de los mismos; y un vehículo o disolvente farmacéuticamente aceptable.

2. La composición inmunógena de la reivindicación 1, en la que dicho virus es el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6281.

3. La composición inmunógena de la reivindicación 1, en la que dicho virus es el virus del PRRS atenuado de ATCC PTA-6282.

4. Una composición inmunógena polivalente para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra la enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino, dicha composición comprende una cantidad eficaz de dos o más virus atenuados, que comprende el virus del PRRS de ATCC PTA-6281 y el virus del PRRS de ATCC PTA-6282.

5. La composición inmunógena de cualquiera de las reivindicaciones 1-4, comprende adicionalmente un adyuvante.

6. La composición inmunógena polivalente de la reivindicación 5, comprende adicionalmente un adyuvante.

7. Un virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino atenuado PP5 como se representa por el depósito de ATCC Nº PTA-6282.

8. Un virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino atenuado LC13 como se representa por el depósito de ATCC Nº PTA-6281.

9. El uso de una composición inmunógena de acuerdo con cualquiera de

las reivindicaciones 1-4 o de una composición inmunógena polivalente de acuerdo con la reivindicación 6 en la fabricación de un medicamento para usarse en la inducción de una respuesta inmune protectora contra una enfermedad provocada por el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino.