METODO PARA DETECTAR INTERACCION PROTEINA-PROTEINA.
Un método para detectar una interacción entre una primera proteína de ensayo y una segunda proteína de ensayo,
que comprende: (a) proporcionar una célula huésped de levadura que contiene un gen indicador, en la que el gen indicador expresa una proteína detectable cuando el gen indicador es activado por una secuencia de aminoácidos que incluye un dominio de activación transcripcional cuando el dominio de activación transcripcional está suficientemente próximo al gen indicador; (b) proporcionar un primer gen híbrido que se expresa en la célula huésped de levadura, comprendiendo el primer gen híbrido una secuencia de ADN que codifica una primera proteína híbrida, comprendiendo la primera proteína híbrida: (i) un dominio de unión al ADN que reconoce un sitio de unión en el gen indicador en la célula huésped; y (ii) una primera proteína de ensayo o uno de sus fragmentos, en la que se va a ensayar la interacción con al menos una segunda proteína de ensayo o uno de sus fragmentos; (c) proporcionarun segundo gen híbrido que se expresa en la célula huésped de levadura, comprendiendo el segundo gen híbrido una secuencia de ADN que codifica una segunda proteína híbrida, comprendiendo la segunda proteína híbrida: (i) el dominio de activación transcripcional; y (ii) una segunda proteína de ensayo o uno de sus fragmentos, en la que se va a ensayar la interacción con la primera proteína de ensayo o uno de sus fragmentos; en la que la interacción entre la primera proteína de ensayo y la segunda proteína de ensayo en la célula huésped de levadura hace que el dominio de activación transcripcional active la transcripción del gen indicador; (d) introducir el segundo gen híbrido en una cepa de célula huésped de levadura de un primer tipo de unión y subsiguientemente introducir dichas células en un medio de ordenamiento, creando de este modo una placa de biblioteca maestra; (e) introducir las células de la placa de biblioteca maestra en un segundo medio de ordenamiento que es un medio de ordenamiento para medios líquidos, creando de este modo un conjunto de unión; (f) introducir el primer gen híbrido en una cepa de célula huésped de levadura del tipo de unión opuesto a (d) y subsiguientemente introducir dicha célula en el conjunto de unión, permitiendo de este modo que se produzca la unión en un medio líquido; y (g) elegir el producto de la interacción de los genes primero y segundo.
Tipo: Resumen de patente/invención.
Solicitante: GLAXO GROUP LIMITED.
Nacionalidad solicitante: Reino Unido.
Dirección: GLAXO WELLCOME HOUSE BERKELEY AVENUE,GREENFORD, MIDDLESEX UB6 ONN.
Inventor/es: BUCKHOLZ, RICHARD GORDON, WEINER,MICHAEL PHILLIP.
Fecha de Publicación: .
Fecha Concesión Europea: 14 de Marzo de 2007.
Clasificación PCT:
- C12N1/19 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
- C12N15/09 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Tecnología del ADN recombinante.
- C12N15/10 C12N 15/00 […] › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
- C12N15/64 C12N 15/00 […] › Métodos generales para la preparación del vector, para su introducción en la célula o para la selección del huésped que contiene el vector.
- C12N15/81 C12N 15/00 […] › para levaduras.
- C12Q1/02 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen microorganismos vivos.
- C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
- G01N33/50 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
- G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
- G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
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