METODO PARA LA SINTESIS DE FRAGMENTOS DE DNA.

Un método para fabricar una molécula de ácido nucleico, que comprende las etapas de:

a) proporcionar un oligonucleótido que se prepara mediante las siguientes etapas: aa) acoplar un oligonucleótido por uno de sus extremos a una matriz sólida, en el que el acoplamiento tiene lugar a través de una modificación y el oligonucleótido comprende una secuencia de reconocimiento para una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, ab) añadir un nuevo oligonucleótido, al menos parcialmente bicatenario, que lleva una secuencia de reconocimiento para una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, en el que la secuencia de reconocimiento es diferente de la de la etapa aa) y en el que este oligonucleótido no se puede unir a la matriz, ac) ligar los oligonucleótidos de la etapa aa) y de la etapa ab) en la orientación definida por el bloqueo de los extremos que no se han de ligar, ad) extraer los reaccionantes y las enzimas no gastados, ae) escindir el producto de la ligación de la etapa ac) con una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, en el que la escisión tiene lugar en la secuencia de ácido nucleico del oligonucleótido de la etapa ab), af) separar la mezcla de reacción del oligonucleótido extendido de la etapa aa) según se ha obtenido en la etapa ae), ag) repetir las etapas de la ab) a la af) al menos una vez, b) proporcionar un nuevo oligonucleótido que se prepara mediante las etapas de: ba) acoplar un oligonucleótido por uno de sus extremos a una matriz sólida, en el que el acoplamiento tiene lugar a través de una modificación; y el oligonucleótido comprende una secuencia de reconocimiento para una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, bb) añadir un nuevo oligonucleótido, al menos parcialmente bicatenario, que lleva una secuencia de reconocimiento para una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, en el que la secuencia de reconocimiento es diferente de la de la etapa ba) y en el que este oligonucleótido no se puede unir a la matriz, bc) ligar los oligonucleótidos de la etapa ba) y de la etapa bb) en la orientación definida por el bloqueo de los extremos que no se han de ligar, bd) extraer los reaccionantes y las enzimas no gastados, be) escindir el producto de la ligación de la etapa bc) con una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento; en el que la escisión tiene lugar en el oligonucleótido de la etapa bb), bf) separar la molécula de ácido nucleico así extendida de la mezcla de reacción, bg) repetir las etapas de la bb) a la bf) al menos una vez, en el que después de la última ligación de la etapa bc) y de la retirada de los reaccionantes así como de las enzimas no gastadas, el producto de la ligación se corta con una enzima de restricción de tipo IIS, en el que la escisión tiene lugar en el oligonucleótido de la etapa ba), c) ligar los oligonucleótidos de la etapa a) y de la etapa b) en la orientación definida por el bloqueo de los extremos que no se han de ligar, d) extraer los reaccionantes y las enzimas no gastados, e) escindir el producto de la ligación de la etapa c) con una enzima de restricción de tipo IIS que corta por fuera de su secuencia de reconocimiento, en el que la escisión tiene lugar en el oligonucleótido de la etapa a) o b), f) separar la molécula de ácido nucleico así extendida de la mezcla de reacción.