Receptor de quimioquinas 88C y sus anticuerpos.

La presente invención se refiere a receptores de quimioquinas,

ácidos nucléicos que codifican receptores de quimioquinas, ligandos de receptores de quimioquinas, moduladores de la actividad de receptores de quimioquinas, anticuerpos que reconocen quimioquinas y receptores de quimioquinas, métodos para la identificación de ligandos y moduladores de receptores de quimioquinas, métodos para la producción de receptores de quimioquinas y métodos para la producción de anticuerpos que reconocen receptores de quimioquinas.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US1996/020759.

Solicitante: EUROSCREEN S.A..

Inventor/es: GRAY, PATRICK, W., SCHWEICKART, VICKI, L., RAPORT, CAROL, J.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • A61K38/00 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA.A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE.A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00).
  • A61K39/395 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Anticuerpos (aglutininas A61K 38/36 ); Inmunoglobulinas; Inmunosuero, p. ej. suero antilinfocitario.
  • A61K45/00 A61K […] › Preparaciones medicinales que contienen ingredientes activos no previstos en los grupos A61K 31/00 - A61K 41/00.
  • A61P17/06 A61 […] › A61P ACTIVIDAD TERAPEUTICA ESPECIFICA DE COMPUESTOS QUIMICOS O DE PREPARACIONES MEDICINALES.A61P 17/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas dermatológicos. › para el tratamiento de la psoriasis.
  • A61P19/02 A61P […] › A61P 19/00 Medicamentos para el tratamiento de problemas del esqueleto. › para problemas de las articulaciones, p.ej. artritis, artrosis.
  • A61P29/00 A61P […] › Agentes analgésicos, antipiréticos o antiinflamatorios que no actúan sobre el sistema nervioso central, p. ej. agentes antirreumáticos; Antiinflamatorios no esteroideos (AINEs).
  • A61P31/12 A61P […] › A61P 31/00 Antiinfecciosos, es decir antibióticos, antisépticos, quimioterápicos. › Antivirales.
  • A61P31/18 A61P 31/00 […] › para el VIH.
  • A61P7/02 A61P […] › A61P 7/00 Medicamentos para el tratamiento de trastornos de la sangre o del fluido extracelular. › Agentes antitrombóticos; Anticoagulantes; Inhibidores de la agregación plaquetaria.
  • C07K14/16 QUIMICA; METALURGIA.C07 QUIMICA ORGANICA.C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › VIH-1.
  • C07K14/705 C07K 14/00 […] › Receptores; Antígenos celulares de superficie; Determinantes celulares de superficie.
  • C07K14/715 C07K 14/00 […] › para citoquinas; para linfoquinas; para interferones.
  • C07K16/18 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales animales o humanos.
  • C07K16/24 C07K 16/00 […] › contra citoquinas, linfoquinas o interferones.
  • C07K16/28 C07K 16/00 […] › contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie.
  • C12N1/15 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/19 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N1/21 C12N 1/00 […] › modificados por la introducción de material genético extraño.
  • C12N15/02 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Preparación de células híbridas por fusión de dos o más células, p. ej. fusión de protoplastos.
  • C12N15/09 C12N 15/00 […] › Tecnología del ADN recombinante.
  • C12N15/12 C12N 15/00 […] › Genes que codifican proteínas animales.
  • C12N5/10 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus.
  • C12P21/02 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA.C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › que tienen una secuencia conocida de varios aminoácidos, p. ej. glutation.
  • C12P21/08 C12P 21/00 […] › Anticuerpos monoclonales.
  • C12Q1/02 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen microorganismos vivos.
  • C12Q1/68 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen ácidos nucleicos.
  • C12Q1/70 C12Q 1/00 […] › en los que intervienen virus o bacteriófagos.
  • C12R1/91 C12 […] › C12R SISTEMA DE INDEXACION ASOCIADO A LAS SUBCLASES C12C - C12Q, RELATIVO A LOS MICROORGANISMOS.C12R 1/00 Microorganismos. › Líneas celulares.
  • C12R1/93 C12R 1/00 […] › Virus animales.
  • G01N33/15 FISICA.G01 METROLOGIA; ENSAYOS.G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › preparaciones medicinales.
  • G01N33/50 G01N 33/00 […] › Análisis químico de material biológico, p. ej. de sangre o de orina; Ensayos mediante métodos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas con grupos coordinadores; Ensayos inmunológicos (procedimientos de medida o ensayos diferentes de los procedimientos inmunológicos en los que intervienen enzimas o microorganismos, composiciones o papeles reactivos a este efecto, procedimientos para preparar estas composiciones, procedimientos de control sensibles a las condiciones del medio en los procedimientos microbiológicos o enzimáticos C12Q).
  • G01N33/53 G01N 33/00 […] › Ensayos inmunológicos; Ensayos en los que interviene la formación de uniones bioespecíficas; Materiales a este efecto.
  • G01N33/566 G01N 33/00 […] › utilizando un soporte específico o proteínas receptoras como reactivos para la formación de uniones por ligando.
  • G01N33/569 G01N 33/00 […] › para microorganismos, p. ej. protozoarios, bacterias, virus.

PDF original: ES-2255716_T3.pdf

 


Fragmento de la descripción:

Receptor de quimioquinas 88C y sus anticuerpos.

La presente solicitud es continuación, en parte, de la solicitud de patente US 08/661, 393 de 7 de Junio de 1996, que era a su vez continuación, en parte, de la solicitud de patente US 08/575, 967 de 20 de diciembre de 1995.

Campo de la invención La presente invención se refiere en general a las vías de transducción de señales. Más particularmente, la presente invención se refiere a receptores de quimioquinas, ácidos nucleicos que codifican receptores de quimioquinas, ligandos de receptores de quimioquinas, moduladores de la actividad de receptores de quimioquinas, anticuerpos que reconocen quimioquinas y receptores de quimioquinas, métodos para la identificación de ligandos y moduladores de receptores de quimioquinas, métodos para la producción de receptores de quimioquinas y métodos para la producción de anticuerpos que reconocen receptores de quimioquinas.

Antecedentes de la invención Los recientes avances en la biología molecular han conducido a una apreciación del papel central que desempeñan en los procesos biológicos las vías de transducción de señales. Estas vías comprenden un dispositivo central, mediante el cual se comunican las células individuales en un organismo multicelular, coordinando los procesos biológicos. Véase Springer, Cell 76:301-314 (1994) , Tabla I, como modelo. Un ramal de las vías de transducción de señales, definido por la participación celular de nucleótido de guanina que fija proteínas (proteínas G) , afecta a una amplia gama de procesos biológicos.

Lewin, GENES V 319-348 (1994) trata en general de las vías de transducción de señales de proteína G que hacen intervenir, como mínimo, los siguientes componentes: una señal extracelular (p. ej. neuro-transmisores, hormonas peptídicas, moléculas orgánicas, ligeras u olorosas) , un receptor que reconoce señales (receptor acoplado con proteína G, mencionado en Probst et al., DNA and Cell Biology 11:1-20 [1992] y también conocido como GPR o GPCR) y una proteína heterotrimérica intracelular fijadora de GTP o proteína G. En particular, estas vías han llamado la atención debido a su papel en la regulación del “trafficking” de glóbulos blancos o leucocitos.

Los leucocitos comprenden un grupo de tipos de células sanguíneas móviles, que incluyen los granulocitos (es decir neutrófilos, basofílos y eosinófilos) , linfocitos y monocitos. Una vez movilizadas y activadas, estas células intervienen principalmente en la defensa del cuerpo contra materias extrañas. Esta tarea es complicada debido a la diversidad de procesos normales y patológicos en los que participan los leucocitos. Por ejemplo, intervienen leucocitos en la respuesta inflamatoria normal a la infección. Los leucocitos también están involucrados en toda una serie de inflamaciones patológicas. Para tener una visión general, véase Schall et al., Curr. Opin. Immunol, 6:865873 (1994) . Además, cada uno de estos procesos puede suponer contribuciones únicas, en grado, clase y duración,

por parte de cada uno de los tipos celulares de leucocitos.

Al estudiar estas reacciones inmunológicas, los investigadores se centraron inicialmente en las señales que actúan sobre los leucocitos, arguyendo que se precisa una señal para provocar cualquier forma de respuesta. Murphy, Ann. Rev. Immunol. 12:593-633 (1994) ha estudiado los elementos de un grupo importante de señales de leucocitos,

las señales de péptidos. Un tipo de señal peptídica comprende las quimioquinas (citoquinas quimio-atractoras) , designadas intercrinas en Oppenheim et al., Ann. Rev. Immunol. 9:617648 (1991) . Además de Oppenheim et al., Baggiolini et al., Advances in Immunol. 55:97-179 (1994) , documentan el creciente número de quimioquinas que se han identificado y sometido a análisis genéticos y bioquímicos.

Las comparaciones de las secuencias de aminoácidos de las quimioquinas conocidas han conducido a un esquema clasificatorio que divide las quimioquinas en dos grupos: el grupo a, caracterizado por un solo aminoácido que separa las primeras dos cisteínas (CXC; término N como referente) y el grupo º, donde estas cisteínas son adyacentes (CC) . Véase Baggiolini et al., véase anteriormente. Se han encontrado correlaciones entre las quimioquinas y los tipos particulares de células leucocíticas que responden a estas señales. Schall et al., véase 55 anteriormente, informan que las quimioquinas CXC afectan generalmente los neutrófilos; las quimioquinas CC tienden a afectar los monocitos, linfocitos, basofílos y eosinófilos. Por ejemplo, Baggiolini et al., véase anteriormente, indican que RANTES, una quimioquina CC, funciona como quimioatractor para monocitos, linfocitos (por ejemplo células T de la memoria) basofilos y eosinófilos, pero no para los neutrófilos, mientras que induce la liberación de histamina de los basofílos.

Cocchi et al., Science, 270:1811-1815 (1995) han mostrado recientemente que las quimioquinas son supresoras de la proliferación de VIH. Cocchi et al., demostraron que RANTES, MIP-1a y MIP-1º eran supresores de VIH-1, VIH2 y de infección por VIS de una línea celular CD4+ designada PM1 y de células mononucleares de la sangre periférica humana principal.

Recientemente sin embargo, la atención se ha centrado en los receptores celulares que fijan las quimioquinas, porque las quimioquinas extracelulares parecen contactar células de forma indiscriminada y por consiguiente carecen de la especificidad necesaria para regular los tipos celulares de leucocito individual.

Murphy, véase anteriormente, informa que la superfamilia GPCR de receptores incluye la familia de receptores de quimioquinas. La estructura típica del receptor de quimioquinas incluye un dominio de unión de quimioquina extracelular situado cerca del término N, seguido de siete regiones espaciadas de aminoácidos predominantemente hidrófobos, capaces de formar hélices a que abarcan la membrana. Entre cada uno de los dominios helicoidales a se encuentran localizados dominios hidrófilos, alternativamente, en los espacios intra- o extra-celulares. Estas características imprimen una conformación de serpentín al receptor de quimioquinas, incrustado en la membrana. El tercer bucle intercelular suele interactuar con proteínas G. Además, Murphy, véase anteriormente, señaló que el término carboxilo intracelular es también capaz de Interactuar con proteínas G.

Los primeros receptores de quimioquinas analizados mediante técnicas de clonación molecular fueron los dos receptores neutrófilos para IL8 humano, una quimioquina CXC. Holmes et al., Science 253:178-1280 (1991) y Murphy et al., Science 253:1280-1283 (1991) comunicaron la clonación de estos dos receptores para IL8. Lee et al., J. Biol. Chem. 267:16283-16287 (1992) analizó los ADNc que codifican estos receptores y encontró un 77% de identidad de aminoácidos entre los receptores codificados, mostrando cada receptor características de la familia de receptores acoplada con la proteína G. Uno de estos receptores es específico de IL-8, mientras que los otros fijan y señalizan en respuesta a IL-8, gro/MGSA, y NAP-2. La manipulación genética de los genes que codifican receptores IL-8 ha contri- buido a nuestra comprensión de los papeles biológicos que desempeñan estos receptores. Por ejemplo, Cacalano et al., Science 265:682-684 (1994) informan que la deleción del receptor IL-8 homólogo en el ratón dio como resultado un fenotipo pleiotrópico que apuntaba a linfadenopatia y espleno megalia. Además, un estudio de mutaciones “missense” descrito en Leong et al., J. Biol. Chem. 269-19343-19348 (1994) reveló la presencia de aminoácidos en el receptor IL-8, determinantes para la unión de IL-8. Los experimentos de permutación de dominio tratados en Murphy, véase anteriormente, implicaron el dominio extracelular amino terminal como determinante de la especificidad de unión.

Se han identificado y clonado también varios receptores para quimioquinas CC. CCCKR1 fija tanto MIP-1a como RANTES y causa un flujo de iones de calcio intracelular en respuesta a ambos ligandos. Charo et al., Proc Natl. Acad. Sci. (USA) 91:2752-2756 (1994) comunicó que otro receptor de quimioquinas CC, MCP-R1 (CCCKR2) , es codificado por un solo gen que produce dos variantes de empalme (splice) que difieren en sus dominios terminales carboxílicos. Este receptor fija y responde a MCP-3 además de a MCP-1.

También se ha identificado un receptor promiscuo que fija tanto quimioquinas CXC como CC. Este receptor fue identificado inicialmente en glóbulos rojos y Horuk et al., Science 261:1182-1184 (1993) comunica que fija IL-8, NAP-2, GRO-a, RANTES Y MCP-1. El receptor de quimioquinas de eritrocito comparte aprox. el... [Seguir leyendo]

 


Reivindicaciones:

1. Polinucleótido purificado y aislado, que codifica la secuencia de aminoácidos del receptor de quimioquinas 88C que aparece en SEC ID nº 2.

2. Polinucleótido purificado y aislado, que codifica la secuencia de aminoácidos del receptor de quimioquinas de macaco 88C, que aparece en SEC ID Nº20.

3. Polinucleótido según la reivindicación 1 ó 2, donde el polinucleótido es ADN.

4. Polinucleótido según la reivindicación 3, donde el polinucleótido es ADN genómico, ADNc o un ADN total o parcialmente sintetizado químicamente.

5. Un ADNc según la reivindicación 4, que comprende el ADN de SEC ID nº 1.

6. Un ADNc según la reivindicación 4, que comprende el ADN de SEC ID nº 19.

7. Un vector ADN biológicamente funcional, que comprende un ADN según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6.

8. Un vector según la reivindicación 7, donde dicho ADN está operativamente ligado a una secuencia de control de expresión de ADN.

9. Una célula huésped establemente transformada o transfectada con un ADN según cualquiera de las reivindicaciones 3 a 6, de modo que permita la expresión del citado ADN.

10. Método para producir un polipéptido 88C o un polipéptido de macaco 88C que comprende las etapas de cultivar una célula huésped adecuada según la reivindicación 9 en un medio adecuadamente nutriente y aislar dicho polipéptido de la citada célula o medio.

11. Un transcripto ARN del polinucleótido de la reivindicación 3 ó 4.

12. Un polinucleótido que codifica un polipéptido 88C, donde dicho polipéptido se hibrida en condiciones de hibridación rigurosas en el polinucleótido de SEC ID nº 1.

13. Un polipéptido purificado y aislado, que comprende la secuencia de aminoácidos 88C de receptor de quimio- quinas que aparece en SEC ID nº 2.

14. Un polinucleótido que codifica un polipéptido 88C de macaco, donde dicho polinucleótido se hibrida en condiciones de hibridación rigurosas en el polinucleótido de SEC ID nº 19.

15. Un polipéptido purificado y aislado, que comprende la secuencia de aminoácidos 88C de receptores de quimioquinas de macaco que aparece en SEC ID nº 20.

16. Método in vitro de cribado de un modulador de infección por VIH que comprende las siguientes etapas:

(a) poner en contacto una primera composición que comprende un receptor 88C de mamífero de la SEC ID nº 2 ó 20

o codificado por el polinucleótido de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, 12 ó 14, con una segunda composición que comprende una proteína envoltura de virus de inmunodeficiencia humana (VIH) en presencia y en ausencia de un compuesto;

(b) medir la interacción del receptor 88C de mamífero con la proteína envoltura VIH en presencia y en ausencia del compuesto; y

(c) cribado de un modulador de infección por VIH, donde la interacción reducida o incrementada del receptor 88C de mamífero con el VIH, en presencia del compuesto con respecto a lo que ocurre en ausencia del compuesto, es indicadora de que el compuesto es un modulador de infección por VIH.

17. Método según la reivindicación 16, donde el receptor 88C de mamífero comprende 88C humano que tiene la secuencia de aminoácido que aparece en SEC ID nº 2.

18. Método según la reivindicación 16 ó 17, donde la primera composición comprende una célula que ha sido modificada recombinantemente para expresar el receptor 88C de mamífero en su superficie.

19. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, donde la segunda composición comprende un virus de inmunodeficiencia humana.

20. Método según cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, donde la etapa de medida comprende la medida de la infección por VIH de la célula.


 

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