Detección de secuencias de ácidos nucleicos objetivo mediante una escisión y una hibridación de un PO.

Un método para detectar una secuencia de ácidos nucleicos objetivo a partir de un ADN o de una mezcla de ácidos nucleicos mediante un ensayo de POCH (escisión e hibridación de un PO) sobre un sustrato sólido,

que comprende:

(a) hibridar la secuencia de ácidos nucleicos objetivo con un oligonucleótido secuencia arriba y un oligonucleótido de sondeo (PO); en el que el oligonucleótido secuencia arriba comprende una secuencia de nucleótidos de hibridación complementaria de la secuencia de ácidos nucleicos objetivo; el PO comprende una porción de direccionamiento que comprende una secuencia de nucleótidos de hibridación complementaria de la secuencia de ácidos nucleicos objetivo; el PO tiene un único marcador; el oligonucleótido secuencia arriba está ubicado secuencia arriba del PO; el oligonucleótido secuencia arriba o la hebra extendida induce la escisión del PO por parte de una enzima que tiene una actividad de nucleasa en 5';

(b) poner en contacto el resultante de la etapa (a) con la enzima que tiene la actividad de nucleasa en 5' en unas condiciones para la escisión del PO; en el que cuando el PO está hibridado con la secuencia de ácidos nucleicos objetivo, el PO es escindido por la enzima que tiene la actividad de nucleasa en 5' para producir un fragmento que contiene un único marcador;

(c) llevar a cabo una reacción de hibridación poniendo en contacto el resultante de la etapa (b) con un oligonucleótido de captura (CO) inmovilizado sobre el sustrato sólido; en el que el CO comprende una secuencia de nucleótidos hibridable con el PO; en el que la reacción de hibridación se lleva a cabo en unas condiciones tales que el fragmento que contiene un único marcador no está hibridado con el CO, y un PO no escindido está hibridado con el CO para formar un dúplex de PO no escindido/CO; y

(d) detectar el hecho de la escisión del PO mediante la medición de una señal del marcador único en el sustrato sólido; mediante lo cual, el hecho de la escisión del PO indica la presencia de la secuencia de ácidos nucleicos objetivo.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/KR2012/003497.

Solicitante: SEEGENE, INC..

Nacionalidad solicitante: República de Corea.

Dirección: 8Fl, 9Fl Taewon Bldg. 65-5, Bangi-dong Songpa-gu Seoul 138-050 REPUBLICA DE COREA.

Inventor/es: LEE,YOUNG JO, CHUN,Jong-Yoon.

Fecha de Publicación: 1 de Noviembre de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/10 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Procedimientos para el aislamiento, la preparación o la purificación de ADN o ARN (preparación química de ADN o ARN C07H 21/00; preparación de polinucleótidos no estructurales a partir de microorganismos o con la ayuda de enzimas C12P 19/34).
C12N15/11 C12N 15/00 […] › Fragmentos de ADN o de ARN; sus formas modificadas (ADN o ARN no empleado en tecnología de recombinación C07H 21/00).
C12Q1/68 C12 […] › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2657906_T3.pdf

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